新城疫（ND）俗稱“雞瘟”，由新城疫病毒（NDV）的強(qiáng)毒株引起多種禽類急性、高度接觸性、致死性傳染病，人類偶爾亦可感染，給世界禽業(yè)養(yǎng)殖帶來了毀滅性打擊，造成極為嚴(yán)重的影響[1]。一年四季均可以發(fā)生此病。主要的傳播方式是接觸傳播，主要的傳染源是患病雞、帶毒雞的分泌物。

本實(shí)驗(yàn)取雞新城疫檢驗(yàn)和基礎(chǔ)種子批凍干毒存放于-70℃保存，并于不同的保存時(shí)間隨機(jī)抽樣，進(jìn)行病毒含量測定、無菌檢驗(yàn)及對雞毒力測定，確定凍干毒種-70℃條件下的保存期；將檢驗(yàn)和生產(chǎn)種子批濕毒存放于-20℃保存，并于保存后不同時(shí)間隨機(jī)取出，進(jìn)行病毒含量測定、無菌檢驗(yàn)及對雞毒力測定，確定濕毒-20℃條件下的保存期，現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料

1.1 毒種（表1）

表1 毒種

1.2 檢驗(yàn)用培養(yǎng)基無菌檢驗(yàn)用硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（T.G）、酪胨瓊脂（G.A）和葡萄糖蛋白胨（G.P），自己制備；支原體檢驗(yàn)用Frey氏培養(yǎng)基，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.3 SPF雞及SPF雞胚由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司五常SPF雞場提供。

2 方法

2.1 準(zhǔn)備將檢驗(yàn)和基礎(chǔ)種子批凍干毒存放于-70℃保存，并于保存當(dāng)日和保存后12、24、36、48、60、72、75和78個(gè)月隨機(jī)抽樣，分別進(jìn)行病毒含量測定、無菌檢驗(yàn)及對雞毒力的測定；檢驗(yàn)和生產(chǎn)種子批濕毒存放于-20℃保存，并于保存當(dāng)日和保存后3、6、9、12、15和18個(gè)月，隨機(jī)抽樣分別進(jìn)行病毒含量測定、對雞毒力測定和無菌檢驗(yàn)。

2.2 病毒含量將毒種用生理鹽水作10倍系列稀釋，取10-7、10-8、10-93個(gè)稀釋度，各尿囊腔內(nèi)接種10日齡SPF雞胚5枚，每胚0.1mL，置36～37℃繼續(xù)孵育，24h以前死亡的雞胚棄去不計(jì)，記錄24～72h雞胚死亡情況，按Reed-Muench法計(jì)算ELD50。

2.3 對雞毒力用60和90日齡SPF雞10只，各肌肉注射病毒液0.1mL（含105.0ELD50），觀察14d，記錄雞死亡結(jié)果。

2.5 無菌檢驗(yàn)按照現(xiàn)行《中國獸藥典》附錄進(jìn)行檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 凍干毒種保存期試驗(yàn)結(jié)果

3.1.1 不同保存時(shí)間凍干毒種病毒含量及血凝價(jià)測定結(jié)果（表2）

表2 病毒含量及血凝價(jià)測定結(jié)果

3.1.2 不同保存時(shí)間檢驗(yàn)用凍干毒種對雞毒力試驗(yàn)結(jié)果（表3）

表3 對雞毒力量測定結(jié)果

3.1.3 不同保存時(shí)間凍干毒種無菌檢驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果（表4）

表4 無菌檢驗(yàn)結(jié)果

(續(xù)表)

從表2～4結(jié)果可以看出，檢驗(yàn)種子和基礎(chǔ)種子批凍干毒種于-70℃保存75個(gè)月，病毒含量和血凝價(jià)與保存當(dāng)日無明顯差異，無細(xì)菌和霉菌污染；檢驗(yàn)用凍干強(qiáng)毒種于-70℃保存75個(gè)月與保存當(dāng)日均可致60和90日齡雞9/10～10/10死亡；無細(xì)菌和霉菌污染。

3.2 濕毒保存期試驗(yàn)結(jié)果

3.2.1 不同保存時(shí)間檢驗(yàn)和生產(chǎn)毒種濕毒病毒含量測定結(jié)果（表5）

從表5結(jié)果可以看出，檢驗(yàn)和生產(chǎn)種子批濕毒于-20℃保存15個(gè)月，病毒含量和血凝價(jià)與保存當(dāng)日無明顯差異，保存18個(gè)月病毒含量下降1個(gè)滴度以上，血凝價(jià)均為1：256。

表5 病毒含量及血凝價(jià)測定結(jié)果

3.2.2 不同保存時(shí)間檢驗(yàn)用濕毒種對雞毒力試驗(yàn)結(jié)果（表6）

表6 對雞毒力量測定結(jié)果

從表6結(jié)果可以看出，檢驗(yàn)種子批濕毒于-20℃保存15個(gè)月與保存當(dāng)日均可致60和90日齡雞9/10～10/10死亡，保存18個(gè)月僅可致6/10～7/10死亡。

3.2.3 不同保存時(shí)間毒種濕毒無菌檢驗(yàn)測定結(jié)果（表7）

表7 濕毒無菌檢驗(yàn)結(jié)果

(續(xù)表)

從表7結(jié)果可以看出，檢驗(yàn)和生產(chǎn)種子批濕毒于-20℃保存18個(gè)月與保存當(dāng)日均無細(xì)菌、霉菌污染。

4 結(jié)論

4.1 雞新城疫病毒檢驗(yàn)用凍干毒種于-70℃保存75個(gè)月，病毒含量、血凝價(jià)與保存當(dāng)日無明顯變化，且無細(xì)菌和霉菌污染；檢驗(yàn)用凍干強(qiáng)毒種對雞的毒力與保存當(dāng)日無明顯差異，無細(xì)菌和霉菌污染；濕毒于-70℃保存15個(gè)月，病毒含量、血凝價(jià)與保存當(dāng)日無明顯變化，且無細(xì)菌和霉菌污染；檢驗(yàn)用凍干強(qiáng)毒種對雞的毒力與保存當(dāng)日無明顯差異，無細(xì)菌和霉菌污染。保存78個(gè)月病毒含量下降1個(gè)滴度以上，檢驗(yàn)強(qiáng)毒對雞的毒力下降。

4.2 雞新城疫病毒檢驗(yàn)與生產(chǎn)種子批濕毒于-20℃保存15個(gè)月，病毒含量、血凝價(jià)、對雞的毒力與保存當(dāng)日無明顯差異，無細(xì)菌、霉菌污染；保存18個(gè)月病毒含量下降1個(gè)滴度以上，檢驗(yàn)強(qiáng)毒對雞的毒力下降。