劉冬冬，張嘉琪，宋瑩，胡劍，尚陳宇，石文，林莉，林海標(biāo)，黃譯樂，徐建華（通信作者）

1 廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院·廣東省中醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)部 （廣東廣州 510120）；2 廣州中醫(yī)藥大學(xué)順德醫(yī)院 （廣東佛山 528333）

載脂蛋白A1（apoprotein A1，ApoA1）在肝及腸黏膜中合成，主要存在于高密度脂蛋白（high-density lipoprotein，HDL）中[1]。有研究表明，ApoA1與心腦血管疾病的發(fā)病及患者死亡相關(guān)[2]，因此，ApoA1的有效檢測(cè)對(duì)疾病診斷及預(yù)后具有重要的意義。干擾物常存在于日常檢驗(yàn)工作中，可導(dǎo)致檢驗(yàn)報(bào)告不可靠。近年來，生化檢測(cè)試劑品種日益增多，全自動(dòng)生化分析儀在同一個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的檢測(cè)中，使用不同廠家的試劑可能會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不同[3]。羅氏公司試劑說明書指出，在Modular P800模塊上，使用羅氏第二代低密度脂蛋白膽固醇（lowdensity lipoprotein chesterol，LDL-C）試劑會(huì)對(duì)羅氏ApoA1檢測(cè)存在比色杯攜帶污染干擾，建議在“Special Wash”程序中設(shè)置針對(duì)羅氏LDL-C試劑檢測(cè)該項(xiàng)目后進(jìn)行酸性清洗液沖洗的步驟，以消除LDL-C試劑對(duì)ApoA1檢測(cè)的攜帶污染干擾。本研究參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（Clinical Laboratory and Stardards Institute，CLSI）的EP7-A2文件及儀器說明書，探討羅氏Modular P800生化分析儀使用LDL-C試劑對(duì)ApoA1檢測(cè)比色杯攜帶污染的干擾效應(yīng)，并尋求有效的解決方案，供同行參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

羅氏Modular P800全自動(dòng)生化分析儀；羅氏LDL-C試劑（批號(hào)：674 550-01）；積水LDL-C試劑（批號(hào)：805RJJ）；羅氏ApoA1（批號(hào)：683890-01）。

1.2 標(biāo)本

1.3 方法

1.3.1 儀器校準(zhǔn)

按照說明書和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（Standard Operation Procedure，SOP）文件對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，使儀器處于正常工作狀態(tài)[4]。

1.3.2 羅氏Modular P800比色杯的使用規(guī)律分析

通過實(shí)驗(yàn)探討羅氏Modular P800 160個(gè)比色杯的使用規(guī)律，設(shè)計(jì)方案使施污染項(xiàng)目（LDL-C）與受污染項(xiàng)目（ApoA1）共用同一個(gè)比色杯，且保證每圈檢測(cè)將160個(gè)比色杯全部用完。

1.3.3 比色杯攜帶污染的驗(yàn)證分析

本實(shí)驗(yàn)以LDL-C（施污染項(xiàng)目）與ApoA1（受污染項(xiàng)目）為研究對(duì)象，分別檢測(cè)LDL-C（高、低濃度）、ApoA1（高、中、低濃度）各10次，取平均值作為對(duì)照值。第1圈為實(shí)施污染：6、12、18……156、2、8、14、20號(hào)比色杯（間隔6個(gè)）檢測(cè)LDL-C 低濃度樣本，26、32、38……158、4、10、16……40號(hào)比色杯檢測(cè)LDL-C 高濃度樣本，剩余比色杯測(cè)試用水樣本填充；第2圈檢測(cè)受污染項(xiàng)目。將所得結(jié)果分別與對(duì)照值比較，攜帶污染率=（檢測(cè)均值-對(duì)照值）/對(duì)照值×100%。比色杯攜帶污染率絕對(duì)值大于該項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)控變異系數(shù)（coefficient of variation，CV），被認(rèn)為攜帶污染不可接受；本實(shí)驗(yàn)定義相差±5%以上為存在攜帶污染[5]。

1.3.4 比色杯攜帶污染的解決方案分析

根據(jù)試劑成分特征和廠家推薦，選擇去離子水、酸性洗液對(duì)確認(rèn)污染的項(xiàng)目進(jìn)行特殊清洗。第1圈為實(shí)施污染，6、12、18……120號(hào)樣本檢測(cè)施污染項(xiàng)目，剩余以水樣本填充；第2圈為特殊清洗，所有樣本均為血清，166、172、178……220號(hào)為水清洗組，用水進(jìn)行清洗，226、232、238……280號(hào)為酸清洗組，用酸性洗液進(jìn)行清洗，剩余以水樣本填充；第3圈檢測(cè)受污染項(xiàng)目，321～350號(hào)樣本檢測(cè)受污染項(xiàng)目，其中321～330號(hào)為水清洗組，331～340號(hào)為酸清洗組，341～350號(hào)為對(duì)照組。將水清洗組、酸清洗組分別與對(duì)照組比較，攜帶污染率=（清洗組均值-對(duì)照組均值）/對(duì)照組均值×100%，相差±5%以上為清洗無效。

2 結(jié)果

2.1 羅氏Modular P800比色杯的使用規(guī)律

羅氏Modular P800有160個(gè)比色杯，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其使用規(guī)律，無樣本稀釋的項(xiàng)目隨著樣本號(hào)的遞增，比色杯的間隔是41個(gè)；有樣本稀釋的項(xiàng)目，連續(xù)測(cè)試時(shí)比色杯的間隔為86個(gè)，見表1。

數(shù)據(jù)通過SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，其中并發(fā)癥發(fā)生率、子宮肌瘤殘留率、復(fù)發(fā)率、成功妊娠率等計(jì)數(shù)資料[n（%）]通過χ2檢驗(yàn)，而空腹血糖水平等計(jì)量資料（±s）以t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 羅氏Modular P800比色杯的使用規(guī)律（前10個(gè)樣本號(hào)和比色杯號(hào)）

2.2 LDL-C 試劑對(duì)羅氏ApoA1檢測(cè)比色杯攜帶污染的干擾效應(yīng)驗(yàn)證

2.2.1 羅氏LDL-C 試劑對(duì)羅氏ApoA1檢測(cè)比色杯攜帶污染的干擾效應(yīng)驗(yàn)證

羅氏LDL-C 試劑在Modular P800上測(cè)試其對(duì)羅氏ApoA1檢測(cè)比色杯的攜帶污染干擾情況，以±5%為可接受范圍，結(jié)果顯示，均存在干擾，見表2。

表2 羅氏LDL-C 試劑在Modular P800上對(duì)羅氏ApoA1檢測(cè)的干擾情況

2.2.2 積水LDL-C 試劑對(duì)羅氏ApoA1檢測(cè)比色杯攜帶污染的干擾效應(yīng)驗(yàn)證

積水LDL-C 試劑在Modular P800上測(cè)試其對(duì)羅氏ApoA1檢測(cè)比色杯的攜帶污染干擾情況，以±5%為可接受范圍，結(jié)果顯示，均不存在干擾，見表3。

表3 積水LDL-C 試劑在Modular P800上對(duì)羅氏ApoA1檢測(cè)的干擾情況

2.3 羅氏LDL-C 試劑對(duì)羅氏ApoA1檢測(cè)比色杯攜帶污染干擾不同清洗方案的效果分析

比色杯攜帶污染干擾效應(yīng)驗(yàn)證結(jié)果顯示，在羅氏Modular P800全自動(dòng)生化分析儀上存在羅氏LDL-C 試劑對(duì)羅氏ApoA1檢測(cè)比色杯攜帶污染，為消除此干擾，實(shí)驗(yàn)室采用酸性洗液和去離子水進(jìn)行清洗，發(fā)現(xiàn)清洗后干擾均消除，見表4。

表4 羅氏LDL-C 試劑對(duì)羅氏ApoA1檢測(cè)比色杯攜帶污染干擾不同清洗方案的效果分析

3 討論

全自動(dòng)生化分析儀是臨床實(shí)驗(yàn)室必備的檢驗(yàn)儀器，是生化檢測(cè)系統(tǒng)的重要組成部分，精密度、準(zhǔn)確性和效率特性均高。但是，儀器使用過程中會(huì)出現(xiàn)攜帶污染現(xiàn)象，其中，比色杯的攜帶污染是臨床生化項(xiàng)目檢測(cè)不正確度的來源之一[6]。攜帶污染將影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，導(dǎo)致結(jié)果失真，誤導(dǎo)臨床診斷和治療，因此，在使用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)標(biāo)本時(shí)，應(yīng)對(duì)可能發(fā)生攜帶污染的項(xiàng)目采取相應(yīng)的清洗措施，以科學(xué)的處理方法和解決措施，有效降低攜帶污染的影響程度，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠[7]。

比色杯污染實(shí)驗(yàn)的難點(diǎn)在于比色杯定位，羅氏Modular P800有160個(gè)比色杯。本研究發(fā)現(xiàn)，未進(jìn)行樣本稀釋的項(xiàng)目隨著樣本號(hào)的遞增，比色杯的間隔是41個(gè)，觀察到一圈160個(gè)比色杯全部用完后，第161個(gè)測(cè)試開始和第1個(gè)測(cè)試的比色杯號(hào)相同，該現(xiàn)象可以通過測(cè)試項(xiàng)目的反應(yīng)曲線得到驗(yàn)證，由于要保證1～160的測(cè)試連續(xù)進(jìn)行，才能進(jìn)行驗(yàn)證，所以實(shí)驗(yàn)安排上應(yīng)確保連續(xù)測(cè)試160個(gè)才可進(jìn)行第2圈比色杯重新排序測(cè)試；進(jìn)行樣本稀釋的項(xiàng)目，用0.9%氯化鈉注射液作預(yù)稀釋，連續(xù)測(cè)試時(shí)比色杯的間隔為86個(gè)，主要原因?yàn)橄♂屵^程需要增加5個(gè)加樣機(jī)械動(dòng)作，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案需考慮第2圈受污染項(xiàng)目進(jìn)行了樣本稀釋動(dòng)作，所用比色杯號(hào)和第1圈施污染項(xiàng)目測(cè)試所用比色杯號(hào)要一一對(duì)應(yīng)才能達(dá)到評(píng)價(jià)干擾的目的。

攜帶污染的常見類型：試劑中含有下一測(cè)定的待測(cè)成分；殘留物作為下一測(cè)試的中間產(chǎn)物；殘留物影響下一測(cè)試的吸光度；殘留物與下一測(cè)試標(biāo)本發(fā)生其他反應(yīng)產(chǎn)生與下一測(cè)試類似的產(chǎn)物；原因不明等[8]。隨著使用時(shí)間的延長(zhǎng)，全自動(dòng)生化分析儀比色杯內(nèi)表面黏附作用增強(qiáng)，沖洗能力下降，攜帶污染相應(yīng)地增加。比色杯攜帶污染不僅與儀器清洗效率有關(guān)，還與所測(cè)項(xiàng)目的檢測(cè)方法及試劑成分有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)中，羅氏LDL-C 試劑高、低濃度對(duì)羅氏ApoA1高、中、低濃度的6組數(shù)據(jù)顯示，均存在嚴(yán)重的比色杯攜帶污染，且LDL-C 高濃度影響較大，由清洗效果可以看出，經(jīng)過特殊清洗（去離子水、酸性洗液）后，可以排除攜帶污染的影響，且水清洗與酸清洗效果基本一致；而積水LDL-C 試劑對(duì)羅氏ApoA1檢測(cè)不存在比色杯攜帶污染。因此，在羅氏Modular P800全自動(dòng)生化分析中，當(dāng)羅氏LDL-C 和羅氏ApoA1項(xiàng)目組合時(shí)，臨床實(shí)驗(yàn)室可采用水清洗方法解決比色杯攜帶污染問題，節(jié)約特殊清洗通道及清洗成本。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，干擾效應(yīng)與特定試劑、儀器等因素相關(guān)，本實(shí)驗(yàn)的比色杯攜帶污染干擾效應(yīng)評(píng)價(jià)方案可為臨床提供參考。

本研究?jī)H針對(duì)羅氏公司和積水公司特定試劑進(jìn)行分析，其他品牌試劑尚不可輕易判定干擾效應(yīng)是否有意義，因此，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)干擾評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、檢測(cè)成本，綜合考慮并選擇合理的清洗液。