王宏偉，李新萍，李劼，史文軍，李留江，張孝恩，陳強斌

（1.第八師石河子畜牧獸醫(yī)工作站，石河子 832000；2.石河子大學，石河子 832000）

結核病是由結核分枝桿菌引起的一種人和動物共患的一種慢性傳染病，我國將其列為二類動物疫病，主要有人型、牛型及禽型等，病原可在人、畜、禽之間相互傳播[1～3]。據資料報道，人的結核病有10%～15%以上是由牛分枝桿菌引起，因此，控制牛結核病是防控人類結核病的重要途徑之一。牛結核病防制的有效措施之一是根據每個牛場結核病發(fā)生的實際情況制定出適合本場的檢測防控方案，準確及時地檢出結核病牛，并對檢出陽性牛按照《病死及病害動物無害化處理技術規(guī)范》進行隔離-撲殺-無害化處理。

多年來石河子地區(qū)結核病嚴格按照《動物結核病診斷技術》(GB/T 18645-2002)要求，采用牛型提純結核菌素（PPD）皮內變態(tài)反應進行檢測，對檢測出的陽性牛進行撲殺-無害化處理，有效控制了結核病的進一步擴散傳播，凈化了疾病。近年來要求在皮內變態(tài)反應檢測基礎上需對陽性牛隔離45d后進一步進行比較變態(tài)反應，對比較變態(tài)反應檢測出的牛型結核陽性牛，才能按照《病死及病害動物無害化處理技術規(guī)范》進行隔離-撲殺-無害化處理。但由于受隔離條件的限制，在隔離期間病牛通過呼吸道、消化道等的排泄物，加大了對環(huán)境的污染，增加了牛群中健康牛感染結核桿菌的風險，增大了防控難度，這在一定程度上影響了疾病的控制與凈化。采用經濟實用有效的手段，實現疾病的快速準確診斷并撲殺是防控結核病的關鍵，同時還可為決策部門防控結核病提供有效的數據資料。為此，筆者所在研究團隊于2019年3～10月份對牛型PPD皮內變態(tài)反應檢出的475頭陽性牛，隔離45d后使用牛型提純結核菌素、禽型提純結核菌素采用比較變態(tài)反應方法進行檢測。結果顯示采用比較變態(tài)反應方法對牛型提純結核菌素檢測出的475頭陽性牛進行檢測，其中檢測出牛型結核陽性牛457頭，吻合率平均為96.21%；禽型結核11頭。在現有飼養(yǎng)條件下，石河子地區(qū)部分牛場沒有獨立的符合防疫條件的隔離圈地舍，用于隔離檢測陽性牛的圈舍無法與場內檢測陰性牛完全隔開，致使陰性?？赡芡ㄟ^病牛呼吸道、消化道等的排泄物或直接接觸陽性牛增加了感染結核桿菌的風險，增大了防控難度，造成了結核桿菌難以根除。為驗證這一結論，筆者在四個沒有建立符合防疫條件的獨立隔離圈舍的牛場分兩組做了對照試驗，第一組是單純采用牛型提純結核菌素對全場20日齡以上的牛全群檢測，檢測出的陽性牛按照《病死及病害動物無害化處理技術規(guī)范》進行隔離-撲殺-無害化處理，全群剩余的牛間隔45d再次用牛型提純結核菌素檢測；第二組是對全場20日齡以上的牛全群先采用牛型提純結核菌素檢測，檢測出的陽性牛及可疑牛隔離45d再采用比較變態(tài)反應檢測，比較變態(tài)反應檢測確認為牛型陽性牛按照《病死及病害動物無害化處理技術規(guī)范》進行隔離-撲殺-無害化處理，結果顯示第一組間隔45d連續(xù)3次檢測時，至第四次檢測時新增陽性牛數量為4頭；第二組隔離45d檢測時陽性牛數量增加，新增陽性頭數為81頭。因此，對沒有建立符合防疫條件的獨立隔離圈地舍的場采用牛型提純結核菌檢測，通過增加檢測次數對檢測出的陽性牛進行撲殺-無害化處理才能有效根除結核桿菌。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 結核菌素來源

牛型提純結核菌素（液體制品）購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所（批號：201701，規(guī)格：10mL/瓶，2萬IU/mL）；禽型提純結核菌素（凍干制品）購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所（批號：201601，規(guī)格：5mL/瓶，2.5萬IU/mL）。

1.1.2 器材

電動剪毛剪、1mL注射器、電子游標卡尺、0.9%NaCl、75%酒精等。

1.1.3 供檢測牛場及供檢牛

石河子地區(qū)的10家規(guī)模牛場（編號分別為牛場一、牛場二、牛場三、牛場四、牛場五、牛場六、牛場A、牛場B、牛場C、牛場D），供檢牛型提純結核菌素皮內變態(tài)反應試驗檢測的陽性牛。

1.1.4 前期準備

奶牛結核病通過牛型PPD皮內變態(tài)反應方法檢測完成后，對檢出的陽性牛，要求奶牛場立刻采取隔離措施，加強消毒，減少外來因素的干擾，并記錄牛號，45d后用牛型提純結核菌素和禽型提純結核菌素進行皮內比較變態(tài)反應試驗。

1.2 試驗方法

按照國家標準-動物結核病診斷技術（GB/T18645-2002）規(guī)定的操作方法及結果判定標準進行。

2 結果

2.1 奶牛結核病比較變態(tài)反應檢測結果

表1 奶牛結核病比較變態(tài)反應檢測結果

從表1中牛型結核和禽型結核比較變態(tài)反應檢測統(tǒng)計結果看，對采用牛型PPD頸部皮膚變態(tài)反應檢測的475頭陽性牛，45d后用牛型和禽型結核分枝桿菌PPD進行比較皮內變態(tài)反應試驗，結果顯示：患有牛型結核病的457頭，符合率在93.18%～100%之間，平均96.21%。禽型結核牛11頭，陽性率在0～6.8%之間，平均2.32%。

2.2 單純采用牛型提純結核菌素與先采用牛型提純結核菌素再采用比較變態(tài)反應進行確認的檢測對比

石河子地區(qū)絕大多數的奶牛養(yǎng)殖場無符合防疫條件的獨立的隔離圈舍，大部分隔離圈舍是在本牛場原圈舍改造而成，無法將陽性牛與健康牛完全分開。針對這一實際情況項目組選擇了四個牛場分成兩組進行了試驗，一組是對牛型PPD皮內變態(tài)反應檢出的結核陽性牛隔離45d后使用牛型提純結核菌素、禽型提純結核菌素采用比較變態(tài)反應方法進行牛型與禽型確認；另一組是只進行牛型PPD檢測，檢出了陽性牛按照國家相關規(guī)定進行撲殺無害化處理等措施，間隔45d再次用相同方法進行檢測。試驗詳情如下：

表2 采用牛型提純結核菌素、禽型提純結核菌素比較變態(tài)反應檢測結果

表3 采用單純牛型結核菌素皮內變態(tài)反應檢測結果

從表2、表3可以看出，采用單純牛型結核菌素對每次檢出的陽性牛按照國家相關規(guī)定進行撲殺、無害化處理，間隔45d后再次檢測時新增陽性數明顯下降，而采用比較變態(tài)反應檢測的場由于無獨立隔離圈舍不能將陽性牛與健康牛完全分開，間隔45d再次檢測時新增陽性數量明顯增加。

3 討論與分析

3.1 由于牛型結核分枝桿菌PPD皮內變態(tài)反應試驗具有便于野外作業(yè)、價格低廉、易于操作等優(yōu)點，是我國國家標準規(guī)定的方法之一，是當前石河子地區(qū)區(qū)最常用的牛結核病診斷方法。此方法雖存在一些非特異性反應，但在奶牛結核檢測中出現非特異性反應情況十分復雜，如：由人型和禽型結核分枝桿菌引起、由副結核及其他分枝桿菌引起、奶牛生理性的（發(fā)情期、妊娠后期，其敏感性增高）、飼料配合不平衡，日糧中蛋白質飼料過高，或過度飲食酸性飼料、臨床上使用激素、藥物制劑及接種某些疫苗、機體患有某些傳染病或寄生蟲病以及人為操作不當等等原因。因此，在奶牛結核檢測中，在綜合考慮上述因素基礎上，不斷提高檢測人員的技術水平，在檢測過程中嚴格按照操作規(guī)程要求進行，減少由非特異性因素及人為因素對檢測結果的影響從而確保檢測結果的準確。

3.2 2019年筆者使用牛型提純結核菌素PPD和禽型結核菌素PPD試驗，對采用牛型提純結核菌素檢測出的475頭結核陽性牛進一步采用比較變態(tài)反應進行檢測，結果顯示，采用比較變態(tài)反應檢測出的牛結核與單純采用牛型提純結核菌素檢測的結果符合率在93.18%～100%之間，平均96.21%，感染禽型結核比例很低。

3.3 石河子地區(qū)絕大多數奶牛養(yǎng)殖場無符合條件的隔離圈舍，或者隔離圈舍的建設和改造不甚規(guī)范，在距離、位置設定等方面與標準要求有較大的差距，同時也不能做到人員、飼養(yǎng)工具設備完全隔離，此外新疆冬季時間較長，冬季封閉式管理， 都存在較大的風險。

3.4 檢測診斷牛結核病的主要目的是及時檢出牛群中陽性牛，對其進行撲殺并無害化處理，以凈化牛群、控制結核的傳播擴散。根據筆者在石河子地區(qū)所做的大量實驗并對數據進行科學分析后得出結論，單純使用牛型提純結核菌素檢測與采用比較變態(tài)反應檢測結核兩種檢測方法檢出率差異不顯著。

為此建議，針對牛結核控制凈化的需要，應依據本地的實際情況采用符合國家標準要求的檢測方法，對檢出的陽性牛及時進行撲殺并進行無害化處理，縮短陽性牛在養(yǎng)殖場生活時間，對有效控制疾病的傳播至關重要。

4 結論

根據本研究團隊所做的試驗結果及本地區(qū)奶牛場的實際情況，通過不斷提高檢測技術水平的基礎上，在符合國家標準要求的前提下，對結核病污染牛場按照《動物結核病診斷技術》(GB/T 18645-2002)要求，通過加大對牛群檢測頻次，采用牛型結核分枝桿菌PPD皮內變態(tài)反應試驗對牛場進行結核病的檢測，并對檢測出的陽性牛嚴格按相關法律法規(guī)進行隔離撲殺無害化處理，最大限度降低患病牛通過消化道、呼吸道等排泄物對環(huán)境的污染，降低與牛群中健康奶牛的接觸，牛結核陽性檢出率呈明顯下降 ，從而加快結核病控制凈化的步伐。將健康牛感染的風險降至最低，實現公共衛(wèi)生安全。