金榮 陳麗麗 李鑫宇

摘 要：利用高效液相色譜法建立一種快速測定食品中脫氫乙酸含量的分析方法，解決GB5009.121色譜法測定脫氫乙酸保留時間漂移、色譜峰寬、色譜峰拖尾的問題。結(jié)果表明經(jīng)過方法優(yōu)化后，經(jīng)安捷倫ZORBAX Eclipse XDB C18柱分離，流動相甲醇+乙酸銨（10+90），柱溫40℃，波長230nm，流速1mL/min，進行定量分析呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.9998，回收率（92.30-101.55）%，RSD（n=6） ：0.1%，檢出限0.0013g/kg。

關(guān)鍵詞：脫氫乙酸;pH值;色譜柱;高效液相色譜

脫氫乙酸別名二乙酰基乙酰酸，固態(tài)呈白色或淡黃色結(jié)晶粉末，無嗅，無味，是一種在酸、堿條件下均有高效防腐，防霉的低毒抑菌劑，其中主要是抗酵母菌和霉菌有較強的抑制作用，所以現(xiàn)食品加工中經(jīng)常會出現(xiàn)在不同的食品中，在我國最大允許加入量是1.0g/kg。

目前脫氫乙酸的國標測定方法5009.121-2016中，第一法是氣相色譜法，第二法是高效液相色譜法，氣相色譜法測定時處理熟肉制品過程中加入乙酸乙酯振搖后靜置分層，分層時間會很常，離心的效果也不佳。在室溫放置效果會好些。液相色譜法測定時處理熟肉制品為了增長色譜柱的使用壽命，建議用固相萃取小柱。用液相色譜測定脫氫乙酸時常會遇到保留時間漂移，色譜峰拖尾特別嚴重。本實驗通過方法優(yōu)化，達到在穩(wěn)定色譜條件下分析目標物的目的。

1、檢驗方法

1.1儀器與試劑

高效液相色譜：儀安捷倫1260 ，天平：梅特勒萬分之一，離心機：Neofugt18R上海力申科學(xué)儀器有限公司，pH計：S470-k梅特勒 ，甲醇：色譜純，德國默克;脫氫乙酸：99.9%上海安譜科學(xué)儀器有限公司;SPE小柱;乙酸銨優(yōu)級純，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司;其它試劑均為優(yōu)級純，實驗用水滿足GB/T6682的一級水。

1.2標準曲的配制

1.2.1脫氫乙酸標準貯備液（1.0mg/mL）：準確稱取脫氫乙酸標準品0.1000g（精確至0.0001g）于 100mL容量瓶中，用10mL氫氧化鈉溶液溶解，用水定容。

1.2.2脫氫乙酸標準工作液：

分別吸取脫氫乙酸貯備液0.1mL、1.0mL、5.0mL、10mL、20mL于100mL 容量瓶中，用水定容。配制成濃度為1.00μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL 標準工作液。

1.3樣品的處理

稱取試樣2克-5克（精確至0.001g）于50mL離心管中，加入10mL水、5mL硫酸鋅溶液，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.5，轉(zhuǎn)入50mL容量瓶中，加水稀釋到刻度，搖勻。置于離心管中，超聲提取10分鐘，轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，加入10mL正己烷，振搖1min，靜置分層，棄去正己烷層，加入10mL正己烷重復(fù)進行一次，取下層水相置于離心管中，4000r/min離心10min。取 20 mL 上 清 液，用 10%的甲酸 調(diào)pH 至5，定容到25mL，取5mL過已活化的固相萃取柱，用5mL水淋洗，2mL70%的甲醇溶液洗脫，收集洗脫液2mL混合均勻，過0.45μm有機濾膜，供高效液相色譜測定

1.4色譜條件

色譜柱：安捷倫ZORBAX Eclipse XDB? C18? ?經(jīng)0.2%磷酸的甲醇溶液，0.1ml/min沖洗12小時

流動相：甲醇+乙酸銨0.02mol/L（10+90）

檢測器：紫外檢測器波長230nm，柱溫40℃，進樣量10微升，總流速1.0mL/min，用保留時間定性、峰面積定量。

2、結(jié)果

2.1優(yōu)化前后色譜圖的比較

優(yōu)化前：色譜柱未處理? ?波長293nm，柱溫30℃

如圖所示10μg/mL和50μg/mL標液的出峰時間分別為13.697min、11.562min，色譜峰出峰時間和結(jié)速時間跨距長達10分鐘。

優(yōu)化后：色譜柱沖洗12小時? ?波長230nm，柱溫40℃

由圖所示，出峰時間一致，重現(xiàn)性好，解決了出峰時間漂移、峰形寬、峰拖尾的問題。

2.2 標準曲線、回收率、精密度

使用以上方法配制的標準曲線進行測定，以濃度同峰面積為坐標繪制曲線，得到回歸方程是Y=57.452x-24.303、 r=0.9998，線性良好，回收率（92.30-101.55）%.精密度RSD 0.1%。在這樣的條件下，以3倍信噪比為檢出限，以10倍信噪比為定量限，進行測定，檢出限達到0.0013g/kg，定量限達到0.0032g/kg。用此方法測定的回收率、精密度、檢出限與定量限均達到了國家標準要求。

3、結(jié)論

經(jīng)過方法優(yōu)化后，經(jīng)安捷倫ZORBAX Eclipse XDB C18柱分離，流動相甲醇+乙酸銨（10+90），柱溫40℃，波長230nm，采用外標法定量滿足分析要求，該方法彌補了國家檢驗標準不足，可以提高我們實驗室的檢測的準確率 。