黃毅 洪宇航 王尤潘 彭海

摘要：以金波子魚（Papiliochromj ramLrezL）為對象，研究3種藥物制劑（復(fù)方五倍子煎劑、慶大霉素、呋喃西林）對金波子魚受精卵孵化率的影響以及3種開口餌料（蛋黃粉、草履蟲和人工超微粉料）對金波子稚苗存活率的影響。結(jié)果表明，添加復(fù)方五倍子組孵化率最高，達(dá)到了（ 81.22+6.52）%，顯著高于其余兩組（P<0.05），且未發(fā)現(xiàn)畸形稚苗。因此，在金波子受精卵孵化時添加復(fù)方五倍子可顯著提高孵化率。使用人工超微粉料作開口餌料的小組稚苗7 d存活率最高，達(dá)到（91.33+3.06）%，顯著高于其余兩組（P<0.05）。因此，人工超微粉料較適合作為金波子稚苗的開口餌料。

關(guān)鍵詞：金波子魚（Papiliochromis ramirezi;藥物;孵化率;開口餌料;存活率

中圖分類號：S948

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：0439-8114（ 2020）12-0117-04

D01：10.1408 8/j .cnki.issn043 9- 8114.2020.12.026

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

熱帶觀賞魚作為一種世界性的觀賞魚，隨著人民生活水平的不斷提高，飼養(yǎng)熱帶觀賞魚的人群越來越大，消費(fèi)市場極其廣闊。金波子魚（Papiliochromisramirezi），屬于麗魚科（Cichlidae）彩蝶鯛屬（Papilio-chromis），原產(chǎn)于南美洲委內(nèi)瑞拉、哥倫比亞境內(nèi)[1]。其是荷蘭鳳凰經(jīng)人工選育培育出的人工新品種，是最受歡迎的短鯛之一。金波子成魚體長6-9 cm，雄魚體狹長，體色較深;雌魚腹部膨大，體色較淡。該品種飼養(yǎng)水質(zhì)pH 6.5-7.0，水溫25-28℃。在水溫合適、水質(zhì)良好、餌料充足的環(huán)境中，7d可繁殖1次，每次產(chǎn)卵400枚，體質(zhì)較強(qiáng)者產(chǎn)卵可達(dá)500枚，孵化時間3-4 d。金波子經(jīng)濟(jì)價值較高，目前市場價值成魚每尾十幾元至幾十元不等，可與其他品種的觀賞魚混養(yǎng)。中國金波子市場，以東部沿海城市居多，而在廣闊的內(nèi)地市場仍屬于新興產(chǎn)業(yè)，市場潛力巨大。

雖然金波子魚成魚飼養(yǎng)相對容易，但其受精卵孵化則相對困難，生產(chǎn)中常出現(xiàn)孵化率較低、初孵稚魚存活率低下等問題。在自然狀態(tài)下，受精卵在孵化的過程中易受到水體中水霉菌、細(xì)菌等病原微生物的感染，影響孵化率甚至導(dǎo)致孵化失敗。常用的抗生素類，如慶大霉素、呋喃西林、孔雀石綠等藥物殺菌作用雖然較強(qiáng)，但具有高殘留性及強(qiáng)致癌、致畸等缺點(diǎn)，目前已在食用魚生產(chǎn)中禁止使用。在觀賞魚產(chǎn)業(yè)中，由于沒有明文規(guī)定，因此仍在繼續(xù)使用，但其強(qiáng)毒性及致畸效應(yīng)仍對受精卵孵化及稚魚健康生長產(chǎn)生一定影響[2]。由于中草藥抗藥性和殘留性低的特點(diǎn)，近年來，已越來越多應(yīng)用到水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)中。其中，五倍子、黃芩、黃柏、大黃等中草藥由于其具有對水產(chǎn)動物常見致病菌，如嗜水氣單胞菌、溶藻弧菌及遲鈍愛德華氏菌等的強(qiáng)抑制作用以及較好的抗炎消毒效果，已被廣泛應(yīng)用于養(yǎng)殖生產(chǎn)中[3]。但目前中草藥制劑在水產(chǎn)行業(yè)的應(yīng)用主要集中于食用魚、觀賞魚方面則鮮有報道。在綠色環(huán)保、健康高效水產(chǎn)的理念下，抗生素類的藥物不被提倡使用或被禁用。因此如何在養(yǎng)殖過程中選取最經(jīng)濟(jì)有效且環(huán)保的藥物預(yù)防以水霉為主的各類病原微生物感染，提高孵化率，將成為觀賞魚繁殖的一項重要工作[4]。

在金波子魚繁殖過程中，魚苗出膜后體質(zhì)較弱，卵黃囊消失后如果得不到合適的餌料作為營養(yǎng)補(bǔ)充，將造成魚苗的大量死亡，大大降低成活率。由于目前金波子魚開口餌料的研究較少，無法為科學(xué)育苗提供餌料方面的指導(dǎo)，各大養(yǎng)殖場普遍存在稚魚存活率較低的情況，使得整個行業(yè)魚苗供不應(yīng)求。因此，開口餌料開發(fā)程度較低已成為制約金波子魚產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要因素。傳統(tǒng)的開口餌料如豆?jié){、蛋黃[5]等雖然價格低廉容易獲得，然而容易引起水質(zhì)惡化，造成稚魚的死亡，直接影響育苗的成敗。而生物餌料如草履蟲[6]、輪蟲[7]等由于具有營養(yǎng)成分全面、規(guī)格多樣、可獲得性佳且不容易敗壞水質(zhì)等特點(diǎn)，在整個養(yǎng)殖過程中可以保持水質(zhì)穩(wěn)定，減少因水質(zhì)惡化而引起的幼苗死亡情況的發(fā)生。此外，目前各大水產(chǎn)公司應(yīng)對開口餌料問題，均推出超微顆粒飼料，其在初孵幼苗的存活方面也起到較好的效果。

因此，在本次試驗中比較了3種不同藥劑（復(fù)方五倍子煎劑、慶大霉素和呋喃西林）和3種不同餌料（蛋黃粉、草履蟲和人工超微粉料）分別對金波子魚受精卵孵化及初孵稚魚存活的影響，以期篩選最有效的藥物和餌料組合以提高孵化率和稚魚成活率，為規(guī)?；B(yǎng)殖提供一定的理論指導(dǎo)，促進(jìn)金波子魚的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展，提高經(jīng)濟(jì)效益。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

金波子魚種魚購自廣州市花地灣觀賞魚市場。試驗于2018年3-5月在西昌學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院進(jìn)行。試驗前種魚在125 cmx60 cmx60 cm循環(huán)水族缸中暫養(yǎng)2周以上，水溫28℃，pH 6.5-7.0，溶氧量>6mg/L，氨氮<0.5 mg/L，亞硝酸鹽<0.15 mg/L。按雌雄比例1：1放人孵化網(wǎng)中暫養(yǎng)，為保證試驗順利進(jìn)行，共準(zhǔn)備50對親本備用，種魚投喂經(jīng)消毒處理的水蚯蚓，每天3次，時間分別為9：00、15：00、19：00。挑選體型健壯、無病無傷、無畸形、成熟度較好的金波子魚為試驗對象。

開口餌料中，蛋黃粉通過購買當(dāng)?shù)匦迈r雞蛋，煮熟后按照每個蛋黃加入50 mL去離子水制成蛋黃粉懸液;草履蟲通過稻草液自行培養(yǎng);人工超微粉料選擇廣州利洋公司生產(chǎn)“利餌多”（主要成分為活性生物蛋白、有益微生物，酵母細(xì)胞數(shù)≥1X10⁶個/g）。

復(fù)方五倍子煎劑制備：五倍子20 g、大黃15 g、黃柏15 g、黃岑15 g、土茯苓15g、炒白術(shù)15 g，將所有中草藥加入2L去離子水先浸泡2h，大火煮沸，在微火下熬制30 min，紗布過濾后備用。

1.2不同藥物對金波子魚受精卵孵化的影響

將發(fā)情親魚放人規(guī)格為25 cmx15 cmx20 cm水族缸中，每個缸中放置2個洗凈并經(jīng)消毒的貝殼作為產(chǎn)卵場。待親魚自然交配后，將同一批受精卵隨機(jī)分為4組放人預(yù)先準(zhǔn)備好曝氣水的水族缸中，其中A組加入復(fù)方五倍子煎劑，B組加入慶大霉素，C組加入呋喃西林，D組為空白對照組，不添加任何藥物。每小組設(shè)3個平行。參照預(yù)試驗結(jié)果及相關(guān)資料，最終確定的藥物濃度分別為復(fù)方五倍子煎劑20mg/L[8]，慶大霉素25 mg/L，呋喃西林25mg/L。各水族缸保持與暫養(yǎng)時相同水質(zhì)條件。觀察并記錄各組受精卵孵化情況，并計算孵化率。孵化率=出膜魚苗數(shù)/受精卵總數(shù)×100%

1.3 不同開口餌料對金波子魚稚魚存活的影響

將孵化率最高組的初孵稚魚用于開口餌料試驗，待卵黃囊消失后開始投餌。試驗分為3個小組，每組3個平行，每個平行缸放置50尾稚苗，試驗周期為7d。其中A組投喂蛋黃粉，B組投喂人工超微粉料，C組投喂草履蟲。蛋黃組每個平行缸投喂0.1 g/次，蛋黃水懸液用60目紗網(wǎng)過濾，取上清液投喂;人工超微粉料組每個平行缸投喂0.1 g/次;濃度為40個/mL的草履蟲培養(yǎng)液投喂10 mL/次[6]，各組每天均投喂3次，投喂時間分別為9：00、15：00和19：00。喂食完畢及時吸出殘餌并換水，每次換水1/4，溫差不超過±1℃。觀察并記錄各組稚魚存活情況，發(fā)現(xiàn)死魚及時撈出避免污染水質(zhì)。存活率=成活魚尾數(shù)，放養(yǎng)魚尾數(shù)×100%。

1.4 數(shù)據(jù)分析

試驗數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean+SD）表示，用SPSS V20.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，用Levene法進(jìn)行方差齊性檢驗，不滿足齊性方差時對數(shù)據(jù)進(jìn)行反正弦或者平方根處理，采用ANOVA對試驗結(jié)果進(jìn)行方差分析，采用Duncan法進(jìn)行多重比較，取P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同藥物對金波子魚受精卵孵化的影響

如表1所示，添加五倍子復(fù)方煎劑組孵化率顯著高于其余各組（P<0.05），平均孵化率達(dá)到（81.22+6.52）%;慶大霉素組孵化率其次，達(dá)到（43.47+8.52）%，顯著高于呋喃西林組及空白組（P<0.05）;呋喃西林組平均孵化率為（ 27.07+4.54）%，顯著高于空白組（P<0.05）。而未添加任何藥物的空白組孵化率很低，僅為（1.32±2.28）%。其中，空白組從孵化開始24 h內(nèi)受精卵死亡數(shù)量超過25%;36 h受精卵死亡數(shù)量超過50%;至50h幾乎全部死亡。

2.2不同開口餌料對金波子魚稚魚存活的影響

經(jīng)過7d培育后，投喂人工超微粉料（利餌多）組金波子魚稚魚存活率最高，達(dá)到了（91.33+3.06）%，顯著高于其余各組（P<0.05）。投喂草履蟲組存活率其次，為（83.33+3.06）%。而投喂蛋黃組的金波子魚稚魚存活率相對較低，顯著低于其余兩組（P<0.05）（表2）。

3 小結(jié)與討論

魚類受精卵在孵化過程中易受到水霉、弧菌等病原微生物感染而引起受精卵死亡，導(dǎo)致孵化失敗，因此，在孵化過程中會添加各種抑菌藥物以提高孵化效率。近年來，中草藥在食用魚養(yǎng)殖中的使用比較廣泛[9-11]，但在觀賞魚養(yǎng)殖中應(yīng)用較少，且鮮有文獻(xiàn)報道。金波子魚作為近年來國內(nèi)觀賞魚產(chǎn)業(yè)中的熱門品種而被廣泛關(guān)注。但由于缺乏相關(guān)繁殖生物學(xué)研究報道，其較低的受精卵孵化率及稚魚存活率成為養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的主要制約因素。本研究中以五倍子、黃芩、大黃等中草藥為主的復(fù)方煎劑處理后，其受精卵孵化率顯著高于其余兩種藥物及空白對照組，表明復(fù)方五倍子中草藥煎劑在受精卵孵化過程中的抗菌效果優(yōu)于其他兩種藥物。該結(jié)果與盛竹梅等L81關(guān)于以五倍子為主的中草藥對虹鱒發(fā)眼卵霉菌感染的影響的結(jié)果一致。五倍子主要有效成分為鞣質(zhì)和沒食子酸，對多種細(xì)菌、真菌具有明顯的抑制能力，且沒食子酸能夠與蛋白質(zhì)結(jié)合生成鞣酸蛋白，對細(xì)菌有直接殺滅作用[1 2]。復(fù)方制劑中黃芩和大黃等藥物主要通過其活性成分黃芩苷和蒽醌類衍生物對金黃色葡萄球菌等水體致病菌產(chǎn)生強(qiáng)抑菌作用而發(fā)揮作用[13，14]。此外，有研究表明，飼料中添加五倍子可以促進(jìn)羅非魚生長，增強(qiáng)免疫水平[15];而復(fù)方五倍子制劑同樣可提高鯽魚免疫力及抗應(yīng)激水平[16]，即五倍子復(fù)方制劑可顯著抑制水體中病原菌，提高金波子魚的受精卵孵化率。

本研究過程中發(fā)現(xiàn)慶大霉素組和呋喃西林組稚魚均出現(xiàn)有少量歪尾等畸形苗的存在，而中草藥組并無發(fā)現(xiàn)。呋喃西林具有抗菌譜廣、抗菌活性強(qiáng)的特點(diǎn)，雖然被包括中國在內(nèi)的多個國家禁止在食用魚養(yǎng)殖中使用，但目前在觀賞魚行業(yè)中仍有使用，并大量應(yīng)用于水霉病等多發(fā)性感染的治療中[17]。此外，慶大霉素對各類魚具有較高毒性也多有報道[18.19]。因此，由于抗生素類藥物具有藥物殘留時間長、抗藥強(qiáng)、致畸率高等缺點(diǎn)，對孵化過程中的胚胎和剛孵出的稚魚影響比較大，用量把握不好可能會造成受精卵死亡和稚魚畸形，建議在觀賞魚中少用。本試驗結(jié)果也表明，使用五倍子復(fù)方制劑促進(jìn)金波子魚受精卵孵化的效果要明顯優(yōu)于上述兩種抗生素，且短期內(nèi)無致畸作用。

蛋黃含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，如磷脂、礦物質(zhì)、維生素等，且粒徑較小適合稚魚攝食，因此蛋黃可以基本滿足多數(shù)稚魚的需要[5]。但由于在狹小的孵化缸內(nèi)蛋黃極易造成水質(zhì)敗壞，引起魚苗死亡，到了投喂后期，稚苗死亡量明顯增加[20]，因此在日常投喂中為保持水質(zhì)清新，降低稚魚死亡率，需要及時吸出殘餌糞便，并且適當(dāng)注入新水。草履蟲經(jīng)常被用作魚苗的開口餌料。雖然草履蟲的營養(yǎng)價值沒有其他人工餌料豐富，而且草履蟲一直處于運(yùn)動狀態(tài)，對于稚苗攝食有一定的困難，但其作為一種活餌，含有優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪等營養(yǎng)物質(zhì)，可基本滿足稚魚的營養(yǎng)需求。只要養(yǎng)殖水體水質(zhì)較好，一般不會引起水質(zhì)的急劇惡化。所以在魚苗培育過程中，稚魚的存活率相對較高[21]。本試驗使用蛋黃和草履蟲作為開口餌料，金波子魚稚魚7d存活率均為50%以上，其中草履蟲組達(dá)80%以上，效果較好。但由于生物餌料來源安全性及穩(wěn)定性等問題，在大規(guī)模生產(chǎn)中存在一定的制約。超微粒粉料作為人工配合飼料，其使用安全性及營養(yǎng)全面性有著一定的保障。本試驗所用利餌多在淡水魚苗水花、蝦苗、蟹苗的培育過程中使用較廣，其培育稚苗的存活率可達(dá)90%以上。但目前在觀賞魚魚苗培育過程中尚未廣泛使用。由于其成分含有大量生物活性蛋白及酵母菌等有益微生物，在培育稚苗時可以滿足稚苗攝食需求和營養(yǎng)需求，而且對養(yǎng)殖水環(huán)境具有一定調(diào)節(jié)作用，不會因為水質(zhì)的急劇惡化引起稚苗大量死亡。

參考文獻(xiàn)：

[1]陳亞琴.七彩鳳凰的生物學(xué)特性及繁育方法[J].齊魯漁業(yè)，2008，25（1）：44-45.

[2]王玉堂.禁用漁藥——硝基呋喃類藥物的毒性及危害[J].中國水產(chǎn)，2017（4）：85-86.

[3]靳恒.五倍子、黃芩和大黃三種中藥主要有效成分的提取與抑菌研究[D].福建廈門：集美大學(xué)，2013.

[4]王新葉，魚類水霉病的預(yù)防和治療[J].河北漁業(yè)，2010（6）：29- 30.

[5]蘇應(yīng)兵，楊代勤，不同開口餌料對泥鰍仔魚成活率和生長的影響[J].長江大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2010，7（3）： 37-39

[6]鄭又雄，張承德.雙小核草履蟲培養(yǎng)技術(shù)及其作為藍(lán)星魚開口餌料的研究[J].齊魯漁業(yè)，1994，11（3）：22-25.

[7]董艷珍，吳建東.藍(lán)曼龍的人工繁殖試驗[J].西昌學(xué)院學(xué)報（自然科學(xué)版），2009，23（3）：44-45.

[8]盛竹梅，楊華蓮，馬立鳴，等，中草藥對虹鱒發(fā)眼卵霉菌感染的影響[J].中國水產(chǎn)，2012（2）：64-65.

[9]馬國紅，張庭華，宋理平.中草藥制劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用效果[J].河北漁業(yè)，2017 （12）：48-50.

[10]郭曉瑞，中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防治中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2017（ ll）：232.

[11]鄭堯，陳家長，水產(chǎn)動物中草藥的應(yīng)用基礎(chǔ)[J]中國農(nóng)學(xué)通報，2018，34（8）：123-128.

[12]鄭蘭娟，羅艷萍，汪玉嬌，等.五倍子抗菌抗炎作用研究進(jìn)展[J-中國病原生物學(xué)雜志，2011，6（ 11）：868-869.

[13] LIU I X. DURHAM D G，RICHARDS R M. Baicalin synergy withbeta-lactam antibiotics against methicillin-resistant StaphOlococ一cus aureus and other beta-lactam-resistant strains of S. aureus[J]Journal of pharmacy&pharmacology， 2000， 52（3）：361.

[14]李淑娟，董曉華，武海霞，等，大黃及其有效成分藥理作用研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2005，ll（1）：76-78.

[15]龔慶芳，吳穎瑞，昌運(yùn)標(biāo)，等，飼料中添加五倍子對奧尼羅非魚生長及血液生化指標(biāo)的影響[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，43（12）：96-101.

[16]周園，復(fù)方五倍子抗菌劑藥物特性及藥效學(xué)研究[D].重慶：西南大學(xué)，2007.

[17]馮小鹿，魚病防治藥物簡介[J].當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè)，2010（ 10）：51-52

[18]孟靜文，解衛(wèi)方，董雨欣，等.慶大霉素廢水對斑馬魚的急性毒性效應(yīng)[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，45（24）：97-100.

[19]郭家瑞，王衛(wèi)國，李磊，等.慶大霉素研究概論[J].海峽藥學(xué)，2009，21（ 10）：5-8.

[20]沈忠明，梅渠江，三種開口餌料試喂藍(lán)星魚和斑馬魚仔魚效果的研究[J].淡水漁業(yè)，2000，30（ 10）：47-48.

[21]王超，幼魚階段的理想食物洄水[J].北京農(nóng)業(yè)，2015（4）：46- 47.

基金項目：四川省教育廳一般科研項目（18ZB0554）

作者簡介：黃毅（1986-），女，重慶人，助教，碩士，主要從事水生觀賞動物養(yǎng)殖方面的研究，（電話）0834-2580034（電子信箱）lemonhuangyi@126.com。