盧宇婷

【關(guān)鍵詞】熒光定量PCR法;HBV-DNA;ELISA法;乙肝免疫學(xué)指標

【中圖分類號】R446.6 【文獻標識碼】B 【文章編號】1002-8714（2020）05-0127-02

乙肝全稱為乙型肝炎，指的是因乙肝病毒造成患者肝臟發(fā)生炎性病變，如未得到及時有效治療，會對多器官造成損害。另外，該病具有較強的傳染能力，且患者長時間保持帶病毒狀態(tài)，對其健康、日常生活等均造成不良影響。由于早期乙肝患者癥狀表現(xiàn)缺乏代表性，很容易出現(xiàn)誤診、漏診情況，因而，找尋一種及時、準確的診斷方法至關(guān)重要[1]。傳統(tǒng)臨床多采取酶聯(lián)免疫吸附法檢測患者病毒感染情況，通過測定患者血液內(nèi)含有的抗體、特異性抗原從而判定是否出現(xiàn)感染。最近幾年，隨著醫(yī)療水平的提高，分子生物學(xué)不斷發(fā)展，熒光定量PCR法廣泛用于臨床疾病診治中，效果良好。通過該方法測定乙肝患者感染病毒的DNA，可有效表現(xiàn)出感染活性[2]。本文以2017.7-2019.7我院收治70例乙肝患者為例，闡述ELISA法及熒光定量PCR法的具體操作過程及結(jié)果關(guān)聯(lián)性，如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

此次研究時間為期2年，自2017年7月開始，至2019年7月結(jié)束，研究對象選擇我院收治乙肝患者70例，包括男患45例，女患25例，年齡最低者16歲，最高者84歲，平均年齡（44.5±1.4）歲，經(jīng)臨床診斷34例患急性乙肝，36例患慢性乙肝，病程時間短則8日，長則89日，平均病程（45.3±1.3）日。所有病患入院均表現(xiàn)出程度不一的發(fā)熱、惡心、腹部不適、身體疲乏等狀態(tài)，少數(shù)患者伴有黃疸、肝區(qū)疼痛感。

1.2方法

在檢驗前一天通知患者提前8h禁食、6h禁飲，在檢驗當天早6：00至8：00空腹狀態(tài)下提取靜脈血樣本。樣本獲取后以離心的方式分離血清，并將其放置在恒溫箱內(nèi)保存，溫度設(shè)定在4℃即可。

檢驗所需設(shè)備為熒光定量分析儀、全自動酶標儀，所需試劑則包括FQ-PCR配套試劑盒、ELISA試劑。進行HBV（乙肝病毒）的DNA定量檢測時選擇FQ-PCR（熒光定量PCR）法，嚴格按照設(shè)備和試劑盒配套的說明書進行操作，如結(jié)果顯示乙肝病毒DNA指標超過1.0×102IU/ml則判斷為陽性[3]。乙肝病毒血清標志物檢驗時采用ELISA方法，要求所有受檢對象的樣本均采用統(tǒng)一試劑盒進行檢驗，以免出現(xiàn)數(shù)據(jù)偏差，所有操作均需嚴格按照配套說明書內(nèi)容開展，主要檢測對象包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb。

1.3觀察指標

分別記錄ELISA檢測患者乙肝免疫指標結(jié)果及熒光定量PCR檢測患者HBV-DNA結(jié)果，探究二者關(guān)聯(lián)性。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析

整理研究所得數(shù)據(jù)，輸入SPSS19.0軟件內(nèi)處理，結(jié)果間差異以p<0.05形式表達。

2 結(jié)果

2.1乙肝免疫學(xué)表達與HBV-DNA陽性率間關(guān)系分析

此次經(jīng)ELISA檢驗顯示，22例患者血清標志物呈大三陽表現(xiàn)，占比31.43%，29例患者血清標志物呈小三陽表現(xiàn)，占比41.43%，4例患者呈慢性HBsAg攜帶表現(xiàn)，占比5.71%，6例患者呈急性轉(zhuǎn)復(fù)表現(xiàn)，占比8.57%，9例患者呈乙肝恢復(fù)期表現(xiàn)，占比12.86%。經(jīng)熒光定量PCR檢測以大三陽患者HBV-DNA陽性率最高（p<0.05），見表1。

表1?乙肝免疫學(xué)表達與HBV-DNA陽性率間關(guān)系分析

2.2乙肝免疫學(xué)表達與HBV-DNA含量關(guān)系分析

大三陽患者HBV-DNA含量相較其他表現(xiàn)患者更高（p<0.05），見表2。

表2?乙肝免疫學(xué)表達與HBV-DNA含量關(guān)系分析

3 討論

乙肝病毒（HBV）是導(dǎo)致乙型肝炎的致病菌，其臨床傳染性非常強，且在發(fā)病后會逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)槁砸腋危颊咴诮?jīng)歷漫長的病程后還有極高的概率繼發(fā)肝硬化類病變，甚至誘發(fā)肝癌的幾率也要高于普通人群，而乙肝也成為了當前國際社會需共同面對的衛(wèi)生問題之一[4]。國際醫(yī)學(xué)界指出乙肝發(fā)病時間越短，其治愈的可能性相對越高，因此利用有效的檢查方式在早期對乙肝患者進行檢查和確診，有利于后續(xù)治療方案的確定，更有利于患者病情的控制。

目前國內(nèi)針對乙肝病毒檢測的方法有很多種，例如熒光定量PCR法、ELISA法、化學(xué)熒光法、放射免疫法等，其中前兩者的使用范圍更廣，操作也相對簡便。ELISA方式的檢測速度更快，且所需成本也相對較低，檢測靈敏度和特異性均有保障，符合臨床大范圍篩查工作的需求，也是乙肝病毒檢驗最常用的手段。但這種方式僅針對的是乙肝病毒的免疫應(yīng)答狀態(tài)進行確認，而如乙肝處于潛伏期，其也不會表現(xiàn)出免疫應(yīng)答狀態(tài)，因此只能用作是否感染的間接性參考指標，同時該檢查指標對于乙肝感染后的發(fā)病情況、病毒復(fù)制程度以及危險性等的定性均無法進行[5]。熒光定量PCR技術(shù)則是直接用于測量乙肝病毒的DNA量，相關(guān)數(shù)據(jù)可更直觀地表現(xiàn)出乙肝病毒的復(fù)制情況和在體內(nèi)的傳播程度，可以為后續(xù)治療方案的選擇提供明確參考。但該檢測技術(shù)無法確定處于非復(fù)制狀態(tài)下的感染情況，因此實際應(yīng)用時應(yīng)將上述兩種方法聯(lián)合使用，以確保準確率。

參考文獻

趙秋霞，周松偉，王莉.熒光定量PCR法檢測HBV-DNA與ELISA法乙肝免疫學(xué)指標的相關(guān)性[J].中國繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育，2016，8（25）：45-47.

李澤銳，高靜.熒光定量PCR檢測HBV-DNA與化學(xué)發(fā)光酶免疫法檢測乙型肝炎五項的相關(guān)性研究[J].中國醫(yī)藥指南，2018，16（26）：161-162.

高娟，劉靜.熒光定量PCR法與ELISA法聯(lián)合檢測乙型肝炎的臨床價值探討[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志，2017，25（9）：29-31.

闕金亞，余紅，劉峰.熒光定量PCR檢測HBV-DNA與ELISA方法測定乙肝五項指標相關(guān)性分析[J].系統(tǒng)醫(yī)學(xué)，2018，3（16）：32-33，39.

李艷梅，江忠勇，李志強.實時熒光定量PCRHBV-DNA檢測系統(tǒng)性能驗證方法的探討[J].

西南國防醫(yī)藥，2018，28（12）：1177-1179.