顧維娜

目前，術(shù)中快速冷凍切片病理檢查是手術(shù)病理診斷中最高效、便捷的方法，與臨床治療緊密聯(lián)系，其制作具有質(zhì)量要求高、診斷者責(zé)任重、診斷時間短(30 min內(nèi))等特點。因此，制作一張比較完整的冷凍切片對病理診斷極為重要。在實際工作中，對于特殊類型的組織如皮膚、囊壁、胃腸道、子宮腔樣組織等需要豎直包埋于冷凍托上，此類組織壁較薄，因其沒有可依靠物常常會在包埋過程中發(fā)生傾斜，導(dǎo)致鏡下組織出現(xiàn)卷曲、折疊，嚴(yán)重影響病理醫(yī)師的精確診斷。本科室經(jīng)過多次實踐，研究一種針對此類組織提高冷凍切片質(zhì)量的可行方法，已通過國家專利審核，現(xiàn)介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料收集浙江省寧波市北侖區(qū)第二人民醫(yī)院手術(shù)送檢的新鮮卵巢組織和胃腸道組織。

1.2 試劑與儀器珊頓FE冷凍切片機，普通膠水，95%乙醇、Gill改良蘇木精染液、醇溶性伊紅液、1%鹽酸乙醇分化液。白色熱熔膠棒(直徑0.7 cm)，特制樣本托(即在圓形樣本托的中央制作1個下陷的圓柱形小孔，直徑0.75～0.9 cm，深度為0.3 cm)(圖1、2)。

1.3 制作薄壁類組織的冷凍方法(1)將恒溫冷凍切片機調(diào)整至適宜的溫度。(2)在特制的樣本托中央小孔注入少量膠水，放入高度為0.5～0.7 cm的白色熱熔膠棒，置于速凍臺上速凍5 s。(3)將取好的薄壁組織以熱熔膠棒為中心，順時針包繞于熱熔膠棒(圖3)。(4)將已放入組織的樣本托置于速凍臺上，壓上冷凍錘，急速冷凍。(5)調(diào)整防卷板與刀刃及刀座之間的角度，將切片厚度調(diào)至5 μm，將已冷凍完成后的樣本托固定在切片機的機頭上，調(diào)整機頭的位置使其恰好位于切片刀的后方。(6)關(guān)閉觀察窗，利用快進(jìn)鍵和快退鍵調(diào)整組織塊與刀刃平行，以粗切削的方式暴露標(biāo)本的最大平面。(7)掃除組織碎屑，放下放卷板，用力均勻、柔和地?fù)u動冷凍切片機轉(zhuǎn)輪，開始切片。(8)打開防卷板，用載玻片輕壓組織，使其平整的裱貼到載玻片正中位置上。(9)立即投入到新鮮配置的95%乙醇固定液中，冷凍常規(guī)染色，中性樹膠封固，鏡檢。

2 結(jié)果

經(jīng)熱熔膠棒制備的快速冷凍切片鏡下組織完整，厚薄均勻，全層各結(jié)構(gòu)可見，無皺折、卷曲、重疊、冰晶，細(xì)胞染色清晰、核質(zhì)分明、對比度好(圖4)。整個操作過程約7 min。

①②③④

3 討論

冷凍切片技術(shù)是快速病理診斷的基石，如何在有限的時間內(nèi)又快又好地完成制片，不僅是病理診斷的需要，更是術(shù)中醫(yī)師的迫切要求[1-2]。在日常冷凍切片工作中，對于特殊組織如皮膚、囊壁、胃腸道、宮腔等有極性組織，在冷凍制片包埋中必須注意組織極性，豎立包埋，以確保行全層切片。然而此類組織因壁薄，置于液體膠水中沒有相應(yīng)的支撐物，在冷凍切片過程中易卷曲、折疊，也有學(xué)者將囊壁類組織切成長條后卷曲置于包埋劑中[3]，待包埋劑大部分變白冷凍后再使用冷凍錘，這樣既增加冷凍時間又極易形成冰晶。

針對以上問題，我科室人員在大量實踐中發(fā)現(xiàn)，使用熱熔膠棒和特制樣本托能完整快速地制作出優(yōu)質(zhì)切片。熱熔膠棒其外觀為白色不透明直徑為0.7 cm圓柱體，以乙烯-醋酸乙烯共聚體為主要材料，加入增粘劑與其他成分配合而成的固體型有機粘合劑，不受細(xì)菌、霉菌、寄生蟲的侵蝕。在持續(xù)加熱時才會分解，具有無毒、無溶劑，不污染環(huán)境，對人體無損害，耐酸、耐溶劑、耐水，不透過水蒸氣，方便剪裁等特點，并且無凍結(jié)危險，在冷凍切片機低溫環(huán)境中不會變形[4]。其本身具有一定的硬度，能抵抗冷凍錘的壓力，同時還有一定韌性，在切片環(huán)節(jié)中會隨組織一起以膠膜的形式切下來，膠膜連續(xù)，具有良好的黏附性和成膜性，膠膜富有高彈性和柔韌性，且不會損害刀口。

在冷凍切片過程中，將特制的樣本托中央小孔內(nèi)注入少量膠水，并將高度為0.5～0.7 cm的白色熱熔膠棒插入樣本托中央小孔內(nèi)，置于冷凍臺上速凍，5 s后膠水已由透明變成白色，熱熔膠棒與樣本托緊密粘連，再將取材好的薄壁類組織以熱熔膠棒為中心，順時針包繞于熱熔膠棒，即以熱熔膠棒作為組織的支撐物。因熱熔膠棒具有一定的硬度，在其后的冷凍錘輕壓組織環(huán)節(jié)，薄壁類組織不會向一側(cè)傾斜，不會造成組織結(jié)構(gòu)的反轉(zhuǎn)、重疊、扭曲，能全面完整地將此類組織的各層結(jié)構(gòu)顯現(xiàn)；并且熱熔膠棒事先已預(yù)冷，薄壁類組織一貼于熱熔膠棒，因溫差幅度大，組織立即貼合于熱熔膠棒四周。冷凍錘及時快速助凍，有效避免冰晶的產(chǎn)生，顯著縮短組織冷凍時間由常規(guī)的3 min縮短至75 s。在后續(xù)的切片環(huán)節(jié)，熱熔膠棒會以膠膜的形式隨組織一起切下來，并黏附于載玻片上，置于95%乙醇固定液中，熱熔膠棒膠膜不溶于乙醇等有機溶劑，膠膜會自動脫落，薄壁類組織則完整牢固地貼附于載玻片上，即最終完成的病理切片在顯微鏡下觀察時只出現(xiàn)薄壁類組織，無熱熔膠棒膠膜，并且組織中細(xì)胞大小形態(tài)正常，核質(zhì)染色分明，并未出現(xiàn)細(xì)胞變性，也未發(fā)現(xiàn)脫片等不良問題。

在薄壁類組織術(shù)中快速冷凍切片技術(shù)中使用熱熔膠棒，其優(yōu)化操作流程，避免冰晶等不利因素的干擾，顯著提高工作效率，為冷凍切片質(zhì)量控制提供有力保障。同時提供更全面、更完整的冷凍切片和更充沛的診斷時間，為病理醫(yī)師迅速作出正確的診斷打下良好基礎(chǔ)。