馬祥，戴鏡紅，何雄江，康樺華

(1. 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物衛(wèi)生研究所,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部獸藥與診斷學(xué)科群廣東科學(xué)觀測實驗站,廣東省畜禽疫病防治研究重點實驗室，廣東 廣州 510640；2. 北京愛德士元亨生物科技有限公司，北京 100301；3. 廣州市番禺區(qū)動物防疫監(jiān)督所，廣東 廣州 511400)

豬瘟(Classical swine fever，CSF)是由豬瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)引起豬的一種高度接觸性傳染病，被OIE列為通報疫病。因其發(fā)病率和死亡率高，流行廣泛，引起世界養(yǎng)豬業(yè)的極大關(guān)注[1]。近年，隨著豬瘟病毒在豬場及環(huán)境中長期存在，其耐受性變化及重組事件的發(fā)生使流行特點逐步由原來的大流行轉(zhuǎn)變?yōu)樯l(fā)性和周期性流行，另一方面病毒臨床表現(xiàn)型也出現(xiàn)了如溫和型、非典型及無名高熱綜合征等特點[2-3]。豬瘟的防控工作任務(wù)繁重，發(fā)病機制、疫苗開發(fā)、有效疫苗評價手段仍是豬病專家們研究的重要方向。種豬和后備豬是豬瘟凈化中須高度重視的管理對象，規(guī)?；N豬場的凈化是逐步控制豬瘟并實現(xiàn)豬瘟凈化計劃的重要途徑[4-5]；豬群的豬瘟抗體水平維持在一定水平且整齊，是達到凈化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，是對豬群健康與否的關(guān)鍵評估指標(biāo)[6]。

本研究以兩個生產(chǎn)業(yè)績較好的規(guī)?；N豬場為對象，通過連續(xù)數(shù)年的豬瘟抗體監(jiān)測，并通過評估豬群體免疫合格率、離散度進一步分析總結(jié)免疫后抗體變化規(guī)律，同時結(jié)合豬場生產(chǎn)狀況，總結(jié)并驗證在豬瘟疫苗免疫效果良好狀態(tài)下，豬瘟抗體阻斷率、離散度及抗體值區(qū)間等有效指標(biāo)，形成評價豬瘟疫苗免疫效果的判定標(biāo)準(zhǔn)。據(jù)此，通過免疫方案優(yōu)化及生物安全管理等措施明顯降低豬瘟群體發(fā)生率。通過案例分析為規(guī)?；N豬場提供豬瘟控制方案，同時為豬瘟防控提供一定臨床參考。

1 材料與方法

1.1 血樣的采集及處理

前腔靜脈采血。分別采集不同豬場不同時間豬的血液，每份血樣采集3～5 mL，裝于離心管中，編號，靜置30 min。待血清析出后，干冰冷藏送至實驗室，離心分離血清，備用。

1.2 豬場背景

選取2個生產(chǎn)業(yè)績良好的種豬場：A場有2 400頭存欄母豬，B場有4 000頭存欄母豬，為控制凈化場；豬場A、B場的免疫與采樣背景見表1。

表1 豬場免疫背景評估采樣表

1.3 檢測試劑盒

HerdChek豬瘟抗體ELISA檢測試劑盒的生產(chǎn)廠家為美國愛德士生物科技有限公司(IDEXX Laboratories, Inc.)，試劑盒批號：B021, -4 ℃保存。

1.4 試驗方法

豬瘟抗體ELISA檢測方法參照HerdChek豬瘟抗體ELISA檢測試劑盒的說明書操作。

有效性判定標(biāo)準(zhǔn)：設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陽性孔和標(biāo)準(zhǔn)陰性孔，陰性對照孔平均OD450高于0.50，陽性對照孔阻斷率高于50%。

1.5 抗體水平監(jiān)測分析方法

1.5.1 A豬場抗體水平檢測

采用ELISA方法對不同生產(chǎn)階段豬、選取不同時間段開展豬瘟抗體檢測，結(jié)合生產(chǎn)指標(biāo)業(yè)績情況，分析CSFV抗體阻斷率、離散度等指標(biāo)變化情況。具體采集樣品的背景如表2。

表2 2014年B豬場監(jiān)測采樣情況表

表2 A豬場CSFV抗體檢測樣本背景情況表

1.5.2 B豬場抗體水平檢測

選取B豬場中一條開展豬瘟控制試驗的生產(chǎn)線。該條生產(chǎn)線豬瘟疫苗采取普免策略(3次/年，免疫間隔時間4個月)，含種豬500頭。控制方案如下：首先用購置的HerdChek豬瘟抗體ELISA檢測試劑盒對生產(chǎn)線上所有豬進行豬瘟抗體測定。根據(jù)測定結(jié)果分類處理，對于阻斷率低于40%的豬進行隔離，并常規(guī)劑量補充免疫1次，6周后同樣的方法測定抗體，對于抗體陽性豬歸群處理，陰性豬只采取完全隔離或者淘汰。距上次測定3個月后，同樣的方法對整條線種豬群再處理1次。執(zhí)行控制方案持續(xù)2年時間(2013年至2014年)。

2 結(jié)果與分析

2.1 A豬場2011年至2012年豬瘟抗體水平監(jiān)測結(jié)果

對A豬場2011年CSF抗體水平進行分析，分析結(jié)果如表3所示。A豬場種豬群在免疫3～4周后CSF抗體平均阻斷率介于63.61%～71.24%。而哺乳母豬在長達4個月的免疫間隔期下抗體呈陰性，母源抗體的干擾使哺乳仔豬陽性率達50%。

表3 A豬場CSF抗體陽性率、離散度和平均值 %

2012年，種豬群在免疫后6～8周后CSF抗體平均阻斷率可達71%，離散度CV值約為27%，結(jié)果見表4。

表4 A豬場2012年CSF抗體陽性率、離散度和平均值 %

A豬場2011年至2012年生產(chǎn)業(yè)績數(shù)據(jù)見表5。該場的配種分娩率均在90%以上，成活率也在91%以上，豬場的種豬群生產(chǎn)業(yè)績良好。結(jié)合豬瘟抗體變化規(guī)律，該豬群在免疫后平均阻斷率普遍高于50%，同時離散度CV值低于40%，證實該場的豬瘟免疫效果良好。

2.2 B豬場2013年至2014年豬瘟抗體監(jiān)測結(jié)果

2.2.1 B豬場2013年豬瘟抗體檢測結(jié)果

如表6所示，B豬場生產(chǎn)線通過實施CSF控制計劃后，不同種豬群的抗體陽性率平均值均高于85%，平均離散度達8.19%，其中B豬場種豬群的CSF抗體陽性率平均值為89.79%，離散度為7.49%。因此，該場種豬群豬瘟疫苗免疫效果在CSF控制策略下表現(xiàn)良好。

表6 B豬場2013年豬瘟抗體陽性率、離散度和平均值

2.2.2 B豬場CSF控制前后生產(chǎn)性能比較

比較2012年和2013年豬群的生產(chǎn)性能，結(jié)果如表7所示。豬瘟控制計劃使豬場窩均產(chǎn)活仔數(shù)增加了0.8頭，增長了8.2%。斷奶前仔豬平均死亡率下降2%，母豬每年提供上市的豬增加近3%。綜合評估，生產(chǎn)性能提高較大。

表7 B豬場2012和2013年生產(chǎn)性能一覽表

2.2.3 B豬場2014年豬瘟抗體檢測結(jié)果分析

如表8所示，2014年該場群體CSF抗體陽性率平均值為60.86%，離散度平均值為35.67%。其中在普免4周后和8周后母豬群均獲得較高的抗體水平(抗體平均值分別為78.4%和73.93%)，對應(yīng)抗體離散度分別為17.32%和21.62%；在普免后4～6周和8～10周生長豬和肥育豬均獲得較高的抗體水平(抗體平均值分別為68%和69.88%)，對應(yīng)抗體離散度分別為15.23%和18.47%；哺乳仔豬通過母源抗體獲得較好的保護率；各類豬群均呈現(xiàn)較高的抗體水平。豬場在實施豬瘟控制計劃1年后，其群體的豬瘟抗體值仍高于70%，同時商品豬在二免后6周高于65%，且種豬群和商品豬群的CSF抗體離散度CV值均低于20%。

表8 B豬場2014年豬瘟抗體陽性率、離散度、平均值結(jié)果

3 討論

本研究以2個規(guī)?；N豬場為對象，4年連續(xù)監(jiān)測豬瘟抗體值及生產(chǎn)業(yè)績數(shù)據(jù)。通過分析數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，在豬群抗體檢測結(jié)果判定中群體免疫合格率和抗體離散度是重要的衡量指標(biāo)，豬群免疫效果良好的標(biāo)準(zhǔn)為豬瘟抗體的平均阻斷率高于50%，同時離散度CV值低于25%；此外，2個豬場豬瘟病原檢測結(jié)果均為陰性；通過開展豬繁殖與呼吸道綜合征以及豬偽狂犬病的免疫監(jiān)測，種豬群在4年期間均沒有豬繁殖與呼吸道綜合征的流行或發(fā)病，豬偽狂犬病抗原維持陰性，這從另一個角度說明，豬群豬瘟抗體可以作為豬群健康的參考指標(biāo)之一，豬群的健康提高了豬對疫病的抵抗力，降低了豬場感染其他疾病的風(fēng)險。

豬瘟控制凈化場B培育健康種群的成功經(jīng)驗提示，種豬和后備豬群的凈化是關(guān)鍵因素。分析其數(shù)據(jù)，可知該場通過控制方案后，豬瘟抗體陽性率雖然在一定范圍內(nèi)波動，但有明顯提高，其數(shù)值以及抗體離散度都趨于穩(wěn)定(平均抗體陽性率高于85%，離散度低至4.35%)，可見豬瘟控制計劃的有效性；進一步推測該場豬瘟綜合防控的關(guān)鍵是建立在后備和種豬豬群的凈化完成健康種群的培育。其中對規(guī)?；i場中豬瘟進行控制的有效方法是從源頭上對種豬群實施凈化。具體的凈化措施包括如下幾方面：首先要堅持對種豬群和后備豬群約半年期的無差別病原篩查，結(jié)合豬瘟阻斷率的高低判斷抗體免疫效果，據(jù)此采取不同的措施，包括對低于40%的豬進行隔離。通過加強免疫并配以觀察和馴化，再經(jīng)抗體檢測，評估進入種豬群的可能性，最終使豬瘟抗體值處于一定的標(biāo)準(zhǔn)區(qū)間，達到豬群穩(wěn)定的目的。豬場通過3到5個凈化流程實現(xiàn)豬瘟病毒帶毒率從30%降至低于1%。

相對于血清學(xué)抗體效價(尤其是ELISA)，豬瘟抗體中和效價更能反映出疫苗對豬的保護能力，但中和抗體檢測方法相對繁瑣難以推廣，所以通過評估二者的相關(guān)性以期用豬瘟ELISA方法代替中和抗體檢測方法并用于預(yù)估疫苗保護力是有效的途徑[7]。已有研究對豬瘟抗體ELISA檢測試劑盒(IDEXX)進行檢測抗體效價和常規(guī)中和抗體效價相關(guān)性進行評估，相關(guān)系數(shù)可達0.863，說明在一定程度上可以反映出豬群的豬瘟抗體水平，并用于評估豬群對豬瘟的抵抗力[8]。分析主要原因是E蛋白可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生中和抗體，同時可激發(fā)豬體對豬瘟病毒產(chǎn)生抵抗性免疫應(yīng)答，而該試劑盒包被抗原為E蛋白。評估豬群對豬瘟的抵抗力，在中和抗體滴度不低于1∶32時認(rèn)為抗體合格，對應(yīng)采用HerdChek豬瘟抗體ELISA檢測試劑盒檢測豬瘟抗體的抗體阻斷率50%。因此，該試劑盒可用于豬群的豬瘟抗體水平檢測及豬群對豬瘟的抵抗力評估[9-10]。綜上所述，在規(guī)?；i場豬瘟的控制過程中，由于豬瘟抗體值反映了豬體對豬瘟病毒的易感性，所以豬瘟疫苗免疫成敗的關(guān)鍵是針對性地監(jiān)測豬群免疫抗體，并確定科學(xué)的免疫適宜期。同時，針對豬瘟野毒感染風(fēng)險與豬群豬瘟疫苗免疫合格率及抗體離散度的對應(yīng)關(guān)系的問題至今未見深入的研究報道，在未來一段時間，它仍是一個值得探討的問題。多數(shù)專家堅持認(rèn)為，群體免疫保護率達到85%是防控豬瘟的關(guān)鍵[11]。同時，商品豬豬瘟抗體離散度在25%，而種豬群需低于20%。對于大部分規(guī)?；B(yǎng)豬場，由于擁有先進的管理水平和專業(yè)的技術(shù)人員，以及相對完備的實驗室診斷技術(shù)平臺，有能力對豬場群體的豬瘟抗體水平開展長期或階段性的監(jiān)測，據(jù)此及時調(diào)整其免疫程序，控制豬瘟的群體免疫合格率在90%以上，離散度在20%以內(nèi)。