關(guān)德鳳，秦天生，楊永秀，3*

（1.蘭州大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅省人民醫(yī)院婦科，甘肅 蘭州 730000；3.蘭州大學(xué)第一醫(yī)院婦科，甘肅省婦科腫瘤重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730000）

宮頸癌（Cervical cancer，CC）是最常見的婦科惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率在女性所有癌癥中位列第四［1］。控制腫瘤細(xì)胞的惡性增殖并誘發(fā)其凋亡是治療癌癥的重要途徑［2］。土槿皮乙酸是從土槿皮中分離提取的具有生物活性的二萜類化合物，具有廣泛的抗癌作用［3］，可誘發(fā)caspases 的激活，引起腫瘤細(xì)胞凋亡并有效減弱腫瘤細(xì)胞對(duì)于化療的耐藥性［4］，但其對(duì)宮頸癌的治療作用及其分子機(jī)制尚不明確。PAX2 是PAX 轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一，在成年個(gè)體除在特定組織中表達(dá)外幾乎被完全沉默，近年來(lái)研究顯示，PAX2 在多種腫瘤組織中被重新激活并表現(xiàn)出促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、遷移的特性［5-6］。Wnt/β-catenin 信號(hào)通路在惡性腫瘤中起關(guān)鍵作用［7］，當(dāng)Wnt 配體和Wnt 通路調(diào)節(jié)分子突變時(shí)導(dǎo)致Wnt 信號(hào)異常激活，進(jìn)而促進(jìn)CC 細(xì)胞的生長(zhǎng)和侵襲，研究表明在不同CC 細(xì)胞系和活檢組織中，Wnt4、Wnt8A、Wnt10B 和Wnt14 相對(duì)高表達(dá)而Wnt7A 則被強(qiáng)烈下調(diào)［8-9］；而抑制Wnt 信號(hào)能夠不同程度的抑制CC 細(xì)胞增殖并促進(jìn)其凋亡［10］。因此本研究分析了土槿皮乙酸對(duì)CC 細(xì)胞凋亡、遷移的影響，探究了土槿皮乙酸對(duì)PAX2 和Wnt/βcatenin 信號(hào)通路的作用，初步闡明土槿皮乙酸通過調(diào)控PAX2 對(duì)CC 細(xì)胞產(chǎn)生影響。

1 材料

1.1 細(xì)胞 人CC 細(xì)胞Hela、SiHa、CaSki、C33A和MS751 細(xì)胞系購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫(kù)（上海）。

1.2 藥物與試劑 土槿皮乙酸（美國(guó)Sigma 公司，貨號(hào)L8170）；MTT（北京索萊寶科技有限公司，貨號(hào)IM0280）；細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（北京索萊寶科技有限公 司，貨 號(hào)CA1040）；Transwell 小 室（美 國(guó)Chemicon 公司，貨號(hào)ECM550）；LipofectamineTM2000 Transfection Reagent（美國(guó)Thermo Fisher 公司，貨號(hào)11668027）；Matrigel（北京索萊寶科技有限公司，貨號(hào)356231）；RIPA 裂解液（上海碧云天生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)P0013C）；兔抗BAX 單克隆抗體（英國(guó)Abcam 公司，貨號(hào)ab32503）；兔抗Bcl-2 單克隆抗體（英國(guó)Abcam 公司，貨號(hào)ab185002）；兔抗MMP2 單克隆抗體（英國(guó)Abcam 公司，貨號(hào)ab215986）；兔抗MMP9 多克隆抗體（英國(guó)Abcam 公司，貨 號(hào)ab38898）；兔抗Cyclin D1 單克隆抗體（英國(guó)Abcam公司，貨號(hào)ab134175）；兔抗Survivin 單克隆抗體（英國(guó)Abcam 公司，貨號(hào)ab76424）；兔抗PAX2 單克隆抗體（英國(guó)Abcam 公司，貨號(hào)ab79389）；兔抗βcatenin 單克隆抗體（英國(guó)Abcam 公司，貨號(hào)ab32572）；兔抗p-β-catenin 多克隆抗體（英國(guó)Abcam公司，貨號(hào)ab27798）；兔抗GAPDH 單克隆抗體（美國(guó)CST 公司，貨號(hào)5174）；山羊抗兔IgG H＆L 抗體（英國(guó)Abcam 公司，貨號(hào)ab97051）；Alexa Fluor ?647 標(biāo)記的山羊抗兔二抗（英國(guó)Abcam 公司，貨號(hào)ab150083）。

2 方法

2.1 細(xì)胞培養(yǎng) C33A、Hela 和SiHa 細(xì)胞采用DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng)，MS751 和CaSki 細(xì)胞采用RPMI 1640 培養(yǎng)基培養(yǎng)。培養(yǎng)基中均加入10%FBS、1%青霉素和鏈霉素。所有細(xì)胞在5% CO2、37 ℃下無(wú)菌培養(yǎng)。

2.2 MTT 實(shí)驗(yàn) 待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%匯合度時(shí)，胰蛋白酶消化配制成濃度為1.5×105/mL 的單細(xì)胞懸液，以每孔100 μL 接種于96 孔板中，過夜培養(yǎng)后加入不同濃度的土槿皮乙酸（2.5、5、10、20、40 μmol/L）或者0.16% DMSO 分別處理細(xì)胞24、48、72 h。處理結(jié)束后向培養(yǎng)板中加入新鮮的MTT（5 mg/mL），培養(yǎng)4 h，加入DMSO 進(jìn)行溶解，在570 nm 波長(zhǎng)下檢測(cè)吸光度值（OD），并計(jì)算抑制率和 IC50，抑制率＝［（OD空白組-OD給藥組）/OD空白組］×100%。

2.3 shRNA 干擾技術(shù)構(gòu)建PAX2 低表達(dá)Hela 細(xì)胞株 將PAX2 shRNA 和NC shRNA 序列與Age I 酶切位點(diǎn)一起加入，并在酶消化后與pGC-FU 載體連接。然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到HEK293T 細(xì)胞中，篩選出陽(yáng)性細(xì)胞，提取質(zhì)粒。將Hela 細(xì)胞接種到6孔板上，根據(jù)lipofectamine 2000 的說明，在細(xì)胞密度達(dá)到70%～80%后轉(zhuǎn)染細(xì)胞。使用250 μL 無(wú)血清培養(yǎng)基Opti-MEM 分別稀釋100 pmol PAX2 shRNA 和100 pmol NC shRNA 序列質(zhì)粒，在室溫下孵育5 min，使用250 μL 無(wú)血清培養(yǎng)基Opti-MEM稀釋5 μL lipofectamine 2000，在室溫下孵育5 min，將稀釋后的PAX2 shRNA、NC shRNA 序列質(zhì)粒分別與稀釋后的lipofectamine 2000 充分混合后，室溫溫育20 min，然后加入預(yù)先接種好細(xì)胞的培養(yǎng)孔中。細(xì)胞在5% CO2、37 ℃下培養(yǎng)8 h 使質(zhì)粒轉(zhuǎn)入細(xì)胞，然后將細(xì)胞在完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)24～48 h，用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

2.4 細(xì)胞分組與處理 選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞分為空白組、陰性對(duì)照組（用NC shRNA 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染），sh-PAX2 組（用PAX2 shRNA 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染），土槿皮乙酸組（用15 μmol/L 土槿皮乙酸處理未轉(zhuǎn)染的Hela細(xì)胞），土槿皮乙酸+sh-PAX2 組（用15 μmol/L土槿皮乙酸處理并用PAX2 shRNA 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染）

2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡 細(xì)胞接種于6 孔板，過夜培養(yǎng)，按照“2.4”項(xiàng)下加入藥物處理24 h后，胰酶消化成單細(xì)胞懸液，用PBS 洗滌細(xì)胞，然后收集1×105～5×105個(gè)細(xì)胞，每管中加入500 μL 結(jié)合緩沖液以懸浮細(xì)胞，然后加入5 μL Annexin V-FITC 和5 μL PI，充分混合后，室溫下避光靜置孵育10 min。在1 h 內(nèi)，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。通過軟件分析構(gòu)建包括四個(gè)象限的細(xì)胞直方圖。

2.6 Transwell 小室遷移實(shí)驗(yàn) 將4 ℃預(yù)冷的以1∶5稀釋的基質(zhì)膠加入到Transwell 上室中，鋪勻后在37 ℃下干燥70 min。制備各組細(xì)胞懸浮液，每組設(shè)置5 個(gè)重復(fù)孔，將細(xì)胞濃度調(diào)節(jié)至5×105/mL。向上室添加200 μL 細(xì)胞懸浮液，向下室添加500 μL 含有20% FBS 的培養(yǎng)基作為趨化因子。按照“2.4”項(xiàng)下加入藥物后將小室放入5%CO2、37 ℃下培養(yǎng)24 h，棉簽擦去上室中未轉(zhuǎn)移的細(xì)胞，PBS 漂洗，甲醇固定細(xì)胞，用0.1%結(jié)晶紫染色后，每孔選取5 個(gè)視野在光學(xué)顯微鏡下拍照，統(tǒng)計(jì)各組遷移細(xì)胞數(shù)目。

2.7 String 預(yù)測(cè)PAX2 潛在作用蛋白 在https：//string-db.org/網(wǎng)站上對(duì)PAX2 的作用蛋白進(jìn)行預(yù)測(cè)。

2.8 免疫熒光實(shí)驗(yàn) 將生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期的各組細(xì)胞以4.5×104個(gè)接種至6 孔板中，過夜后按照“2.4”項(xiàng)下加入藥物處理細(xì)胞24 h，洗滌細(xì)胞，4%多聚甲醛固定細(xì)胞，0.25% Triton×100 透膜，10%山羊血清封閉，加入一抗4 ℃過夜，洗滌，加入二抗，室溫2 h，洗滌，倒置熒光顯微鏡拍照。

2.9 Western blot 實(shí)驗(yàn) 待細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，按照“2.4”項(xiàng)下加入藥物處理細(xì)胞24 h 后，采用RIPA 裂解液提取細(xì)胞總蛋白，加入上樣緩沖液。同時(shí)取一小部分用BCA 法檢測(cè)蛋白濃度。通過10%或12%的SDS-PAGE 電泳分離蛋白質(zhì)并轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。將膜用含有5% 脫脂牛奶的TBST 室溫封閉2 h。（PAX2、MMP2、MMP9、Bcl-2、BAX、GAPDH 以1∶1 000稀釋，Cyclin D1、Survivin 以1∶1 500稀釋，β-catenin 以1∶5 000 稀釋，p-β-catenin 以1∶800 稀釋）4 ℃下孵育一抗過夜，TBST 洗滌后室溫孵育二抗2 h，洗滌，加入ECL 發(fā)光液顯色并在自動(dòng)曝光儀中拍照。采用ImageProPlus 軟件分析各蛋白條帶的灰度值，計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。

2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 25.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（）表示，多組間比較采用單因素方差分析，相關(guān)性分析采用Pearson 相關(guān)分析，以P≤0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 土槿皮乙酸對(duì)CC 細(xì)胞增殖的影響 在同一時(shí)間下土槿皮乙酸對(duì)各細(xì)胞增殖的抑制率均隨濃度的增加而增加，在同一濃度下土槿皮乙酸對(duì)各細(xì)胞增殖的抑制率均隨時(shí)間的增加而增加，提示土槿皮乙酸可時(shí)間-濃度依賴地抑制CC 細(xì)胞增殖（圖1）。此外在同一處理時(shí)間下，土槿皮乙酸對(duì)各細(xì)胞的IC50不同，其中在24、48、72 h 下的IC50由大到小依次均為MS751、C33A、CaSki、SiHa 和 Hela（表1）。由于Hela 細(xì)胞對(duì)土槿皮乙酸最敏感，故本研究選取Hela 細(xì)胞作為后續(xù)研究對(duì)象，土槿皮乙酸處理Hela 細(xì)胞24 h，IC50約為15 μmol/L，因此后續(xù)土槿皮乙酸處理濃度選為15 μmol/L。

3.2 各CC 細(xì)胞中PAX2 蛋白表達(dá)及其與土槿皮乙酸對(duì)各細(xì)胞的IC50的相關(guān)性分析 在各CC 細(xì)胞中，PAX2 蛋白表達(dá)由高到低依次為Hela、SiHa、CaSki、C33A 和MS751。經(jīng)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，在各CC 細(xì)胞中PAX2 表達(dá)與土槿皮乙酸對(duì)各細(xì)胞24、48、72 h 的IC50均呈負(fù)相關(guān)，其中48、72 h 的IC50與PAX2 表達(dá)呈顯著性負(fù)相關(guān)（P＜0.05）（圖2）。

3.3 shRNA 轉(zhuǎn)染Hela 細(xì)胞后各組細(xì)胞中PAX2 蛋白表達(dá) 土槿皮乙酸可抑制Hela 細(xì)胞中PAX2 蛋白表達(dá)，與空白組相比，陰性對(duì)照組細(xì)胞中PAX2 蛋白表達(dá)無(wú)差異（P＞0.05）；與陰性對(duì)照組相比，sh-PAX2 組、土槿皮乙酸組和土槿皮乙酸+sh-PAX2組細(xì)胞中PAX2 蛋白表達(dá)均降低（P＜0.05）（圖3）。

圖1 土槿皮乙酸對(duì)CC 細(xì)胞增殖的影響（n=3）Fig.1 Effects of PAB on CC cells proliferation（n=3）

表1 土槿皮乙酸對(duì)各CC 細(xì)胞的IC50（μmol/L，，n=3）Tab.1 IC50 of PAB on all CC cells（μmol/L，，n=3）

表1 土槿皮乙酸對(duì)各CC 細(xì)胞的IC50（μmol/L，，n=3）Tab.1 IC50 of PAB on all CC cells（μmol/L，，n=3）

3.4 土槿皮乙酸和低表達(dá)PAX2 對(duì)Hela 細(xì)胞凋亡的影響 與空白組比較，陰性對(duì)照組細(xì)胞的早晚期凋亡率無(wú)變化（P＞0.05），sh-PAX2 組、土槿皮乙酸組和土槿皮乙酸+sh-PAX2 組細(xì)胞的早晚期凋亡率較陰性對(duì)照組均升高（P＜0.05）（圖4）。

3.5 土槿皮乙酸和低表達(dá)PAX2 對(duì)Hela 細(xì)胞遷移的影響 與空白組比較，陰性對(duì)照組細(xì)胞的遷移數(shù)無(wú)變化（P＞0.05），sh-PAX2 組、土槿皮乙酸組和土槿皮乙酸+sh-PAX2 組細(xì)胞的遷移數(shù)較陰性對(duì)照組比較，均降低（P＜0.05）（圖5）。

圖2 各CC 細(xì)胞中PAX2 蛋白表達(dá)及其與土槿皮乙酸對(duì)各細(xì)胞的IC50的相關(guān)性分析Fig.2 PAX2 protein expression in all CC cells and its correlation with IC50 of PAB on all CC cells

3.6 土槿皮乙酸和低表達(dá)PAX2 對(duì)Hela 細(xì)胞凋亡及轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 與空白組比較，陰性對(duì)照組細(xì)胞中Bcl-2、BAX、Cyclin D1、Survivin、MMP2 和MMP9 蛋白表達(dá)無(wú)變化（P＞0.05）；與陰性對(duì)照組相比，sh-PAX2 組、土槿皮乙酸組和土槿皮乙酸+sh-PAX2 組細(xì)胞中Bcl-2、Cyclin D1、Survivin、MMP2 和MMP9 蛋白表達(dá)均顯著降低，BAX蛋白表達(dá)均升高（P＜0.05）（圖6）。

圖3 各組細(xì)胞中PAX2 蛋白表達(dá)Fig.3 PAX2 protein expression in cells of each group

圖4 土槿皮乙酸和低表達(dá)PAX2 對(duì)Hela 細(xì)胞凋亡的影響Fig.4 Effects of PAB and weak PAX2 expression on Hela cells apoptosis

圖5 土槿皮乙酸和低表達(dá)PAX2 對(duì)Hela 細(xì)胞遷移的影響Fig.5 Effects of PAB and weak PAX2 expression on Hela cells migration

圖6 土槿皮乙酸和低表達(dá)PAX2 對(duì)Hela 細(xì)胞凋亡及轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白表達(dá)的影響Fig.6 Effects of PAB and weak PAX2 expression on the expression of proteins relevant to the apoptosis and metastasis of Hela cells

3.7 String 預(yù)測(cè)PAX2 潛在作用蛋白 借助蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)的相互作用分析，發(fā)現(xiàn)癌癥信號(hào)傳導(dǎo)過程中PAX2 與Wnt 信號(hào)關(guān)系密切（圖7）。

圖7 String 預(yù)測(cè)PAX2 潛在作用蛋白Fig.7 Potential protein of PAX2 predicted by String

3.8 土槿皮乙酸和低表達(dá)PAX2 對(duì)Hela 細(xì)胞β-catenin、p-β-catenin 蛋白的影響 與空白組相比，陰性對(duì)照組細(xì)胞中β-catenin、p-β-catenin 蛋白表達(dá)無(wú)變化（P＞0.05），可見大量β-catenin 蛋白定位于細(xì)胞核；與陰性對(duì)照組相比，sh-PAX2 組、土槿皮乙酸組和土槿皮乙酸+sh-PAX2 組細(xì)胞中β-catenin、p-β-catenin 蛋白表達(dá)均降低（P＜0.05），可見定位于細(xì)胞核的 β-catenin 蛋白明顯減少（圖8）。

4 討論

圖8 土槿皮乙酸和低表達(dá)PAX2 對(duì)Hela 細(xì)胞β-catenin、p-β-catenin 蛋白的影響Fig.8 Effects of PAB and weak PAX2 expression on β-catenin and p-β-catenin proteins in Hela cells

土槿皮乙酸越來(lái)越多的被認(rèn)為是一種潛在的抗癌活性物質(zhì)，具有促進(jìn)不同類型腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，包括胃癌、肺癌、乳腺癌、黑色素瘤、甲狀腺癌、胰腺癌和CC 等［11-12］。本研究發(fā)現(xiàn)土槿皮乙酸可時(shí)間-濃度依賴地抑制多種CC 細(xì)胞增殖，其中土槿皮乙酸對(duì)Hela 細(xì)胞24、48、72 h 的IC50均最小，提示Hela 細(xì)胞對(duì)土槿皮乙酸的干預(yù)最為敏感。前期研究發(fā)現(xiàn)土槿皮乙酸通過抑制PAX2 表達(dá)來(lái)誘導(dǎo)Hela 細(xì)胞凋亡并抑制其轉(zhuǎn)移，但是相關(guān)分子機(jī)制的文獻(xiàn)報(bào)道較少，有研究者在其他腫瘤細(xì)胞中對(duì)土槿皮乙酸抗腫瘤作用的分子機(jī)制做了大量的研究，發(fā)現(xiàn)土槿皮乙酸誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡并抑制其轉(zhuǎn)移所涉及的信號(hào)通路和靶分子多種多樣，包括PI3K/Akt、ERK1/2 信號(hào)或者 Bcl-2、PKC 和caspase 家族的多種分子［4，11］。本研究首先對(duì)各CC細(xì)胞中PAX2 蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，并結(jié)合前面測(cè)出的土槿皮乙酸對(duì)各細(xì)胞的IC50，分析兩者之間的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)在各CC 細(xì)胞中，PAX2 蛋白表達(dá)由高到低依次為Hela、SiHa、CaSki、C33A 和MS751，并且與土槿皮乙酸對(duì)各細(xì)胞24、48、72 h 的IC50均呈負(fù)相關(guān)，提示土槿皮乙酸對(duì)各細(xì)胞增殖抑制能力與PAX2 表達(dá)呈正相關(guān)，PAX2 表達(dá)越高，細(xì)胞對(duì)土槿皮乙酸的增殖抑制的敏感性越高，土槿皮乙酸可能直接或間接靶向作用于PAX2，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)Hela 細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的抑制，并誘導(dǎo)其凋亡。

PAX2 在起源于苗勒氏管的輸卵管、子宮內(nèi)膜、宮頸和上部陰道的上皮細(xì)胞中表達(dá)［13］。PAX2在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中高表達(dá)，下調(diào)PAX2 可抑制細(xì)胞增殖、遷移和侵襲［14］。由于卵巢癌不同的組織學(xué)類型，PAX2 在卵巢癌中可能具有致癌和抑癌功能，這可能取決于卵巢癌細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)改變［15］。PAX2 在CC 細(xì)胞中表達(dá)也大幅上調(diào)，用CP-31398 或sh-PAX2 處理Hela 和SiHa 細(xì)胞，可以抑制細(xì)胞增殖、侵襲和遷移，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［16］。PAX2 越來(lái)越多的被認(rèn)為是生殖器官相關(guān)癌癥發(fā)生的標(biāo)志基因。本研究發(fā)現(xiàn)通過敲低Hela 細(xì)胞中PAX2 表達(dá)可顯著誘導(dǎo)Hela 細(xì)胞凋亡，上調(diào)促凋亡因子BAX 表達(dá)和下調(diào)抑凋亡因子Bcl-2、Survivin和Cyclin D1 表達(dá)；同時(shí)抑制Hela 細(xì)胞遷移以及下調(diào)MMP2 和MMP9 表達(dá)，MMP2 和MMP9 均通過降解細(xì)胞外基質(zhì)促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移；提示降低CC 細(xì)胞中PAX2 表達(dá)可誘導(dǎo)CC 細(xì)胞凋亡，抑制其轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)土槿皮乙酸可顯著抑制CC 細(xì)胞中PAX2 表達(dá)，同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并抑制其轉(zhuǎn)移。以上揭示土槿皮乙酸導(dǎo)致的PAX2 下調(diào)在土槿皮乙酸誘導(dǎo)的CC 細(xì)胞凋亡和抑制其轉(zhuǎn)移過程中扮演重要角色，但是其中的具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

借助蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)的相互作用分析，發(fā)現(xiàn)癌癥信號(hào)傳導(dǎo)過程中PAX2 與Wnt 信號(hào)關(guān)系密切。經(jīng)典的Wnt/β-catenin 信號(hào)通路被發(fā)現(xiàn)與CC 細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移等相關(guān)［17］。在該通路中β-catenin 的異常磷酸化使其在細(xì)胞內(nèi)積累并進(jìn)入細(xì)胞核與TCF/LEF 形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，調(diào)節(jié)多種下游周期和增殖相關(guān)因子的表達(dá)，包括cMYC、Cyclin D1、Survivin、Axin2和MMPs［18］。本研究發(fā)現(xiàn)土槿皮乙酸和低表達(dá)PAX2 均可降低Hela 細(xì)胞中β-catenin 和p-β-catenin蛋白表達(dá)，另外通過免疫熒光實(shí)驗(yàn)對(duì)Hela 細(xì)胞中β-catenin 進(jìn)行定位，發(fā)現(xiàn)土槿皮乙酸和低表達(dá)PAX2 組Hela 細(xì)胞核中β-catenin 表達(dá)顯著降低；結(jié)合前面土槿皮乙酸對(duì)CC 細(xì)胞PAX2 表達(dá)的抑制作用，提示土槿皮乙酸可通過影響PAX2 與Wnt/β-catenin 信號(hào)通路的相互作用，誘導(dǎo)CC 細(xì)胞凋亡并抑制其轉(zhuǎn)移。

綜上所述，在CC 細(xì)胞中，土槿皮乙酸通過抑制PAX2 表達(dá)和Wnt/β-catenin 信號(hào)通路來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制其轉(zhuǎn)移。提示土槿皮乙酸是誘導(dǎo)宮頸癌Hela 細(xì)胞凋亡的潛在治療藥物。