周寶珠 ，余小姚 ，鄺翠瓊 ，莫玉芳 ，劉 露，李海儀，郭嘉亮*

（1.佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院醫(yī)藥工程學(xué)院，廣東佛山528000；2.佛山市第一人民醫(yī)院藥學(xué)部，廣東佛山528000）

目前臨床上針對(duì)冠心病常用西藥有硝酸甘油、普萘洛爾及他汀類等藥物，既可單獨(dú)用藥又可聯(lián)合用藥。這些西藥副作用較大，如他汀類藥物會(huì)引起消化系統(tǒng)的不良反應(yīng)，肝和腎功能衰竭，最嚴(yán)重是橫紋肌溶解癥［1］。復(fù)方丹參滴丸作為知名中成藥廣泛用于治療冠心病等心血管系統(tǒng)疾病，其臨床報(bào)道有個(gè)別患者服用后胃腸道不良反應(yīng)［2］。臨床上可供治療冠心病中成藥多為口服制劑，類似復(fù)方丹參滴丸可快速釋放起效的新型中藥制劑較少。丁香為桃金娘科植物丁香樹干燥花蕾，水蒸汽蒸餾丁香花蕾獲得揮發(fā)油叫丁香油，其藥物活性成分主要是丁香酚［3］。丁香酚具有活血鎮(zhèn)痛，其抗缺氧可緩解冠心病的心肌缺血缺氧癥狀［4］，因此丁香油對(duì)冠心病相關(guān)癥狀具有較好的療效作用。將丁香油制備成滴丸，不僅將液體丁香油固體化，而且增加有效成分丁香酚的藥物穩(wěn)定性，具有臨床使用方便等劑型優(yōu)勢(shì)。已有HPLC、GC、LC-MS/MS等多種測(cè)定方法［5-7］用于測(cè)定丁香酚的含量，均對(duì)儀器設(shè)備要求較高。本研究采用紫外分光光度計(jì)（UV）法測(cè)定丁香油滴丸中丁香酚含量，并進(jìn)行方法學(xué)考察。

1 試劑與儀器

1.1 試劑

丁香油（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20161014，≥85.0%）；丁香酚對(duì)照品（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20180622，≥98.5%）；無水乙醇（分析純，廣東光華科技股份有限公司，批號(hào)：2010220），80%乙醇（由無水乙醇制備）。

1.2 儀器

紫外可見光分光光度計(jì)（上海儀電分析儀器有限公司，720N型）；電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司，AL204型）。

2 方法與結(jié)果

2.1 測(cè)定波長的優(yōu)選

精密稱取1.009 3 g丁香酚為對(duì)照品，置于100 mL容量瓶中，用80%乙醇稀釋，定容后搖勻。精密吸取10 L至100 mL容量瓶，用80%乙醇稀釋至刻度。搖勻制成1.009 3 mg/mL丁香酚對(duì)照品溶液。移取1 mL丁香酚對(duì)照品溶液于50 mL容量瓶中，用80%乙醇稀釋至刻度，搖勻制成20.19 μg/mL的丁香酚對(duì)照品溶液。以80%乙醇為空白對(duì)照，使用UV法以80%乙醇標(biāo)定，在200～400 nm的波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，其結(jié)果如圖1所示。

由圖1可知，210、228 nm處的吸光度高，考慮由于末端吸收等因素干擾，因此選擇280 nm為測(cè)定波長。

圖1 丁香酚溶液在200～400 nm紫外掃描吸光圖譜

2.2 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密稱取1.009 3 g丁香酚對(duì)照品于潔凈干燥的小燒杯中，加入80%乙醇（小于100 mL）溶解后轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中（加80%乙醇至刻度搖勻）配成原溶液。精密移取原溶液10 mL至另一個(gè)100 mL容量瓶中，并用80%乙醇稀釋至刻度，搖勻制成濃度為1.009 3 mg/mL的丁香酚對(duì)照品溶液。精密吸取液1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5 mL分別置于100 mL容量瓶中，并用80%乙醇稀釋至刻度。制成濃度分別為 15.14、20.19、25.23、30.28、35.33、40.37、45.42 μg/mL 的一系列對(duì)照品溶液。以 80%乙醇為空白對(duì)照液，在280 nm波長［8］處測(cè)定吸光度A，平行測(cè)3次，求得平均吸光度A，其結(jié)果如表1所示。

表1 丁香酚對(duì)照品溶液各濃度吸光度結(jié)果

以濃度C為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如圖2所示。由圖2可知，丁香酚對(duì)照品溶液在15.14～46.42 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系較好。

圖2 丁香酚的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 精密度試驗(yàn)

取20.19、30.28l、40.37 μg/mL 3個(gè)濃度的對(duì)照品溶液，以80%乙醇為空白對(duì)照，在280 nm波長處測(cè)定吸光度A，平行測(cè)5次，求平均值及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差RSD［9］，其結(jié)果如表2所示。由表2可知，3個(gè)濃度RSD值都很小，表明采用UV法測(cè)試丁香酚吸光度的含量精密度良好。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取 35.33 μg/mL 丁香酚對(duì)照品濃度 5 份，于 0、2、4、6、8 h［9-10］時(shí)測(cè)定吸光度 A，并求出相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差RSD，結(jié)果如表3所示。由表3可知，RSD值為0.16%，說明UV法測(cè)試丁香酚含量穩(wěn)定性好。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.5 供試品含量計(jì)算

隨機(jī)從最優(yōu)處方制備的丁香油滴丸中選取供試品，每份20粒滴丸，共取6份。用80%乙醇溶解后，定容至50 mL并過濾。取續(xù)濾液2 mL置25 mL容量瓶中，稀釋定容至刻度。以80%乙醇為空白對(duì)照，分別測(cè)定結(jié)果如表4所示。表4結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

表4 丁香油滴丸中丁香酚含量測(cè)定結(jié)果

2.6 加樣回收率試驗(yàn)

取供試品制備得過濾原液6份，分別將2 mL濾液精確吸取到25 mL容量瓶中。加入丁香酚對(duì)照物質(zhì)0.5 mL，加入80%乙醇至刻度。用80%乙醇作為空白對(duì)照，在280 nm波長下測(cè)定樣品的吸光度A，并計(jì)算回收率、平均回收率和RSD值?；厥章剩?）=（實(shí)測(cè)量-已測(cè)樣品含量）/加入對(duì)照品的量×100%［16］，其結(jié)果如表5所示。由表5可知，加樣回收率較好。

表5 加樣回收率

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用UV法測(cè)定丁香油滴丸中丁香酚含量，測(cè)定時(shí)需注意：1）選擇恰當(dāng)?shù)膶?duì)照品濃度，且吸光度A在0.2～0.8范圍且線性關(guān)系良好的對(duì)照品溶液作標(biāo)準(zhǔn)曲線。2）進(jìn)行相關(guān)方法學(xué)驗(yàn)證，如線性、精密度、穩(wěn)定性和回收率等考察。3）有效成分丁香酚由于易揮發(fā)，藥液表面濃度可能相對(duì)比較大。為了確保測(cè)定吸光度準(zhǔn)確性，在UV法測(cè)試藥液濃度過程中應(yīng)在測(cè)試前搖勻，減少誤差。

本研究利用UV法測(cè)定丁香油滴丸中丁香酚含量，操作簡單，方法可靠，其精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收率等均較為理想。對(duì)丁香油滴丸中有效成分丁香酚進(jìn)行有效質(zhì)量控制，為下一步丁香油滴丸的藥理藥效實(shí)驗(yàn)奠定了較好基礎(chǔ)。