天津醫(yī)科大學(xué)靜海臨床學(xué)院檢驗科 （天津 301600）

內(nèi)容提要：目的：觀察光學(xué)法計數(shù)血小板（PLT-O）在EDTA依賴的假性血小板減少癥（EDTA-PTCP）中的臨床應(yīng)用效果。方法：選取EDTA依賴的假性血小板減少癥患者29例，每人分別用EDTA-K2抗凝法、枸櫞酸鈉抗凝法、光學(xué)法和手工計數(shù)法（PLT-M）檢測血小板數(shù)量。前三種方法與手工計數(shù)法進(jìn)行比對。結(jié)果：EDTA-K2抗凝法與手工法檢出結(jié)果，差異有明顯統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。枸櫞酸鈉抗凝法與手工法檢出結(jié)果，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。光學(xué)法與手工計數(shù)法檢出結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：光化學(xué)法具有簡便，不受時間限制，準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)，可作為糾正EDTA-PTCP血小板計數(shù)的首選方法。

由于乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）不影響細(xì)胞形態(tài)，對細(xì)胞數(shù)目及大小也無影響等優(yōu)點(diǎn)被國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會建議為血液分析儀首選抗凝劑[1]。但這種抗凝劑偶然可誘導(dǎo)血小板在體外聚集，使得血液分析儀血小板計數(shù)遠(yuǎn)低于真實數(shù)值，該現(xiàn)象被稱為EDTA依賴性血小板減少（EDTAPTCP）[2]。該現(xiàn)象發(fā)生率雖較低，但給臨床診斷帶來許多困擾，易造成血小板輸注過度等錯誤治療對患者身心造成傷害。所以準(zhǔn)確快速地糾正EDTA-PTCP引起的血小板減低尤為重要。手工計數(shù)血小板是WHO推薦的具有較高精確度的計數(shù)方法，是排除抗凝劑影響的最傳統(tǒng)方法[3]。本文以PLT-M為衡量標(biāo)準(zhǔn)，對目前幾種常用解聚方法進(jìn)行了對比研究，發(fā)現(xiàn)光學(xué)法可及時有效簡便地解決該問題，現(xiàn)報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年5月～2018年5月在本院就診患者29名。納入標(biāo)準(zhǔn)：①血常規(guī)儀器結(jié)果提示血小板減少；②EDTA-K2抗凝后血涂片染色鏡檢，可見大量血小板聚集；③患者均無皮膚紫癜、牙齦出血、鼻出血等出血癥狀。排除標(biāo)準(zhǔn)：①用EDTA-K2抗凝管再次抽血后血小板聚集現(xiàn)象被糾正者，說明是由抽血不當(dāng)引起，該標(biāo)本被排除；②血涂片可見較多小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、大血小板者，說明血小板減少原因不止抗凝劑一種，該標(biāo)本被排除。

儀器試劑：采用邁瑞B(yǎng)C-6900全自動血常規(guī)分析儀及配套血常規(guī)試劑和質(zhì)控品。儀器狀態(tài)良好，每日高中低三水平質(zhì)控在控。草酸銨稀釋液由安徽弘慈醫(yī)療器械公司提供。

1.2 方法

標(biāo)本采集及檢測：嚴(yán)格按照操作規(guī)程為每位患者重新抽血，分別放入EDTA-K2抗凝管和枸櫞酸鈉抗凝管（枸櫞酸鈉抗凝劑與血液之比1:9）。另取20μL未抗凝血加入含0.38mL草酸銨稀釋液試管混勻后1h內(nèi)完成人工血小板計數(shù)（方法A）。該管由經(jīng)驗豐富的兩位檢驗師按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程（第4版）》[1]的要求進(jìn)行血小板顯微鏡計數(shù)，并取兩人計數(shù)結(jié)果的平均值。EDTA-K2抗凝血液用電阻抗法（PLT-I）于抽血后30min內(nèi)檢測（方法B）。枸櫞酸鈉抗凝血液用電阻抗法于30min內(nèi)（方法C）進(jìn)行檢測。EDTA-K2抗凝血液用光化學(xué)法在30min內(nèi)（方法D）進(jìn)行檢測。方法C所得結(jié)果乘以1.1進(jìn)行液體抗凝劑用量校正。將其他所有方法與方法A結(jié)果比對。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2.結(jié)果

2.1 各組檢測數(shù)據(jù)與人工計數(shù)比較

方法B組與方法A組比較有明顯統(tǒng)計學(xué)意義。方法C組與方法A組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。方法D組與方法A組比較無明顯統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

表1.不同組血小板計數(shù)結(jié)果(n=29,±s)

表1.不同組血小板計數(shù)結(jié)果(n=29,±s)

組別 平均值(×109/L) r t P方法A組 230.66±78.05方法B組 41.72±19.52 0.541 14.649 0.000方法C組 213.41±88.42 0.884 2.242 0.033方法D組 231.41±81.02 0.996 -0.526 0.603

2.2 瑞氏染色鏡檢

方法B所有標(biāo)本涂片鏡檢均見大片血小板聚集現(xiàn)象。方法C所得數(shù)據(jù)中有2個數(shù)據(jù)與方法A數(shù)據(jù)差異較大，染色鏡檢發(fā)現(xiàn)有大片血小板聚集現(xiàn)象。說明該兩例標(biāo)本屬于對EDTA-K2和枸櫞酸鈉兩種抗凝劑均存在依賴性假性血小板減少。

2.3 兩種抗凝劑均存在依賴性的血標(biāo)本方法比較

兩種抗凝劑均存在依賴性的血標(biāo)本方法A、B、C、D、四種方法數(shù)據(jù)對比。見表2。

表2.兩種抗凝劑均存在依賴性的血標(biāo)本方法A、B、C、D數(shù)據(jù)對比

3.討論

方法C所檢測血小板平均值較低，一個原因是存在兩例兩種抗凝劑均嚴(yán)重聚集的標(biāo)本，另一個原因可能是抽血到檢測時間超過10min后，枸櫞酸鈉抗凝血中的血小板也有輕微的聚集[4]。所以選用更換枸櫞酸鈉抗凝劑的方法，應(yīng)盡量在10min內(nèi)檢測，并涂片鏡檢以排除兩種抗凝劑均聚集的可能性。

PLT-M雖能直觀發(fā)現(xiàn)各種影響血小板計數(shù)因素，但操作耗時費(fèi)力，且對操作者資歷要求高。更換枸櫞酸鈉抗凝劑可糾正大多數(shù)EDTA-PTCP血小板計數(shù)，但對檢測時間有較高要求，更需警惕雙抗體聚集的可能。儀器旁抽血立刻檢測雖可排除抗凝劑的影響，但對行動不便的患者很難實現(xiàn)。且以上方法都需重新抽血，給患者造成二次傷害。另外，實際操作中，也常采用加入阿米卡星干粉的辦法，為血小板解聚，但目前添加阿米卡星干粉的采血管尚未商品化，使用方法的標(biāo)準(zhǔn)化也有待規(guī)范[5]。邁瑞的PLT-O彌補(bǔ)了各種方法的短板，能夠快速高效地為血小板解聚，為臨床提供更可靠的檢驗結(jié)果。

目前EDTA-PTCP發(fā)生的機(jī)制尚不明確，仝德勝等[6]認(rèn)為在EDTA-2K作用下出現(xiàn)的免疫血液中的冷抗血小板自身抗體，使血小板發(fā)生聚集。邁瑞B(yǎng)C-6900血細(xì)胞分析儀PLT-O法是在網(wǎng)織通道內(nèi)對試劑加熱，與血樣進(jìn)行高速攪拌震蕩，配以解聚試劑，以破壞血小板聚集結(jié)構(gòu)。所以能提高EDTAPTCP血小板計數(shù)的準(zhǔn)確性。

總之，EDTA-PTCP標(biāo)本常規(guī)檢測后，血小板數(shù)量減低，儀器提示血小板聚集，涂片染色鏡檢可快速直觀發(fā)現(xiàn)血小板異常減少原因。在懷疑EDTA-PTCP的情況下，打開網(wǎng)織通道，運(yùn)用光學(xué)法可快速有效糾正抗凝劑誘導(dǎo)聚集導(dǎo)致的血小板計數(shù)誤差。