談曉梅，王亞軻，牛德彪，惠旭潔，韓若羽，鄭吉昌，柳東陽，楊雪峰

(河南科技學(xué)院 動(dòng)物科技學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453003)

骨骼作為脊椎動(dòng)物體內(nèi)礦化組織，具有硬度和彈性，在自然環(huán)境中可以長(zhǎng)期保存，是解剖學(xué)、古生物學(xué)、進(jìn)化生物學(xué)等學(xué)科的重要教學(xué)工具。保存良好的骨骼標(biāo)本是研究脊椎動(dòng)物的生命演化歷程、探索脊椎動(dòng)物之間同功和同源器官變化的直觀材料。在動(dòng)物解剖學(xué)的傳統(tǒng)教學(xué)中，課堂講授多以文字描述和圖片講解為主，授課過程較抽象，致使學(xué)生對(duì)課程內(nèi)容理解困難，學(xué)習(xí)興趣不高，教學(xué)效果不夠理想[1]。動(dòng)物骨骼標(biāo)本作為形象、直觀的教學(xué)材料，其可視性強(qiáng)，在活躍課堂氣氛、增強(qiáng)學(xué)生的理解能力等方面具有明顯的促進(jìn)作用，有助于學(xué)生及時(shí)掌握每種骨的名稱、位置、形態(tài)、組成和功能等。

動(dòng)物骨骼標(biāo)本制作的方法主要有土埋法、蟲蝕法、漚制法、煮制法及晾曬法等[2]，這些方法普遍具有制作步驟較繁瑣、用時(shí)較長(zhǎng)、標(biāo)本質(zhì)量差等缺點(diǎn)。筆者以雄性成年健康的雞為試驗(yàn)動(dòng)物，采用化學(xué)腐蝕法制作了雞的全身骨骼標(biāo)本。

1 材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

雄性白羽肉雞，6周齡，1.65 kg，由河南科技學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 主要試劑

NaOH，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)。H2O2，鄭州派尼化學(xué)試劑廠生產(chǎn)。洗潔精，廣州立白企業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn)。粘鞋膠，臺(tái)州路橋特爾特膠粘劑廠生產(chǎn)。

2 制作方法

2.1 處死

首先拍攝正常姿態(tài)的雞只照片，以備后期整理骨骼時(shí)作為參考，然后采用口腔內(nèi)橋靜脈放血法處死雞只。

2.2 剝皮

將雞置于80～85 ℃熱水中浸泡，注意及時(shí)翻動(dòng)，褪干凈全身被毛并將全身被皮剝?nèi)ァ?/p>

2.3 去內(nèi)臟

雞只仰臥，使用手術(shù)剪從肛門前1～2 cm處沿腹中線剪開腹壁肌肉至胸骨龍骨突前，然后沿最后一對(duì)肋骨的后緣向一側(cè)切開，此時(shí)露出胸腔和腹腔的內(nèi)臟器官,把內(nèi)臟器官逐一摘除后用清水沖洗干凈[2]。

2.4 剔肉

初步粗剔只需把大塊肌肉基本剔除即可。將去除內(nèi)臟的雞放在解剖盤中，先從龍骨突一側(cè)小心切除胸大肌和胸小肌，然后依次剔掉前肢骨、后肢骨上的大塊肌肉。粗剔完成后換用小解剖剪進(jìn)行細(xì)剔。將骨頭上剩余的細(xì)肉用小解剖剪盡可能剔除，剩余殘肉與骨骼黏附較緊，使用牙刷和鑷子清理骨骼表面，最后用清水沖洗殘?jiān)黐3]。

2.5 拆骨

把雞骨骼整體拆分為頭骨、軀干骨、前肢骨、后肢骨四部分。首先，從頭部和頸部連接處把頭與頸部拆開;其次，把前肢骨(雞翅)和后肢骨分別拆掉，前肢骨拆分為肩帶部、臂部、前臂部、前腳部，后肢骨拆分為骨盆帶、股部、小腿部和后腳部。一定要注意區(qū)分前后肢的左右。為了方便記憶，可以用紗布包住，并用標(biāo)簽進(jìn)行標(biāo)記。剩余部分即為軀干骨，拆分為頸部骨、胸部骨、腰薦部骨和尾部骨。

2.6 腐蝕

將各部位骨分別浸泡在不同濃度的NaOH溶液內(nèi)處理不同時(shí)間(表1)。觀察骨骼的變化,處理時(shí)間到時(shí)把骨及時(shí)撈出，用自來水沖洗后再用刷子刷洗粘在骨上的肉。用解剖針把股骨鉆孔，再用10 mL注射器吸取自來水反復(fù)沖刷，把骨腔內(nèi)的骨髓清洗干凈。

表1 不同部位骨骼的處理濃度和時(shí)間

2.7 脫脂

骨骼帶有較多油脂，若要長(zhǎng)期保存，必須進(jìn)行脫脂。本試驗(yàn)采用生活中常用的洗潔精脫去油脂。將腐蝕好的骨骼用清水洗干凈并晾干，然后浸入10%洗潔精水溶液中浸泡12 h，注意溶液一定要淹沒骨骼。

2.8 漂白

將脫脂后的骨骼先放入清水中洗干凈并晾干，然后放入5%H2O2溶液中浸泡2～7 h。不同骨骼漂白所需要的時(shí)間不同，因此要時(shí)刻注意觀察骨骼的變化。為盡量避免連接關(guān)節(jié)的軟骨和韌帶斷裂而造成骨骼散落[4-5]，要及時(shí)收取骨骼。

2.9 串裝

骨骼漂白后用清水沖洗，撈出放在通風(fēng)陰涼處晾干，并按骨骼的正常結(jié)構(gòu)將不同部位的骨擺放在一起。首先，量取雞的長(zhǎng)寬高，按此準(zhǔn)備標(biāo)本架。后肢骨用鋼絲串起并按照雞的正常姿態(tài)折成一定的角度。椎骨從后向前串連，首先由尾椎穿入鋼絲，經(jīng)腰薦骨、胸椎穿入頸椎，最后從第一頸椎處穿入顱骨枕骨大孔，將鋼絲尾端向上折起，以防脫出，之后再用粘鞋膠將頭骨和第一頸椎粘接，再按家雞站立姿勢(shì)安裝前、后肢骨[6]，最后，將肋骨按擺放順序用細(xì)鐵絲和粘鞋膠固定于胸椎上，同樣將胸骨固定在肋骨上。

2.10 固定

將已經(jīng)串裝成型的骨骼標(biāo)本固定在木板上。在頭頸部以及肋骨中間各用一根細(xì)木棍支撐，防止骨骼塌陷。

3 結(jié)果

制作的雞全身骨骼標(biāo)本解剖結(jié)構(gòu)完整、形態(tài)逼真、立體感強(qiáng)、骨塊潔白、自然美觀(圖1)、易于保存、經(jīng)濟(jì)實(shí)用。

圖1 雞的全身骨骼標(biāo)本

4 討論

4.1 試驗(yàn)雞的選擇

制作雞全身骨骼標(biāo)本時(shí)應(yīng)選擇品種、性別、年齡、體重等適宜的雞。品種方面選用蛋雞較好。性別以雄性為佳，雄性骨骼強(qiáng)健，做出的骨骼標(biāo)本質(zhì)量較好。年齡以成年較好，因?yàn)橛g雞的骨骼發(fā)育未完成，骺軟骨還未形成骺線，干骺端未能愈合，制作過程中容易發(fā)生干骺分離[7]，從而影響骨骼標(biāo)本的整體質(zhì)量，但是也不能選擇年齡過大的雞，因?yàn)檫@種雞普遍會(huì)出現(xiàn)骨質(zhì)疏松，且紅骨髓含量過少，將導(dǎo)致做出的骨骼標(biāo)本色澤偏黃，保存時(shí)間過長(zhǎng)還會(huì)發(fā)霉變黑。體重適中，太肥的雞脂肪較多，不好處理，太瘦的雞骨骼發(fā)育不良，做出的標(biāo)本質(zhì)量較差。本試驗(yàn)就地取材，選用的是學(xué)院其他課程實(shí)驗(yàn)所剩余的肉雞，變廢為寶，節(jié)約了試驗(yàn)成本。

4.2 雞的處死方法

處死雞要選擇合適的方法，以保證雞全身骨骼的完整性，不能夠損傷任何一處軟骨，所以不能棒擊。注射藥物致死或者使用乙醚使其窒息而死可能會(huì)影響到骨骼的質(zhì)量，且在操作中存在安全隱患。頸靜脈放血的處死辦法既可保證雞骨骼的完整，又可防止骨內(nèi)淤血[2, 8]。本試驗(yàn)采用切斷口腔橋靜脈放血的方法處死雞只，保存了雞身體的完整。

4.3 腐蝕

傳統(tǒng)的腐蝕方法主要為水煮法，此方法只能去除骨骼表面的肌肉，而且不好把控水煮時(shí)間，時(shí)間過短肌肉難以剔除，時(shí)間過長(zhǎng)又容易損傷骨骼。本試驗(yàn)采用NaOH溶液浸泡腐蝕法代替?zhèn)鹘y(tǒng)水煮法處理骨骼標(biāo)本。NaOH一方面能腐蝕各處殘肉，另一方面能水解脂肪組織，水解產(chǎn)物經(jīng)沖洗即可[2,9]。該處理方式對(duì)環(huán)境破壞較小，不會(huì)產(chǎn)生有害氣體[10]。由于不同位置的骨密度和硬度具有差異，所用的NaOH溶液濃度也不同，濃度過高，易導(dǎo)致骨質(zhì)損傷，骨骼表面出現(xiàn)許多針尖樣的小孔，濃度過低，骨膜上的碎肉及軟組織的腐蝕效果較差，不易剔除[11]。本試驗(yàn)采用低濃度NaOH溶液腐蝕的方法不僅操作簡(jiǎn)單，時(shí)間短暫，安全性高，對(duì)骨質(zhì)的損傷小，而且還有少許脫脂的效果。

4.4 脫脂

制作完成的骨骼標(biāo)本若想長(zhǎng)久保存，必須進(jìn)行徹底脫脂。脫脂不完全，時(shí)間長(zhǎng)了骨骼會(huì)溢出油脂，散發(fā)腐臭味。實(shí)踐中，常用二甲苯、汽油、乙醚等有機(jī)溶劑作為脫脂劑[12]，這幾種有機(jī)溶劑去除油脂的能力較好，但不容易把控，很容易過度脫脂，會(huì)出現(xiàn)骨質(zhì)流失、骨骼酥脆、不易保存等問題，且有機(jī)溶劑危害人類健康并污染環(huán)境。本試驗(yàn)使用洗潔精進(jìn)行脫脂處理，不但脫脂效果好、成本低廉、無污染，而且較其他脫脂方法更安全。

4.5 漂白

漂白骨骼的目的是顯現(xiàn)骨骼鈣鹽白色，增加美觀度。漂白劑主要有H2O2、過氧化鈉、過氧化苯甲酰、次氯酸鈉、84消毒液和硫磺等[13]，尤以H2O2最為常用，其漂白原理是H2O2釋放出的活性氧能破壞骨中原有色素的共軛狀態(tài)，使其脫離骨骼，形成水溶物而漂白[2, 14]。經(jīng)過漂白后的骨骼標(biāo)本色澤均勻，骨色潔白，可以長(zhǎng)期保存。骨骼標(biāo)本漂白的難點(diǎn)在于控制藥物的濃度和時(shí)間，濃度高或處理時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)骨質(zhì)本身造成損傷，脆性增加，不易保存；濃度低或時(shí)間短，骨骼附著的雜物處理不徹底，標(biāo)本白度不夠，達(dá)不到預(yù)期效果。本試驗(yàn)采用5%H2O2進(jìn)行漂白，并隨時(shí)根據(jù)骨骼的潔白度撈出[8, 9]。該方法既保護(hù)了禽類細(xì)小骨骼的骨質(zhì)，也使得大塊骨骼漂白完全。在化學(xué)處理后，將標(biāo)本置于陽光下晾曬，可充分利用太陽光中的紫外線對(duì)骨塊繼續(xù)漂白，會(huì)使標(biāo)本白色更純凈，外觀更悅目。

4.6 標(biāo)本的日常保養(yǎng)和維護(hù)

為長(zhǎng)期保存骨骼標(biāo)本，標(biāo)本制作完成后，將其放入密封標(biāo)本盒內(nèi)，同時(shí)標(biāo)記上標(biāo)本名稱、制作人姓名和單位、制作日期等信息。標(biāo)本在保存的過程中要注意防潮防霉、防鼠防蟲和防塵避光。

5 小結(jié)

以雄性成年健康雞為試驗(yàn)動(dòng)物，制作出的雞全身骨骼標(biāo)本解剖結(jié)構(gòu)完整、立體感強(qiáng)、自然美觀、易于保存。該制作方法具有操作簡(jiǎn)單、安全實(shí)用、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，為其他動(dòng)物骨骼標(biāo)本的制作提供了參考。