(黑龍江省農(nóng)墾科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，哈爾濱 150038)

牛副結(jié)核病是由副結(jié)核分枝桿菌（MAP）引起的以牛慢性增生性、頑固性腸炎和進(jìn)行性消瘦為特征的人畜共患傳染病，是被我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部列為二類(lèi)多種動(dòng)物共患病的一種傳染病[1,2]。該病主要由消化道感染，處于排菌期的牛通過(guò)糞便、乳汁排菌，其他易感牛只通過(guò)糞口途徑感染該菌。該病的潛伏期很長(zhǎng)，從感染到出現(xiàn)臨床癥狀一般需要2～3年。該病目前呈世界性分布，養(yǎng)牛業(yè)發(fā)達(dá)的國(guó)家，如英國(guó)、法國(guó)、丹麥、荷蘭、德國(guó)等國(guó)尤為多見(jiàn)[3～5]。我國(guó)最早在內(nèi)蒙古發(fā)現(xiàn)并確診了奶牛副結(jié)核病的發(fā)生，此后遼寧、黑龍江、內(nèi)蒙古、貴州、陜西、河北等地區(qū)相繼報(bào)道了本病的流行；近年來(lái)本病幾乎遍及東北、西北、華北等地區(qū)[6～8]。據(jù)調(diào)查，副結(jié)核病正在世界范圍內(nèi)逐漸傳入新的地區(qū)，對(duì)牛羊養(yǎng)殖業(yè)來(lái)說(shuō)已經(jīng)是一個(gè)危害廣泛、急迫的國(guó)際問(wèn)題。近年來(lái)由于奶牛和肉牛養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅速，生產(chǎn)規(guī)模越來(lái)越大，集約化程度越來(lái)越高，牛流動(dòng)范圍越來(lái)越廣，副結(jié)核病的發(fā)生呈擴(kuò)大的趨勢(shì)，全世界已經(jīng)有168個(gè)國(guó)家和地區(qū)報(bào)道此病發(fā)生。

為掌握黑龍江省奶牛副結(jié)核病流行現(xiàn)狀，為更好地控制該病的流行傳播提供科學(xué)依據(jù)，筆者于2018-2019年針對(duì)黑龍江省規(guī)?；?chǎng)進(jìn)行了血清學(xué)調(diào)查研究，本研究共采集9個(gè)牧場(chǎng)的泌乳牛和育成牛血清進(jìn)行了檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 被檢血清

表1 2019年各調(diào)查牧場(chǎng)DHI指標(biāo)

2018年，在黑龍江省不同地區(qū)選取9個(gè)規(guī)?；膛?chǎng)進(jìn)行了調(diào)研。被檢牛只進(jìn)行尾靜脈采血，分離血清后-20℃保存，用于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。2019年在相同牛場(chǎng)隨機(jī)重復(fù)采樣。由于犢牛血清很難檢測(cè)到抗體陽(yáng)性，本試驗(yàn)所采樣品均為泌乳牛和成母牛，采樣牛場(chǎng)均未免疫副結(jié)核分枝桿菌疫苗。采樣同時(shí)對(duì)相應(yīng)牛場(chǎng)進(jìn)行了生產(chǎn)情況的調(diào)查，具體情況見(jiàn)表1，由于編號(hào)為6、7的兩個(gè)牛場(chǎng)沒(méi)有參加奶牛生產(chǎn)性能測(cè)定（DHI），所以數(shù)據(jù)缺失。

1.2 檢測(cè)試劑盒

牛副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)于美國(guó)IDEXX公司。

1.3 結(jié)果判定

試驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。陽(yáng)性對(duì)照平均值（PC）≥0.350，且陽(yáng)性對(duì)照平均值（PC）與陰性對(duì)照平均值（NCA450）的比值≥3.00的條件下，檢測(cè)結(jié)果有效，否則試驗(yàn)不成立，需按操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

按照以下公式計(jì)算并進(jìn)行結(jié)果判定：樣品S/P≤45% ，判為 MAP 抗體陰性；當(dāng)45＜S/P＜55%，判為可疑；S/P≥55%，判為 MAP 抗體陽(yáng)性。

式中，PC為陽(yáng)性對(duì)照值；NCA450為陰性對(duì)照值。

2 結(jié)果

2.1 參與調(diào)查的規(guī)?；膛?chǎng)副結(jié)核感染率

表2 2018-2019年黑龍江省規(guī)?；膛?chǎng)副結(jié)核檢測(cè)結(jié)果

本次調(diào)查共檢測(cè)9個(gè)牛場(chǎng)，所有牛場(chǎng)均檢測(cè)出血清陽(yáng)性牛，被檢牛場(chǎng)副結(jié)核感染率100% 。

2018年共檢測(cè)樣品7 494份，陽(yáng)性355份，陽(yáng)性率4.74%。陽(yáng)性率最低的牛場(chǎng)為0.66%，最高的為9.33%。

2019年共檢測(cè)樣品7 541份，陽(yáng)性325份，陽(yáng)性率4.31%。檢測(cè)結(jié)果表明，除5號(hào)、8號(hào)和9號(hào)牛場(chǎng)外，其余牛場(chǎng)樣品陽(yáng)性率都略有增加。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2 副結(jié)核抗體陽(yáng)性率與牛場(chǎng)DHI指標(biāo)相關(guān)性分析

本次調(diào)查共有7個(gè)牧場(chǎng)為DHI參測(cè)場(chǎng)，測(cè)定的項(xiàng)目包括日平均產(chǎn)奶量、305d產(chǎn)奶量、平均乳脂率和平均乳蛋白率（表3）。通過(guò)表3可以看出產(chǎn)奶量最高的3號(hào)牛場(chǎng)（305d產(chǎn)奶量11.44t）抗體陽(yáng)性率5.5%，產(chǎn)奶量最低的4號(hào)場(chǎng)（305d產(chǎn)奶量8.12t）抗體陽(yáng)性率3.0%?？贵w陽(yáng)性率與牧場(chǎng)生產(chǎn)性能數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。

表3 2019年副結(jié)核抗體陽(yáng)性率與牧場(chǎng)生產(chǎn)性能數(shù)據(jù)匯總

使用CORREL 函數(shù)分別計(jì)算副結(jié)核陽(yáng)性率與平均產(chǎn)奶量、305d產(chǎn)奶量、平均乳脂率、平均乳蛋白的相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 副結(jié)核陽(yáng)性率與牛場(chǎng)生產(chǎn)性能相關(guān)性分析

由表4可以看出，副結(jié)核陽(yáng)性率與日平均產(chǎn)奶量和305d產(chǎn)奶量呈正相關(guān)，與平均乳脂率和平均乳蛋白率呈現(xiàn)低水平負(fù)相關(guān)。

2.3 副結(jié)核抗體陽(yáng)性牛與陰性牛生產(chǎn)性能比較分析

根據(jù)2019年副結(jié)核抗體檢測(cè)結(jié)果，篩選8號(hào)牛場(chǎng)2013年和2014年出生的牛只，泌乳牛均為第三胎次的DHI監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)；篩選9號(hào)牛場(chǎng)2013年和2016年出生牛只，分別為第三胎次和第一胎次的DHI監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)。使用CNDHL數(shù)據(jù)分析軟件對(duì)DHI監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析得出如下結(jié)果：

通過(guò)篩選，8號(hào)牛場(chǎng)2013年牛只中副結(jié)核抗體陽(yáng)性牛共有11頭，抗體陰性牛196頭；2014年牛只中副結(jié)核抗體陽(yáng)性牛共有5頭，抗體陰性牛134頭（表5）。

9號(hào)牛場(chǎng)2013年牛只中副結(jié)核抗體陽(yáng)性牛共有16頭，抗體陰性牛196頭；2016年牛只中副結(jié)核抗體陽(yáng)性牛共有8頭，抗體陰性牛165頭（表6）。

表5 8號(hào)牛場(chǎng)2019年DHI監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)

表6 9號(hào)牛場(chǎng)2019年DHI監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)

監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)使用SPSS軟件進(jìn)行雙尾t檢驗(yàn)分析，使用graphpad prism 8軟件分析作圖，得出結(jié)果如圖1～4。

圖1 8號(hào)牛場(chǎng)2013年出生牛

圖2 8號(hào)牛場(chǎng)2014年出生牛

圖3 9號(hào)牛場(chǎng)2013年出生牛

圖4 9號(hào)牛場(chǎng)2016年出生牛

由圖1和圖2可以看出，8號(hào)牛場(chǎng)副結(jié)核抗體陰性牛305d奶量、成年當(dāng)量、平均乳脂率平均乳蛋白率均高于陽(yáng)性牛，差異不顯著（P＞0.05）。

由圖3和圖4可以看出，9號(hào)牛場(chǎng)副結(jié)核抗體陰性牛305d奶量、成年當(dāng)量高于陽(yáng)性牛其中2013年牛只結(jié)果差異顯著（P＜0.01）；副結(jié)核抗體陰性的牛平均乳脂率和平均乳蛋白率均低于陽(yáng)性牛，其中2013年牛只結(jié)果差異顯著（P＜0.01）。

3 討論

3.1 本試驗(yàn)采用血清學(xué)ELISA方法于2018-2019年間對(duì)黑龍江省奶牛場(chǎng)進(jìn)行了副結(jié)核的血清學(xué)調(diào)查，檢測(cè)的牛場(chǎng)中副結(jié)核陽(yáng)性率100%，說(shuō)明黑龍江地區(qū)規(guī)?；?chǎng)普遍存在奶牛副結(jié)核病。兩年間，除去5號(hào)、8號(hào)和9號(hào)牛場(chǎng)，其他6個(gè)牛場(chǎng)的陽(yáng)性率均有不同程度的增加，分別增加了1.1、2.74、0.04、0.27、1.26、0.42個(gè)百分點(diǎn)，說(shuō)明該病的感染在持續(xù)發(fā)生。由于絕大多數(shù)的感染牛無(wú)癥狀，而臨床發(fā)病牛的生產(chǎn)能力降低，在確診之前已經(jīng)被淘汰了，所以副結(jié)核感染導(dǎo)致的牛只淘汰率很難估計(jì)，使該病在奶牛場(chǎng)的隱性感染不能引起管理者的重視，并未采取相應(yīng)的防治措施是牛場(chǎng)感染率增加的首要原因。

2018年陽(yáng)性率僅為0.66%的2號(hào)牛場(chǎng)是建場(chǎng)時(shí)間很短的新場(chǎng)，該場(chǎng)在檢出副結(jié)核陽(yáng)性后并沒(méi)有引起足夠的重視。由于檢出牛沒(méi)有明顯副結(jié)核癥狀，牛場(chǎng)沒(méi)有采取相關(guān)防治措施，導(dǎo)致2019年陽(yáng)性數(shù)明顯增多，陽(yáng)性率增加到3.4%。

5號(hào)、8號(hào)和9號(hào)牛場(chǎng)為本研究項(xiàng)目的合作牛場(chǎng)，通過(guò)幾次檢測(cè)篩查淘汰陽(yáng)性牛只和初步實(shí)施防控措施，2019年的陽(yáng)性率較2018年均有不同程度的下降，分別由5.28%、3.56%和9.33%下降到2.3%、3.0%和4.85%。說(shuō)明雖然副結(jié)核在奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)普遍存在，但是通過(guò)對(duì)引入牛的嚴(yán)格檢測(cè)、對(duì)牛場(chǎng)的定期篩查盡早診斷淘汰病牛、科學(xué)的飼養(yǎng)管理等措施，最終是可以實(shí)現(xiàn)牛場(chǎng)副結(jié)核轉(zhuǎn)陰的目標(biāo)的。

3.2 本研究的結(jié)果顯示副結(jié)核陽(yáng)性率與牛場(chǎng)的整體生產(chǎn)性能呈較低正相關(guān)性，與乳成分（平均乳脂率和平均乳蛋白率）呈較低負(fù)相關(guān)。這是因?yàn)榭贵w陽(yáng)性率的檢出只能說(shuō)明副結(jié)核在牛群中存在，但處于哪個(gè)階段不能確定，不能代表牛群的現(xiàn)階段健康水平；由于每個(gè)牧場(chǎng)的飼養(yǎng)管理水平不同，測(cè)試牛存在胎次、品種等因素的差異，因此單純的通過(guò)每個(gè)牧場(chǎng)的生產(chǎn)性能比較并不能說(shuō)明副結(jié)核抗體陽(yáng)性率對(duì)牛場(chǎng)的影響。筆者接下來(lái)會(huì)選取2個(gè)有代表性的牛場(chǎng)進(jìn)行跟蹤調(diào)查，通過(guò)同一牛場(chǎng)的縱向比較，在剔除影響因素后，再確定副結(jié)核對(duì)生產(chǎn)性能的影響。

3.3 通過(guò)對(duì)同一牛場(chǎng)（8、9號(hào)牛場(chǎng)）同一批次牛只進(jìn)行同胎次的生產(chǎn)水平比較分析，研究結(jié)果表明無(wú)論是一胎次的牛只還是三胎次的牛只，副結(jié)核抗體陰性牛305d奶量和成年當(dāng)量均高于陽(yáng)性牛，說(shuō)明副結(jié)核病對(duì)奶牛的產(chǎn)奶量存在負(fù)面影響。通常情況下，產(chǎn)奶量和乳脂率、乳蛋白率等乳成分指標(biāo)是負(fù)相關(guān)關(guān)系，即產(chǎn)奶量高時(shí)乳成分相對(duì)降低，所以會(huì)出現(xiàn)9號(hào)牛場(chǎng)2013年牛只乳成分陰性牛低于于陽(yáng)性牛的情況。以上結(jié)論基于2019年DHI監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)分析得出，今后還需要長(zhǎng)時(shí)間的數(shù)據(jù)跟蹤進(jìn)行比較分析以期得到更翔實(shí)準(zhǔn)確的結(jié)論。

3.4 副結(jié)核實(shí)驗(yàn)室診斷方法目前主要有細(xì)菌培養(yǎng)、PCR檢測(cè)、ELISA檢測(cè)幾種方法，細(xì)菌培養(yǎng)方法準(zhǔn)確度高但是耗時(shí)長(zhǎng)，培養(yǎng)難度大，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求高；PCR檢測(cè)特異性好，但容易出現(xiàn)假陰性，檢測(cè)成本較高，也需要相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)條件；ELISA方法具有操作簡(jiǎn)單、敏感、快速等優(yōu)點(diǎn)，相對(duì)于細(xì)菌培養(yǎng)和PCR檢測(cè)更適于進(jìn)行大批量的樣品篩查，建議作為牛場(chǎng)副結(jié)核病的常規(guī)檢測(cè)方法。

3.5 副結(jié)核分枝桿菌對(duì)外界環(huán)境的抵抗力比較強(qiáng)，在被污染的牧場(chǎng)、廄肥中可存活數(shù)月至1年。直射陽(yáng)光下可存活10個(gè)月。但對(duì)濕熱的抵抗力比較弱，60℃30min、85℃15min即可將其殺滅。此外，3%～5%的苯酚溶液、5%的來(lái)蘇兒溶液、4%的福爾馬林溶液10min可將其滅活，10%～20%的漂白粉、5%的氫氧化鈉溶液2h也可以殺滅該菌。在飼養(yǎng)管理中檢測(cè)到有副結(jié)核病陽(yáng)性的牛群，對(duì)被污染的畜舍、運(yùn)動(dòng)場(chǎng)、欄桿等，可以根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)情況應(yīng)用以上幾種消毒劑采取噴霧、浸泡或沖洗的辦法進(jìn)行徹底的消毒殺菌。

4 結(jié)語(yǔ)

副結(jié)核病可造成奶牛體重下降、產(chǎn)乳量降低及其他多種疾病的發(fā)生，給奶牛養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。被副結(jié)核分枝桿菌污染的牛奶極易將病原傳染給犢牛與人類(lèi)，嚴(yán)重影響?zhàn)B殖業(yè)的健康發(fā)展，更嚴(yán)重地威脅著公共衛(wèi)生安全，需要引起足夠重視。由于目前沒(méi)有特效藥物及有效的疫苗能夠控制副結(jié)核病，所以針對(duì)感染的畜群及時(shí)檢出和淘汰陽(yáng)性牛是控制該病行之有效的辦法。應(yīng)堅(jiān)持對(duì)牛群定期進(jìn)行血清學(xué)診斷，對(duì)有臨床癥狀的病牛，立即淘汰處理。對(duì)血清學(xué)抗體陽(yáng)性但無(wú)臨床癥狀的牛應(yīng)隔離飼養(yǎng)，其所產(chǎn)的犢牛不飼喂該母牛的初乳。進(jìn)口?；蛲獾匾M(jìn)牛時(shí)，應(yīng)進(jìn)行副結(jié)核檢疫，凡是陽(yáng)性抗體牛一律不準(zhǔn)進(jìn)場(chǎng)，從根源上消滅副結(jié)核病的傳播。