摘 要：目的：研究生鮮乳抗生素殘留檢測技術。方法：本研究選擇4個養(yǎng)殖場作為研究對象，抽取80份生鮮乳樣品進行抗生素殘留檢測，主要結合當前生鮮乳抗生素殘留檢測要求、生鮮乳抗生素殘留檢測技術發(fā)展趨勢，提出生鮮乳抗生素殘留檢測技術（TTC法），以此來為獸用抗生素規(guī)范用藥提供參考，致力于提升生鮮乳抗生素殘留檢測技術水平，保障生鮮乳食品的安全性。結論：TTC法作為臨床常用的一種微生物檢測法，其能有效應用于生鮮乳抗生素殘留檢測，且操作簡單、成本低，值得推廣應用。

關鍵詞：生鮮乳;抗生素殘留;檢測技術;措施

Abstract：Objective： To study the detection technology of antibiotic residues in fresh milk. Methods： in this study， four farms were selected as the research object， and 80 samples of fresh milk were selected for antibiotic residue detection. Combined with the current requirements of antibiotic residue detection in fresh milk and the development trend of antibiotic residue detection technology in raw and fresh milk， TTC method was proposed to provide reference for the standardized use of antibiotics for veterinary use The detection technology level of antibiotic residues in fresh milk can ensure the safety of fresh milk food. Conclusion： TTC method， as a commonly used microbial detection method， can be effectively applied to the detection of antibiotic residues in fresh milk， with simple operation and low cost， which is worthy of promotion and application.

Key words：Fresh milk; Antibiotic residue; Detection technology; Measures

中圖分類號：S859.84

現(xiàn)階段，生鮮乳中存在的抗生素殘留問題是最為主要的藥物殘留因子。根據(jù)實際情況進行分析，發(fā)現(xiàn)在奶牛飼養(yǎng)、產(chǎn)品加工過程中仍舊存在濫用或者大量應用抗生素問題，其必然會導致奶制品存在抗生素殘留問題，嚴重威脅人們的身體健康[1]。從來源層面進行分析，生鮮乳抗生素殘留的來源：①養(yǎng)殖場治療泌乳期乳牛疾病選擇抗生素進行治療，抗生素會從乳牛體內(nèi)逐漸進入乳腺，并在乳腺中殘留。根據(jù)有關統(tǒng)計數(shù)據(jù)可知，在使用抗生素治療后的5 d內(nèi)，奶牛產(chǎn)的奶中都存在抗生素殘留。②為有效預防奶牛疾病，同時提高產(chǎn)奶量，部分養(yǎng)殖戶會在飼料中添加抗生素，引發(fā)抗生素殘留問題。③因為養(yǎng)殖場管理工作不完善，在擠奶、儲奶方面沒有嚴格落實對應的衛(wèi)生制度，或是配套設施不夠完善，也會因為人為添加因素引發(fā)抗生素殘留問題[2]。對生鮮乳抗生素殘留問題，不僅需要加強飼養(yǎng)管理、監(jiān)管，同時還需要科學合理的應用生鮮乳抗生素殘留檢測技術，提升檢測的精準度，以此來有效控制生鮮乳的抗生素殘留問題，保障生鮮乳的安全性。

1 材料與方法

1.1 樣品選擇

本研究分別選擇A、B、C和D共4個養(yǎng)殖場，隨機選擇80份生鮮乳樣品，其中A區(qū)16份樣品，B區(qū)24份樣品，C區(qū)20份樣品，D區(qū)20份樣品。

1.2 菌種、試劑以及儀器

菌種：嗜熱乳酸鏈球菌;培養(yǎng)基：MC培養(yǎng)基;試劑：TTC（2，3，5一氯化三苯基四氮唑）;儀器：滅菌試管、滅菌吸管、100 ℃溫度計、天平、恒溫培養(yǎng)箱、水浴鍋、溫箱。

1.3 檢測方法

（1）生鮮乳抗生素殘留檢測技術。選擇GB 5409-

1985TTC法進行檢測。綜合參考生鮮乳抗生素殘留檢測要求，先在生鮮乳制品中融入菌種，進行一段時間培養(yǎng)后，接著融入TTC指示劑，最終試劑會呈現(xiàn)出多種顏色，以此來明確生鮮乳樣品當中存在的抗生素[3]。生鮮乳樣品當中的菌種沒有增殖情況，則不會出現(xiàn)還原顯色情況;而生鮮乳樣品當中的菌種能夠增殖的情況下，則會呈現(xiàn)為紅色。

（2）生鮮乳樣品采樣處理。每類生鮮乳樣品選擇500 mL，進行消毒處理以后，將瓶蓋蓋上，選擇25 mL作為備檢樣品，將其置入225 mL滅菌生理鹽水當中，均勻搖晃處理。將實驗室溫度控制為15 ℃，

3 500 r·min-1離心10 min。在進行離心處理后，去掉最高層脂肪，然后將下面的脫脂乳放入其他裝置當中，進行保存。

（3）菌種移種（嗜熱鏈球菌）。脫脂乳為培養(yǎng)基，將其置入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度36 ℃，培養(yǎng)15 h，接著針對脫脂乳進行滅菌處理，遵循1∶1的比例實施釋放、儲存。

（4）試驗指示劑進行調制處理。稱取標準品TTC1 g，將其放入燒杯當中，然后在燒杯當中倒入24 mL蒸餾水。等到混合均勻以后，將其放入棕色瓶，放置于7 ℃的環(huán)境中。在實際使用進程中，需要按照1∶5的比例進行稀釋處理。倘若使用前溶液顏色為淡褐色、玉色，表示其變質，不能用于檢測。

1.4 檢測流程

①生鮮乳樣品加熱處理。將前面環(huán)節(jié)制作好的生鮮乳樣品取出9 mL，將其倒入試管（16 mm×160 mm），通過水浴進行加熱，使其溫度達到80 ℃的恒溫，持續(xù)5 min，等到加熱完成以后，自然冷卻到37 ℃。②接種處理。把1 mL活性菌液置入水浴（36±1）℃當中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)時間需要達到2 h。③顯色處理。按照1∶5的比例，針對TTC指示劑（4%濃度）實施稀釋處理，選擇稀釋完的溶液0.3 mL，將其置入水浴培養(yǎng)，進行0.5 h的培養(yǎng)處理，并觀察培養(yǎng)之后的顏色。④復檢處理。對于復檢的生鮮乳樣品，準備一式2份，若第一次檢測結果屬于陽性，則需要實施二次檢測處理。與此同時，還需要進行陰陽性對照組對比分析。對于陰性對照組來說，主要是在沒有抗生素的生鮮乳（9 mL）當中添加菌液;對于陽性對照組來說，主要是在在沒有抗生素的生鮮乳（8 mL）當中添加TTC、抗生素、菌液[4]。

1.5 試驗判斷處理

對生鮮乳抗生素殘留檢測結果判斷來說，即完成1.4中前3步檢測流程后，觀察培養(yǎng)液顏色變化情況。整個結果判斷要快速，進行避光處理。若生鮮乳樣品中存在抗生素殘留情況，通過融入菌液培養(yǎng)，細菌不會增殖，由于添加的指示劑不會被還原，這就使得顏色不會發(fā)生變化;若生鮮乳樣品中沒有抗生素殘留情況，通過融入菌液培養(yǎng)，細菌會出現(xiàn)增殖情況，由于添加的指示劑被還原，則導致培養(yǎng)液轉變?yōu)榧t色。

2 結果與分析

此次A、B、C和D共4個抽樣地點所選取的80份生鮮乳樣品，其中A養(yǎng)殖場2份陽性，C養(yǎng)殖場4份陽性。此外，還存在4份可疑陽性，B養(yǎng)殖場與C養(yǎng)殖場各2份。具體檢查結果見表1。

針對本研究檢測結果存在的4份可疑陽性樣品實施再次檢驗，最終確定均屬于陰性。從整體檢查結果來分析，此次檢查的生鮮乳樣品陽性為6份，生鮮乳抗生素殘留檢查結果為7.5%。

3 討論

根據(jù)本研究生鮮乳抗生素殘留檢測結果來看，綜合參考農(nóng)業(yè)部《無公害食品生鮮牛乳行業(yè)標準》，其明確提出生鮮乳衛(wèi)生標準為抗生素不得檢出[5]。由此可以看出，當前部分養(yǎng)殖場在質量管理工作方面還存在一定的疏漏，包括市場監(jiān)管、食品安全監(jiān)管等領域，因此加強生鮮乳抗生素殘留監(jiān)管勢在必行。需積極分析生鮮乳抗生素殘留檢測工作常見影響因素，致力于加強生鮮乳抗生素殘留檢測工作的同時，全面加強生鮮乳監(jiān)管力度。

3.1 生鮮乳抗生素殘留檢測影響因素及控制措施

對生鮮乳抗生素殘留檢測來說，存在諸多因素影響最終的監(jiān)測結果，包括實驗環(huán)境、設備因素、人為操作等。對實驗室管理來說，內(nèi)部環(huán)境、各實驗平臺均需要嚴格按照要求進行清潔、消毒處理，同時選擇的各種儀器設備均需要按照要求進行檢定、校正，保障儀器設備本身的規(guī)范性[6]。與此同時，生鮮乳抗生素殘留檢測涉及的各個玻璃器皿均需要進行滅菌處理，通常需要在121 ℃的環(huán)境中進行0.5 h的滅菌處理。

3.2 加大養(yǎng)殖場監(jiān)督管理工作的措施

綜合參考上文所述生鮮乳抗生素殘留的原因，制定針對性的養(yǎng)殖場監(jiān)督管理措施：①基于規(guī)范疫苗防治各種疫病。各個養(yǎng)殖場在進行疫病防治的進程中，需要全面強化疫病監(jiān)測、診斷工作，綜合參考養(yǎng)殖場各個地區(qū)常見疫病類型，結合對應的監(jiān)測依據(jù)，按照要求選擇疫苗開展預防工作，保障各種疫病的未病先防。如果在已經(jīng)發(fā)生疫病的情況下，若診斷尚不夠明確，則需要控制抗生素的應用，等到明確確診以后，再嚴格按照要求進行治療。②提升奶牛飼養(yǎng)管理水平。對奶牛飼養(yǎng)管理不當所引發(fā)的生鮮乳抗生素殘留問題，必需全面加強奶牛飼養(yǎng)管理工作，減少奶牛發(fā)生疾病幾率。具體來說，對奶牛的飼養(yǎng)來說，需要開展分階段、分群體標準飼養(yǎng)管理，同時有關的飼料也需要嚴格按照要求進行科學搭配、合理應用，并且需要參考奶牛狀態(tài)、季節(jié)差異性進行飼料的搭配，保障飼料能有效滿足不同階段奶牛對于營養(yǎng)的需求。③落實抗生素藥敏試驗工作。養(yǎng)殖場在需要使用抗生素的情況下，必需要嚴格按照要求落實抗生素藥敏試驗工作，避免盲目使用抗生素的問題，從而有效提升抗生素使用的科學性、規(guī)范性，保障臨床治療效果。④加大環(huán)境衛(wèi)生控制力度。綜合參考奶牛健康養(yǎng)殖方面的要求及有關標準，分別針對養(yǎng)殖場涉及的圈舍、布局、場址、設施等領域實施優(yōu)化，保持養(yǎng)殖場的清潔、干凈，避免環(huán)境對奶牛養(yǎng)殖造成二次污染問題。

參考文獻：

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作者簡介：鐘紅萍（1991—），女，助理工程師;研究方向為生鮮奶抗生素檢測。