周鵬宇　劉霄　唐恩應(yīng)　胡映開(kāi)　鐘紹麗　楊國(guó)榮　尹革芬　亐開(kāi)興

摘要：為了解目前昆明市奶牛場(chǎng)抗生素使用及殘留情況，對(duì)來(lái)自昆明地區(qū)6個(gè)奶牛場(chǎng)的鮮牛乳進(jìn)行調(diào)查和抗生素殘留檢測(cè)。根據(jù)抗生素的抑菌作用，調(diào)查采用戴爾沃快速檢測(cè)試劑盒（Delvotest SP），對(duì)來(lái)自昆明市3個(gè)規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場(chǎng)、3個(gè)奶牛養(yǎng)殖合作社共333份奶樣進(jìn)行抗生素殘留檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，333份生牛乳檢樣中共檢出抗生素殘留陽(yáng)性樣品44份，陽(yáng)性率為13.21%，其中規(guī)?；膛?chǎng)奶樣36份中的陽(yáng)性樣品數(shù)為0，未檢出陽(yáng)性;而奶牛養(yǎng)殖合作社共297份樣品，陽(yáng)性樣品44份，陽(yáng)性率為14.81%;源于昆明市奶牛場(chǎng)的上市牛乳中存在抗生素殘留，殘留來(lái)源以合作社奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)為主，表明不同管理模式對(duì)抗生素殘留有重要影響。

關(guān)鍵詞：鮮牛乳;抗生素殘留;戴爾沃快速檢測(cè);抗生素

中圖分類(lèi)號(hào)：S851.2? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? doi：10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2020.02.054

Abstract：In order to investigate the current status of antibiotic usage and residues in the fresh milk from 6 dairy farms in Kunming，the fresh milk samples were subjected to detect the antibiotic residues and educational level of staffs. Based on the antimicrobial activities，333 fresh milk samples from 3 large-scale dairy farms and 3 dairy cooperative farms were carried out to detect antibiotic residues using Delvotest Rapid Detection Kit（Delvotest SP）. The results showed that the 44 of 333 milk samples were positive，with an overall value of 13.21%，while there was 0 of 36 samples without positive detection from the 3 large-scale dairy farms，and 44 of 297 samples from 3 dairy cooperatives were positive with a value of 14.81%. It indicated that there existed antibiotic residues in the dairy farms in Kunming，mainly originated from dairy cooperatives，displaying that the importance of different management models to antibiotic residues.

Key words：fresh milk;antibiotic residues;Delvotest SP;antibiotic

牛奶是營(yíng)養(yǎng)比較全面、最容易被人體所吸收的食品之一，但近年來(lái)牛奶污染事件頻發(fā)，牛奶制品中的抗生素殘留問(wèn)題也逐漸成為全社會(huì)共同關(guān)注的公共衛(wèi)生問(wèn)題。牛奶抗生素殘留是指在對(duì)奶牛使用藥物治療后或者以其他方式造成鮮奶的抗生素污染，導(dǎo)致抗生素以藥物原型的形式在牛奶中出現(xiàn)。長(zhǎng)期飲用含有低劑量抗生素的牛奶對(duì)人體的危害是多方面，例如動(dòng)物機(jī)體在反復(fù)接觸某一類(lèi)抗生素后，體內(nèi)的敏感菌株將受到選擇性抑制，細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，使疾病治療變得困難，也能引起大腸桿菌耐藥菌株的產(chǎn)生。經(jīng)常食用一些含低劑量抗生素的牛奶還能使過(guò)敏性個(gè)體出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)，這些藥物包括青霉素、四環(huán)素，以及某些氨基糖苷類(lèi)抗生素等，嚴(yán)重者引起休克、喉頭水腫、呼吸困難等嚴(yán)重癥狀，而青霉素引起的變態(tài)反應(yīng)，輕者表現(xiàn)為接觸性皮炎和皮膚反應(yīng)，嚴(yán)重者表現(xiàn)為致死性過(guò)敏性休克;鏈霉素對(duì)腦神經(jīng)有明顯毒性作用，易引起耳聾。

為保證上市食用牛奶的質(zhì)量，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部于2003年5月發(fā)布《獸藥停藥期規(guī)定》對(duì)牛使用的停藥期分別為土霉素7 d，棄奶期3 d;四環(huán)素12 d，產(chǎn)奶期禁用注射用青霉素鈉，棄奶期3 d;磺胺二甲基嘧啶注射液28 d。牛奶中抗生素殘留主要原因有 4個(gè)：①非治療目的用藥;②治療目的用藥;③非法人為摻雜;④擠奶器械污染[1]。不同給藥途徑和劑量會(huì)造成不同程度的抗生素殘留[2]，為確保原料乳和乳制品中抗生素殘留量符合抗生素最大殘留限制要求，乳牛場(chǎng)、乳制品廠、政府監(jiān)督部門(mén)都在努力探索準(zhǔn)確可行的抗生素檢測(cè)方法，許多大型化學(xué)試劑和儀器公司也致力于開(kāi)發(fā)抗生素殘留量的檢測(cè)方法和儀器。牛奶中抗生素殘留的檢測(cè)方法主要有微生物檢測(cè)法、理化檢測(cè)法、免疫學(xué)分析法[3-5]。實(shí)際上，通常應(yīng)根據(jù)測(cè)定目標(biāo)來(lái)選擇不同的方法[6-10]，Delvotest為最著名的微生物抑制法測(cè)定抗生素檢測(cè)法，為了使此類(lèi)試驗(yàn)更加操作易行，荷蘭Gist-brocades BV公司開(kāi)發(fā)了Delvotest-P，Delvotest-SP，Del-votest cow- test，Delvotest-MCS檢測(cè)系列，而Delvotest cowtest適合奶牛場(chǎng)水平使用。為了解昆明市鮮牛奶中抗生素殘留情況，試驗(yàn)采用價(jià)格低廉、操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、重復(fù)性好的Delvotest SP試劑盒對(duì)奶牛場(chǎng)現(xiàn)采鮮乳進(jìn)行抗生素殘留檢測(cè)，促進(jìn)昆明地區(qū)奶牛養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，利于促進(jìn)消費(fèi)者健康和奶制品生產(chǎn)安全具有現(xiàn)實(shí)的社會(huì)意義。

1? ?材料與方法

1.1? ?試驗(yàn)材料

1.1.1? ? 供測(cè)奶樣

試驗(yàn)于2016—2017年3次對(duì)昆明市3家規(guī)模化奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)和3家合作奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行了現(xiàn)場(chǎng)采鮮乳的抗生素殘留檢測(cè)。

供測(cè)奶樣來(lái)源見(jiàn)表1。

1.1.2? ?儀器和設(shè)備

采樣管、冰箱、立式高壓蒸汽滅菌器、數(shù)顯恒溫水浴鍋等。

1.1.3? ?試劑

戴爾沃特快速檢測(cè)試劑盒（Delvotest SP NT），荷蘭DSM Gist-brocades公司提供。

1.2? ?試驗(yàn)方法

1.2.1? ?調(diào)查問(wèn)卷制作

通過(guò)前期對(duì)文獻(xiàn)的查閱與實(shí)地考察，確定調(diào)查問(wèn)卷項(xiàng)目主要包括飼養(yǎng)管理人員受教育程度、奶牛場(chǎng)常用抗生素種類(lèi)、患病奶牛的管理和治療期奶牛乳汁的處理等。

1.2.2? ?鮮牛奶中抗生素殘留的檢測(cè)

（1）樣品采集。要求著裝為消毒服裝;如果奶缸沒(méi)有專用的攪拌機(jī)器，用專用清潔的奶耙上下攪動(dòng)25次以上，使罐內(nèi)牛奶充分混合均勻，通過(guò)專用取樣勺取奶罐中部奶樣。

取奶樣時(shí)先用牛奶將采樣杯潤(rùn)洗2次，再取樣250 mL。對(duì)規(guī)模化奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)從奶缸中取1份樣品，對(duì)奶牛合作養(yǎng)殖場(chǎng)每戶取1份奶樣，共計(jì)采樣333份。

（2）樣品檢測(cè)與結(jié)果判定。采用戴爾沃快速檢測(cè)法，檢測(cè)原理是利用微生物-嗜熱芽孢菌在64 ℃條件下培養(yǎng)2.5～3.0 h后會(huì)產(chǎn)酸，酸引起指示劑BCP（溴甲酚紫）變?yōu)辄S色;若牛奶樣品中不含抗生素，培養(yǎng)后樣品呈黃色，如樣品中含有抗生素，嗜熱芽孢菌生長(zhǎng)受到抑制而無(wú)法產(chǎn)酸，指示劑不會(huì)變色。按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作和結(jié)果判定：在白色背景前觀察，如果底部2/3固體介質(zhì)是黃色，則為陰性;如果底部2/3固體介質(zhì)是紫色，則為陽(yáng)性;最終判定結(jié)果時(shí)與陰性、陽(yáng)性對(duì)照管顏色作對(duì)比，如果陰性、陽(yáng)性管顯色不吻合，需重新檢測(cè)。

1.3? ?數(shù)據(jù)分析與處理

采用SPSS 16.0軟件中t檢驗(yàn)和x2檢驗(yàn)對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)作分析。

2? ?結(jié)果與分析

2.1? ?問(wèn)卷調(diào)查統(tǒng)計(jì)與分析

調(diào)查共走訪3個(gè)規(guī)模化奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)和99個(gè)合作社奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)生產(chǎn)管理人員共102人。

規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場(chǎng)調(diào)查問(wèn)卷見(jiàn)表2，合作奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)調(diào)查問(wèn)卷見(jiàn)表3。

由表2和表3看出，規(guī)模化奶牛場(chǎng)生產(chǎn)管理人員均接受過(guò)專業(yè)教育，具備一定的專業(yè)知識(shí)，在藥物使用及患病動(dòng)物管理等方面處理措施相對(duì)合理;而合作社生產(chǎn)管理人員受教育程度多為初中以下，基本未接受過(guò)專業(yè)技能教育，生產(chǎn)管理多憑經(jīng)驗(yàn)，在用藥和病畜處理等方面缺乏系統(tǒng)管理。

2.2? ?抗生素殘留

2016—2017年分3次對(duì)昆明地區(qū)3家規(guī)?；膛?chǎng)和3家奶牛合作社養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行生鮮牛乳的抗生素殘留檢測(cè)，3家規(guī)模化奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)3次共抽檢樣品36份，均未檢測(cè)出抗生素殘留，陽(yáng)性率為0。

規(guī)模化奶牛場(chǎng)抗生素殘留見(jiàn)表4。

3家合作社奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)3次共抽檢297份，除合作社D第1次未檢測(cè)出抗生素殘留外，其余均檢出抗生素殘留。合作社D，E，F(xiàn)陽(yáng)性率分別為22.67%，18.52%和10.12%，平均陽(yáng)性率為14.81%。

合作社奶牛場(chǎng)抗生素殘留見(jiàn)表5。

2.3? ?不同飼養(yǎng)管理方式對(duì)鮮牛乳抗生素殘留的影響

3家規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場(chǎng)共計(jì)36份樣品中未檢測(cè)到抗生素陽(yáng)性樣本，陽(yáng)性率為0%，3家奶牛養(yǎng)殖合作社共計(jì)297份樣品中有44份抗生素陽(yáng)性，陽(yáng)性率為14.81%。不同養(yǎng)殖模式下抗生素殘留情況差異明顯，3次規(guī)?；瘓?chǎng)檢出率為0%，嚴(yán)格遵照國(guó)家休藥期規(guī)定、抗生素殘留未檢出陽(yáng)性樣品。

不同飼養(yǎng)管理方式對(duì)鮮乳中抗生素殘留的影響見(jiàn)表6。

3? ?討論

（1）通過(guò)問(wèn)卷調(diào)查發(fā)現(xiàn)，合作社生產(chǎn)管理人員受教育程度多為初中以下，基本未接受過(guò)專業(yè)技能教育和培訓(xùn)，生產(chǎn)管理多憑經(jīng)驗(yàn)，在用藥和病畜處理等方面缺乏系統(tǒng)管理;奶牛群得不到良好的管理，導(dǎo)致奶牛疾病頻發(fā);由于不具備良好的藥理藥物知識(shí)，對(duì)休藥期把握不準(zhǔn)，對(duì)國(guó)家獸藥方面的法規(guī)基本不了解，飼養(yǎng)管理僅憑經(jīng)驗(yàn)。規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場(chǎng)生產(chǎn)管理人員均接受過(guò)專業(yè)教育，具備一定的專業(yè)知識(shí)，在藥物使用及患病動(dòng)物管理等方面處理措施相對(duì)合理，能?chē)?yán)格遵照國(guó)家抗生素休藥期規(guī)定、抗生素殘留未發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性樣品。

（2）奶牛養(yǎng)殖合作社多為近些年來(lái)發(fā)展起來(lái)的農(nóng)村養(yǎng)殖集體，為多個(gè)養(yǎng)殖戶集中養(yǎng)殖，各養(yǎng)殖戶各自為陣、管理比較混亂。一些農(nóng)戶存欄頭數(shù)較少，自身抵抗風(fēng)險(xiǎn)的能力低，在奶牛發(fā)病后，沒(méi)有承受將“有抗奶”棄掉的經(jīng)濟(jì)能力，仍將奶牛牽去集中擠奶交售;有時(shí)擠奶缸清洗不干凈，也會(huì)導(dǎo)致抗生素殘留或交互污染。規(guī)?；膛?chǎng)奶牛存欄數(shù)較多，飼養(yǎng)員或獸醫(yī)會(huì)將患病奶牛分圈飼養(yǎng)，并做好治療記錄。在擠奶時(shí)首先將全部健康牛擠完后，治療期奶牛才上機(jī)擠奶，并且進(jìn)入一個(gè)專門(mén)的有抗奶缸，再由擠奶工仔細(xì)清洗并消毒擠奶設(shè)備，有效杜絕了“有抗奶”。

（3）從不同城市牛奶抗生素殘留調(diào)查看，不管是市售生鮮奶還是巴氏消毒牛奶，抗生素殘留情況都比較嚴(yán)重。寧鵬[11]利用TTC法對(duì)抗生素殘留檢測(cè)，西寧市個(gè)體飼養(yǎng)奶牛的鮮牛奶陽(yáng)性率為6.15%（15/244）。馬群飛等人[12]報(bào)道福建省鮮奶抗生素殘留檢出率陽(yáng)性率為19.77%（17/86）。楊慶文等人[13]檢測(cè)發(fā)現(xiàn)昆明市零售點(diǎn)市售不同包裝的鮮乳抗生素殘留陽(yáng)性率為16.67%（18/108），而227 mL小包裝消毒鮮牛乳較高，為38.46%（15/39）。趙杰等人[14]對(duì)貴陽(yáng)市超市袋裝奶和市郊散賣(mài)牛奶的檢出陽(yáng)性率為1.67%（1/60）。鄧斌等人[8]對(duì)云南省市售鮮牛奶和巴氏消毒奶作調(diào)查，檢出率最高的是頭孢氨芐45.31%，其次是青霉素達(dá)35.94%。從超標(biāo)的情況看，超標(biāo)率達(dá)10%以上的藥物有10種，超標(biāo)率20%以上的藥物有8種。牛奶中殘留的抗生素主要為青霉素和磺胺類(lèi)藥物，其中頭孢氨芐和青霉素殘留最為嚴(yán)重。因此，加強(qiáng)鮮牛奶和乳制品的監(jiān)管應(yīng)該更細(xì)化，精確到各類(lèi)抗生素，確保乳品安全[15]。

4? ?結(jié)論

（1）奶牛養(yǎng)殖合作社相對(duì)規(guī)模化奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)管理混亂，生產(chǎn)管理人員文化水平偏低，各戶各自為政，難以有效防止抗生素殘留。

（2）昆明市鮮乳存在抗生素殘留，檢出率13.21%，不同飼養(yǎng)管理模式對(duì)抗生素殘留具有明顯影響，抗生素殘留主要來(lái)自于奶牛合作社，規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)較為規(guī)范，調(diào)查中未發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性乳。

參考文獻(xiàn)：

劉碩，王勝潔，賈麗娜. 乳及乳制品中抗生素檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J]. 農(nóng)產(chǎn)品加工，2018（8）：70-72.

許明貞. 廣州市牛乳中抗生素殘留的現(xiàn)狀分析[J]. 中國(guó)食品衛(wèi)生，1999，14（3）：30-33.

黃闖，吳勤民，孫芝楊，等. 牛奶中抗生素類(lèi)獸藥殘留快速檢測(cè)的研究進(jìn)展[J]. 食品研究與開(kāi)發(fā)，2016，? ?37（23）：221-224.

夏行昊. 牛奶中抗生素殘留的危害及檢測(cè)方法[J]. 現(xiàn)代畜牧科技，2019（5）：139-140.

李丹妮，貢松松，顧欣，等. 生鮮牛乳中抗生素殘留檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)乳品工業(yè)，2017，45（5）：38-42，58.

張群. 乳制品中抗生素的熒光快速檢測(cè)技術(shù)研究及應(yīng)? ?用[J]. 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2018，37（12）：1 336.

邸靜. 牛奶中四環(huán)素類(lèi)獸藥殘留的快速檢測(cè)關(guān)鍵技術(shù)應(yīng)用研究[J]. 食品安全導(dǎo)刊，2019（17）：35-36.

鄧斌，鄧春來(lái)，張曦. 牛奶中抗生素殘留及其檢測(cè)方法研究[J]. 飼料工業(yè)，2003（4）：24-27.

歐陽(yáng)麗，黃輝，汪輝，等. HPLC-ESI-MS/MS測(cè)定牛奶中四環(huán)素類(lèi)抗生素殘留[J]. 食品工業(yè)，2016，37（2）：273-277.

程古月，彭娟，王玉蓮，等. β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素殘留受體分析法的研究進(jìn)展[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2014，45（3）：354-362.

寧鵬. 鮮牛乳中抗生素殘留調(diào)查[J]. 畜禽業(yè)，2004（3）：53-54.

馬群飛，林升清，李杰，等. 福建省生牛乳抗生素殘留情況調(diào)查[J]. 海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2002（3）：72.

楊慶文，周惠芹，李曉莉，等. 108份昆明市售鮮牛乳抗生素殘留監(jiān)測(cè)結(jié)果分析[J]. 實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2004，11（5）：986.

趙杰，武思齊. 貴陽(yáng)市售牛奶中抗生素殘留調(diào)查與檢測(cè)分析[J]. 貴陽(yáng)學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2013，8（1）：7-9.

李一凡，王鳳玲，肖瑤，等. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定牛乳中3類(lèi)15種抗生素殘留[J]. 食品科學(xué)，2015，36（18）：204-208. ◇