黃子明 葛恒發(fā) 畢傳昊

（南京醫(yī)科大學附屬淮安第一醫(yī)院，江蘇淮安 223300）

胃癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，在癌癥中發(fā)病率排名第四，且病死率排名第二[1]。其5年的生存率僅有30%～40%[2]。泛素化修飾中的泛素連接酶與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關，目前已有研究表明RNF6高表達與白血病發(fā)展有相關性[3]，但RNF6與腫瘤的相關研究并不多見。本研究通過采集相關的臨床數(shù)據(jù)，分析其與臨床病理特征的相關性，探討RNF6在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用[4]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2013年1月至2015年1月南京醫(yī)科大學附屬淮安第一醫(yī)院進行手術切除的55例胃癌患者，納入標準：所有患者在手術治療前未接受任何放療、化療或其他針對胃癌的治療。排除標準：有既往嚴重心腦血管疾病，其他重大手術病史。標本均進行免疫組化檢測，其中男性34例，女性21例，年齡41～73歲，平均年齡（60.12±8.68） 歲，原發(fā)灶、淋巴結、遠處轉移（TNM）分期Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期28例；有淋巴結轉移者26例，無淋巴結轉移者29例。55例胃癌標本組織制成石蠟切片（進行免疫組織化學實驗），采用電話聯(lián)系方式定期采訪出院患者，隨訪時間：術后1年內，每3個月隨訪一次，隨后每6個月隨訪一次，隨訪截止日期為2019年12月。本研究所有患者及家屬均已知曉，并簽署知情同意書。本研究獲南京醫(yī)科大學附屬淮安第一醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 免疫組織化學法

55例胃癌標本連續(xù)切片4μL貼附于經(jīng)多聚賴氨酸處理的玻片上，80℃烘烤50 min，免疫組化所有試劑均購自北京中杉金橋公司。蛋白的表達和分布情況通過在光鏡下觀察染色的切片，RNF6蛋白陽性在細胞內的分布主要集中在細胞質，為棕黃色顆粒。免疫組化積分=染色強度積分+陽性細胞百分率積分。結果判定由兩名具備高級職稱的病理醫(yī)師經(jīng)雙盲法獨立評分。

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 RNF6蛋白表達與胃癌患者臨床病理特征的關系

RNF6蛋白表達與胃癌患者性別、年齡、腫瘤部位均無相關性（P＞0.05），但與腫瘤直徑、浸潤深度、淋巴結轉移及TNM分期相關（P＜0.05），見表1。

表1 RNF6蛋白表達與胃癌患者臨床病理特征的關系

2.2 RNF6蛋白表達與胃癌患者5年總生存率的關系

本研究的隨訪截止日期為2019年12月，RNF6低表達組與高表達組的總例數(shù)分別為27、28例，患者總體5年生存率分別為 59.3%和 9.3%，RNF6高表達組的5年總生存率顯著低于RNF6低表達組，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=13.301，P=0.003），見圖1。

3 討論

胃癌是全球致死率第三的腫瘤[5-6]，中晚期死亡率高，預后不良。胃癌發(fā)展的分子機制涉及極多的癌基因、抑癌基因調控表達，是一個多因素多步驟的病理過程，這些生物學改變會導致增殖失控進而發(fā)生惡性轉換，所以從基因水平探討胃癌的生物學特性，提高胃癌臨床分子診斷水平，發(fā)現(xiàn)胃癌治療的新靶點成為熱點研究之一。一般認為在泛素化過程中，在腺苷三磷酸（ATP）供能的前提下，泛素通過其C端與E1中具有活化作用的半胱氨酸形成高能硫酯鍵從而得到活化，然后E2從E1接受活化的泛素，接著連接酶E3識別待降解的目標蛋白并把泛素從E2轉移使之共價結合到目標蛋白的賴氨酸殘基上，經(jīng)過前面多次循環(huán)，靶蛋白可以發(fā)生單泛素化或多聚泛素化，而泛素化后的蛋白可以被去泛素化酶去泛素化，使此過程處在動態(tài)平衡之中[7]。目前研究已經(jīng)證明，蛋白質泛素化系統(tǒng)的紊亂與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關（其中包括結直腸癌）[8]。有研究表明，泛素化和去泛素化與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關[9]，RNF6即環(huán)指蛋白6，作為泛素-蛋白酶體系中的E3連接酶，基因全長2058 bp，包含特征性的C-端的RING-H2指結構和N端的螺旋結構域，RING型鋅指基序是存在于環(huán)指蛋白（RNF）泛素連接酶家族蛋白中的鋅結合結構域，它能促進E2呈遞的泛素分子轉移到靶蛋白上，從而促進蛋白質泛素化過程的發(fā)生，在蛋白質降解、信號轉導、細胞生長和腫瘤發(fā)生等許多細胞生理生化過程中都發(fā)揮著重要的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，RNF6的表達與腫瘤直徑、浸潤深度、淋巴結轉移及TNM分期相關，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而與性別、年齡、腫瘤部位均無相關性（P＞0.05）。生存分析結果表明，RNF6陽性的患者5年生存率較陰性者低（P＜0.05）。以上結果提示，RNF6高表達在胃癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤轉移中發(fā)揮重要作用。

綜上所述，RNF6在人胃癌組織中高表達，其表達水平與腫瘤的大小、浸潤深度、淋巴結轉移及腫瘤分期密切相關，RNF6的高表達水平預示著臨床的不良預后，這預示將來RNF6的抑制劑可能成為胃癌治療的靶點。