肖家平 聶德云 唐智敏 胡仁琳

(武漢市第五醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，湖北 武漢 430050)

顱內(nèi)和顱外血管動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄是導(dǎo)致缺血性腦卒中最常見的原因之一〔1，2〕，調(diào)查研究結(jié)果顯示，顱外動(dòng)脈粥樣硬化性腦卒中的發(fā)生率約占缺血性腦卒中的45%，而新發(fā)腦卒中則多數(shù)與顱內(nèi)動(dòng)脈狹窄有關(guān)〔3〕。因此，研究顱內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄的危險(xiǎn)因素具有重要意義。通過對(duì)有危險(xiǎn)因素的患者進(jìn)行更深層次的檢查可以早期發(fā)現(xiàn)并進(jìn)行針對(duì)性的治療，防止顱內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化性腦卒中的發(fā)生。本研究通過檢測(cè)合并顱內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄的缺血性腦卒中患者血清中親環(huán)蛋白(CyP)A含量變化并分析其臨床意義，為臨床早期診斷提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1研究對(duì)象 收集2015年7月至2018年7月在武漢市第五醫(yī)院就診的腦卒中患者150例為研究對(duì)象，患者均經(jīng)詳細(xì)病史采集及顱彩色多普勒超聲 (TCD)等輔助檢查明確診斷。150例患者中男92例，年齡55～87歲；女58例，年齡58～91歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合缺血性腦卒中相關(guān)的診斷標(biāo)準(zhǔn); (2) 年齡>45歲; (3) 有完整的臨床資料; (4) 身體健康狀況允許接受CT血管造影檢查。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1) 合并急性冠狀動(dòng)脈綜合征; (2) 合并嚴(yán)重的心、肝和腎等臟器功能障礙; (3) 合并惡性腫瘤；(4)合并凝血功能障礙。選取與患者年齡和性別構(gòu)成相匹配的同期健康體檢者150例作為對(duì)照組，男90例，年齡50～85歲；女60例，年齡55～85歲。根據(jù)CT血管造影結(jié)果將腦卒中患者分為狹窄組102例和非狹窄組48例。其中狹窄組根據(jù)管腔狹窄程度分為三組：輕度狹窄(管腔狹窄面積≤25%)40例，中度狹窄(狹窄面積26%～50%)30例，重度狹窄(狹窄面積51%～75%)32例。

1.2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)CyPA含量 研究對(duì)象空腹采集靜脈血，1 h內(nèi)離心分離血清。離心速度為3 000 r/min，離心10 min。按照ELISA試劑盒說明書步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作：(1)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品(倍比稀釋法)；(2)孔板設(shè)置：分別設(shè)空白孔(空白孔不加任何樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步驟操作相同)和待測(cè)樣品孔；(3)完成加樣后將孔板置于37℃溫育1 h；④配洗液、洗滌5次，每次1 min；⑤加酶標(biāo)試劑，孔板置于37℃溫育1 h；⑥洗滌5次，每次1 min；⑦加試劑顯色，室溫靜置30 min；⑧加終止液終止；⑨測(cè)定：以空白孔調(diào)零，用酶標(biāo)儀在相應(yīng)波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中CyPA的含量。

1.3血脂指標(biāo)檢測(cè) 采用生化分析儀檢測(cè)患者總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行非配對(duì)t檢驗(yàn)、單因素方差分析、Student-Newman-Keuls檢驗(yàn)、直線相關(guān)檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1健康對(duì)照組和缺血性腦卒中患者血清中CyPA含量比較 健康對(duì)照組、非狹窄組和狹窄組血清中CyPA的含量分別為(9.92±3.56)ng/ml、(25.93±5.64)ng/ml和(153.67±31.56)ng/ml，三組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1 808，P<0.01)，組間兩兩比較差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

2.2合并輕度、中度和重度狹窄缺血性腦卒中患者血清中CyPA含量的比較 輕度、中度和重度狹窄患者血清中CyPA的含量分別為(129.86±22.50)ng/ml、(143.60±28.36)ng/ml和(175.37±23.83)ng/ml，三組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=30.77，P<0.01)。

2.3不同狹窄程度患者TC、TG、LDL-C和HDL-C比較 隨著狹窄程度的加深患者TC、TG、LDL-C水平逐漸升高，HDL-C水平逐漸下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。見表1。

表1 不同狹窄程度患者TC、TG、LDL和HDL比較

2.4血清CyPA含量與動(dòng)脈粥樣硬化危險(xiǎn)因素的關(guān)系分析 血清CyPA的含量與TC、TG和LDL-C含量呈正相關(guān)關(guān)系(P<0.001)，與HDL-C呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(P<0.001)，見圖1。

圖1 血清CyPA含量與動(dòng)脈粥樣硬化危險(xiǎn)因素的關(guān)系分析

3 討 論

腦卒中包括缺血性腦卒中和出血性腦卒中，其中缺血性腦卒中的發(fā)病率較高，占腦卒中總數(shù)的60%～70%〔4，5〕。文獻(xiàn)報(bào)道，頸動(dòng)脈粥樣硬化在缺血性腦卒中的發(fā)生發(fā)展中起到非常重要的作用，約半數(shù)以上的缺血性腦卒中患者伴隨不同程度的頸動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄，而頸動(dòng)脈粥樣硬化是導(dǎo)致顱內(nèi)動(dòng)脈狹窄的最主要原因之一〔6，7〕。早期顱內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄無明顯癥狀，隨著狹窄程度的增大，突發(fā)缺血性腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)大大增加，致殘致死率極高。因此，臨床上需要一種可以早期診斷缺血性腦卒中合并顱內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄的指標(biāo)。

CyP是一類高度保守和普遍存在的蛋白家族，具有肽脯氨酰順反異構(gòu)酶活性。人類CyP由16個(gè)結(jié)構(gòu)不同的家族成員組成，其中含量最豐富的是CyPA，占所有胞質(zhì)蛋白的0.1%～0.6%〔8，9〕。雖然CyPA存在于細(xì)胞內(nèi)，但也可由細(xì)胞分泌以應(yīng)對(duì)炎癥刺激，如缺氧、感染和氧化應(yīng)激等〔10〕。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，蛛網(wǎng)膜下腔出血、癲癇、外傷性腦損傷等病理?xiàng)l件均可增強(qiáng)大鼠腦組織CyPA的分泌〔11，12〕。文獻(xiàn)報(bào)道〔13～15〕，循環(huán)中的CyPA濃度對(duì)慢性阻塞性肺疾病、冠狀動(dòng)脈疾病、急性心肌梗死和充血性心力衰竭等疾病均有影響。Kao等〔16〕發(fā)現(xiàn)血清CyPA濃度與顱內(nèi)動(dòng)脈腫瘤嚴(yán)重程度和預(yù)后密切相關(guān)。因此，CyPA可能是反映急性腦損傷嚴(yán)重程度和評(píng)估預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物。本研究結(jié)果提示CyPA濃度可反映急性腦損傷；同時(shí)合并顱內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄患者血清中CyPA含量明顯高于非狹窄組，且其濃度隨著狹窄程度的增加而增加，提示血清CyPA含量與顱內(nèi)動(dòng)脈狹窄嚴(yán)重程度密切相關(guān)，可作為判斷狹窄程度的指標(biāo)。

高脂血癥是世界公認(rèn)的導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化和相關(guān)心腦血管疾病的主要原因。人類血脂主要由TC、TG、LDL-C、HDL-C，少量磷脂和游離脂肪酸構(gòu)成，是人體必需不可少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。但當(dāng)HDL-C以外的血脂含量過高可導(dǎo)致脂質(zhì)代謝紊亂引起動(dòng)脈粥樣硬化，粥樣斑塊可堵塞血管，引起心肌梗死、腦血栓、腦溢血和腦卒中等，嚴(yán)重危害人類生命。因此，高血脂是動(dòng)脈粥樣硬化的主要危險(xiǎn)因素〔17〕。本研究結(jié)果顯示：血清CyPA的含量與TC、TG和LDL-C含量呈正相關(guān)關(guān)系，而與HDL-C呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，提示血清CyPA含量與血脂含量具有良好的相關(guān)性，聯(lián)合檢測(cè)CyPA可能能夠提供診斷的準(zhǔn)確程度。

綜上所述，合并顱內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄的缺血性腦卒中患者血清中CyPA含量升高，且其含量與動(dòng)脈狹窄嚴(yán)重程度密切相關(guān)。檢測(cè)缺血性腦卒中患者血清CyPA含量有助于判斷患者是否合并顱內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄及其嚴(yán)重程度，血清CyPA或可作為臨床早期診斷指標(biāo)，尚需進(jìn)一步研究。