徐 超，鄒德靚，周依鉑，劉勁松,，孫琴琴

(1.浙江工業(yè)大學(xué) 環(huán)境學(xué)院，浙江 杭州 310014；2.浙江省環(huán)境監(jiān)測(cè)中心 浙江 杭州 310012)

擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥(Pyrethroid)是一類以天然除蟲(chóng)菊酯為基礎(chǔ)合成的殺蟲(chóng)劑，因其廣譜、高效的特性在中國(guó)被廣泛使用[1-3]。目前，擬除蟲(chóng)菊酯殺蟲(chóng)劑已占據(jù)全世界殺蟲(chóng)劑的30%[4]。有研究表明，擬除蟲(chóng)菊酯對(duì)水生生物的毒性大約是對(duì)哺乳類動(dòng)物和鳥(niǎo)類毒性的10～1 000倍[5]，因而對(duì)水生生態(tài)系統(tǒng)構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅。醚菊酯(Etofenprox)又名多來(lái)寶(Trebon)，化學(xué)名稱為2-(4-ethoxyphenyl)-2-methylpropyl-3-phenoxybenzyl ether，是20世紀(jì)80年代初日本三井東壓化學(xué)株式會(huì)社生產(chǎn)的一種僅含有碳、氫、氧基團(tuán)的擬除蟲(chóng)菊酯類內(nèi)吸性殺蟲(chóng)劑[6]，由于其廣譜、高效、持效時(shí)間長(zhǎng)和對(duì)作物安全等特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于稻田害蟲(chóng)的防治[7]。

目前已有文獻(xiàn)表明醚菊酯的長(zhǎng)期持續(xù)使用會(huì)造成水生生態(tài)環(huán)境污染，對(duì)水生生物的安全產(chǎn)生威脅[8-9]。而醚菊酯的檢測(cè)方法主要為氣相色譜法[10-12]及液相質(zhì)譜法[13](GC-FID，GC-ECD)，然而現(xiàn)有的氣相色譜法及液相質(zhì)譜法需要對(duì)樣品進(jìn)行衍生化處理，檢測(cè)方法較為復(fù)雜且檢測(cè)限較高(0.008 μg/g及0.02 mg/kg)。與前兩種方法相比，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法既有氣相色譜法分離性好的優(yōu)點(diǎn)又有質(zhì)譜法鑒別能力好的優(yōu)點(diǎn)，在農(nóng)藥殘留檢測(cè)方面具有廣泛的應(yīng)用[14-16]。因此選用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法可以更加準(zhǔn)確、穩(wěn)定地檢測(cè)魚(yú)類樣品中醚菊酯，更好地評(píng)價(jià)醚菊酯在環(huán)境和生物樣品中的殘留規(guī)律及其安全性。

1 材料方法

1.1 儀 器

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)，Agilent 7890B-5977A，美國(guó)安捷倫公司；氮吹儀，OA-SYS，美國(guó)Organomation公司；冷凍干燥機(jī)，F(xiàn)DU-1100，日本理化公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，Hei-VAP Advantage，德國(guó)Heidolph公司；萬(wàn)分之一天平，AL204-IC，美國(guó)Mettler Toledo公司；渦旋混合器，MX-S，上海精科實(shí)業(yè)有限公司；高速離心機(jī)，Multifuge 1S-R，美國(guó)Thermo公司。

1.2 試 劑

醚菊酯標(biāo)準(zhǔn)品(Dr.Ehrenstorfer 0.10 g/瓶)；無(wú)水硫酸鈉(上海試四赫維化工，分析純)；苝-d12(產(chǎn)品編號(hào)110001-02-1，2 000 mg/L)、正己烷、環(huán)己烷、乙酸乙酯、乙腈、石油醚，丙酮(色譜純，F(xiàn)isher Chemical)。

1.3 色譜與質(zhì)譜條件

色譜柱為DB-5MS 石英毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；升溫程序?yàn)槌跏紲囟?0 ℃，保持1 min，以15 ℃/min升至120 ℃，保持4 min，再以15 ℃/min升至320 ℃，保持8 min；載氣為高純氦氣(純度>99.999%)，流速為1.4 mL/min；進(jìn)樣口溫度320 ℃；進(jìn)樣方式為不分流進(jìn)樣；傳輸線溫度300 ℃；進(jìn)樣體積1.00 μL；電子轟擊源(EI)；離子源溫度250 ℃，四級(jí)桿溫度150 ℃；溶劑延遲15 min；掃描模式為選擇性離子檢測(cè)(SIM)。

1.4 溶液配制

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)品配制

準(zhǔn)確稱取0.010 g醚菊酯標(biāo)準(zhǔn)品于10.00 mL容量瓶中，用丙酮充分溶解并定容至刻度線，配制成質(zhì)量濃度為1 000 mg /L的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液。

1.4.2 內(nèi)標(biāo)使用液配制

取苝-d12溶液50.00 μL，用甲醇稀釋至10.00 mL，搖勻，質(zhì)量濃度為10.00 mg/L。

1.4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

按需要吸取醚菊酯標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液并用丙酮稀釋成0.02，0.05，0.1，0.3，0.5，1.0 μg/mL系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，并分別加入20.00 μL內(nèi)標(biāo)使用液，使加入內(nèi)標(biāo)的目標(biāo)質(zhì)量濃度為0.2 μg/mL，并用氣質(zhì)聯(lián)用儀于1.3節(jié)條件下進(jìn)行分析。

1.5 樣品前處理

樣品的前處理方法參照此前魚(yú)體內(nèi)菊酯類農(nóng)藥的提取方法[17]并進(jìn)行了改進(jìn)。正常的魚(yú)類樣品冷凍干燥后，使用瑪瑙研缽將其研磨至細(xì)粉末狀，加入3 mLV(環(huán)己烷)∶V(乙酸乙酯)=1∶1的溶液，在渦旋混合器上混合，超聲處理3 min后以6 000 r/min離心3 min。將上層有機(jī)層吸取轉(zhuǎn)移至干凈的比色管中，萃取過(guò)程重復(fù)兩次，合并萃取液，將萃取得到的上清液溶于6 mL乙腈中，并用3 mL乙腈飽和石油醚通過(guò)機(jī)械振蕩的方法萃取以除去脂質(zhì)物質(zhì)。靜置幾分鐘后，分離得到下層有機(jī)相。萃取過(guò)程重復(fù)兩次，合并下層有機(jī)相，并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，將殘余物質(zhì)溶解于3 mLV(丙酮)∶V(正己烷)=1∶9的溶液中，并用Florisil SPE柱(3 mL，500 mg；ANPEL Scientific Instrument Co，上海)凈化。用8 mL丙酮/正己烷進(jìn)行洗脫，蒸發(fā)至干，并重新定至1 mL丙酮中待測(cè)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍

GC-MS使用前先經(jīng)調(diào)諧液進(jìn)行調(diào)諧，當(dāng)?shù)獨(dú)?、水、氧氣的體積分?jǐn)?shù)分別小于10%，20%，10%時(shí)，方可進(jìn)行樣品分析。以測(cè)得的醚菊酯和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)苝-d12的響應(yīng)值之比為縱坐標(biāo)，濃度比為橫坐標(biāo)，線性方程為Y=0.637 58X+0.000 42，R2=0.999 98，本方法的檢出限為1.58 ng/mL。結(jié)果表明當(dāng)醚菊酯質(zhì)量濃度為0.02～1.00 μg/mL時(shí)線性良好，見(jiàn)表1和圖1。

表1 內(nèi)標(biāo)法工作曲線各質(zhì)量濃度的響應(yīng)值

圖1 醚菊酯內(nèi)標(biāo)法工作曲線Fig.1 The standard curve of etofenprox

2.2 實(shí)驗(yàn)條件的確定

本實(shí)驗(yàn)采用選擇離子掃描模式，僅對(duì)醚菊酯及內(nèi)標(biāo)物質(zhì)苝-d12的定量、定性離子進(jìn)行掃描，從而提高了靈敏度，降低了干擾。而利用定量離子與定性離子的比例關(guān)系，既可定性，又可定量。定量及定性離子的選擇應(yīng)考慮以下幾點(diǎn)：1) 選擇特征性高的離子；2) 選擇質(zhì)量數(shù)高的離子；3) 選擇對(duì)稱性高且重現(xiàn)性好的離子；4) 選擇與柱流失碎片離子不同的離子。鑒于以上條件，選擇m/z=163和m/z=264分別作為兩種物質(zhì)的定量離子，并以135，107，263和260作為輔助定性離子。在此基礎(chǔ)上使用程序升溫的方法，可以使兩種物質(zhì)有更好的分離度，更容易同樣品中其他雜質(zhì)分離，提高分析的準(zhǔn)確度。

在樣品預(yù)處理時(shí)，回收率與洗脫液用量有關(guān)：在洗脫液小于8.00 mL時(shí)，回收率與洗脫液呈線性增大；在洗脫液大于8 mL時(shí)，繼續(xù)增大洗脫液用量回收率無(wú)明顯變化。故用8 mL洗脫液洗脫樣品。經(jīng)過(guò)GC-MS測(cè)定，醚菊酯和苝-d12的質(zhì)譜圖見(jiàn)圖2，3。由醚菊酯的標(biāo)準(zhǔn)溶液總離子流(TIC)圖可知：苝-d12和醚菊酯的保留時(shí)間分別為22.50，22.24 min，且峰型良好，無(wú)雜質(zhì)干擾，見(jiàn)圖4。樣品的回收率主要取決于前處理過(guò)程，由于魚(yú)類樣品屬于生物樣品且脂質(zhì)含量大，因而前處理過(guò)程較為復(fù)雜，回收率與植物樣品相比較低。本研究以乙腈飽和石油醚通過(guò)機(jī)械振蕩的方法除去脂質(zhì)物質(zhì)并以Florisil SPE柱凈化，前處理過(guò)程操作簡(jiǎn)單，對(duì)儀器要求比較低且回收率能夠滿足對(duì)食品中擬除蟲(chóng)菊酯類藥物的殘留量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

圖2 醚菊酯質(zhì)譜圖Fig.2 Mass spectrum of etofenprox

圖3 苝-d12質(zhì)譜圖Fig.3 Mass spectrum of perylene-d12

圖4 醚菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液總離子流圖Fig.4 Total ion chromatogram of etofenprox standard solution

2.3 回收率與精密度

在魚(yú)類樣品中添加3 個(gè)濃度水平的醚菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.5的方法進(jìn)行樣品前處理，平行測(cè)定6 次?；厥章始s為84%～86%，與魚(yú)類樣品中其他菊酯類農(nóng)藥的回收率[17](82.9%～105.8%)相當(dāng)。精密度約為1.07%～2.03%，與現(xiàn)有的醚菊酯檢測(cè)方法[10-13](18%～6.9%)相比更為穩(wěn)定，平行性更好，見(jiàn)表2。

表2 醚菊酯添加回收率與精密度結(jié)果Table 1 Addition recovery and precision results of etofenprox

3 結(jié) 論

目前尚未有水產(chǎn)品中醚菊酯的相關(guān)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，與現(xiàn)有的醚菊酯檢測(cè)方法相比，本實(shí)驗(yàn)建立的氣相色譜-質(zhì)譜測(cè)定魚(yú)體內(nèi)醚菊酯的方法提高了定量的準(zhǔn)確性并降低了檢出限。樣品冷凍干燥后用V(環(huán)己烷)∶V(乙酸乙酯)=1∶1的溶液萃取，經(jīng)去脂、凈化、旋蒸、氮吹、定容，并使用氣質(zhì)聯(lián)用儀檢測(cè)，以苝-d12為內(nèi)標(biāo)進(jìn)行定量。本方法醚菊酯的線性范圍為0.02～1.00 μg/mL，檢出限為1.58 ng/mL，回收率約為84%～86%。檢出限低于國(guó)內(nèi)外對(duì)食品中擬除蟲(chóng)菊酯類藥物的殘留量限量標(biāo)準(zhǔn)[18]。并且用內(nèi)標(biāo)法定量可以一定程度上減小儀器所造成的誤差，定量更為準(zhǔn)確。綜上所述，本方法簡(jiǎn)便快捷、靈敏準(zhǔn)確，能夠滿足魚(yú)體內(nèi)醚菊酯的測(cè)定要求。