★ 謝月 梁奇* 馮育林 曹麗萍 張子龍 林曉燕（.深圳市寶安區(qū)中醫(yī)院 深圳 58000；.江西中醫(yī)藥大學 南昌 330006）

糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）是一種常見的內分泌代謝性疾病。其基本病理特點為胰島素分泌絕對或相對不足，或外周組織對胰島素不敏感，引起以糖代謝紊亂為主，包括脂肪、蛋白質代謝紊亂的一種全身性疾病［1]。中醫(yī)診斷本病為“消渴病”，稟賦不足、五臟虛弱、飲食不節(jié)、情志因素是發(fā)生消渴的重要因素?！翱省睘闅庋蛞杭不迹什〉牟∫蛟谟陉巶麣夂?，淤血內阻，燥熱偏勝，臟腑病變所致，臨床多見氣陰兩虛之癥，治療上多采用養(yǎng)陰清熱法［2-3]。

參芪益氣消渴丸為深圳市寶安區(qū)中醫(yī)院應用多年的臨床經(jīng)驗方，臨床療效確切，由黃芪、黨參、丹參、干益母草、荔枝核、干石斛、玉米須、山藥、酒女貞子、天花粉、麩炒蒼術、黃連、玄參、天花粉、醋五味子、法半夏15味藥材組成，具有益氣養(yǎng)陰、化痰活血通絡的功效。具有益氣養(yǎng)陰、清熱生津、活血化瘀的功效。臨床上用于醫(yī)治2型糖尿病屬于陰傷氣耗、熱結津虧、淤血阻滯之證，癥見：口渴多飲、小便頻繁數(shù)量多、多食易饑、體弱乏力等，舌質嫩紅，苔少薄白；對于其他內分泌代謝系統(tǒng)疾患見上述癥狀者亦有一定療效［4]。原湯劑內服，臨床療效好，但存在煎煮、攜帶、使用不方便，易酸敗變質的缺點，為更好的利用開發(fā)該處方，并結合預實驗結果和醫(yī)院生產(chǎn)實際，故將其研制成服用方便、療效穩(wěn)定的中藥濃縮丸劑。

1 儀器與試藥

Waters 2965高效液相色譜儀（美國Waters公司）；ELSD 2000蒸發(fā)光散射檢測器（美國Waters公司）；ZW-20S型中藥制丸機（廣州雷邁機械設備有限公司）；ZB-1E智能崩解儀（天津天大天發(fā)）；AB-104N 萬分之一電子天平（梅特勒公司）；超聲波清洗儀（SK7200LHC，上海科導超聲儀器有限公司）；30B 粉碎機（山東臨清新源制藥機械有限公司）；TST-E804-60A型電熱恒溫鼓風干燥箱（東莞市特斯特檢測儀器有限公司）；DZF-6050 型真空干燥箱（上海一恒科技有限公司）。

黃芪甲苷對照品（純度為96.9%，批號：110781-201717，中國食品藥品檢定研究院）；乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純；黃芪，黨參，干石斛，干益母草等15味藥，均購自深圳市宏盛昌藥業(yè)有限公司，經(jīng)深圳市寶安區(qū)中醫(yī)院藥學部梁奇主任中藥師鑒定均符合2015年版《中華人民共和國藥典》標準。

2 方法與結果

2.1 黃芪甲苷的含量測定取黃芪、黨參、干益母草、荔枝核、玉米須、酒女貞子、麩炒蒼術、玄參、黃連、醋五味子、法半夏11味藥加水煎煮，煎煮液濃縮至500mL，作為供試品貯備液，供黃芪甲苷含量測定和總固形物測定用。

2.1.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱：Cosmosil ODS柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：乙腈-水（32∶68）；流速：1.00mL/min，柱溫：30℃；漂移管溫度：102℃；氣流速：3.0mL/min，理論塔板數(shù)以黃芪甲苷計算不低于6000。色譜圖見圖1。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱定黃芪甲苷對照品粉末適量，加甲醇溶解稀釋，配成黃芪甲苷對照品濃度為0.53mg/mL的溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 精密量取濃縮液50mL，用水飽和的正丁醇溶液振搖提取4次每次50mL，合并正丁醇溶液，用氨試液反復洗滌2次，每次40mL，取正丁醇溶液蒸干，殘渣加甲醇溶解稀釋至5mL，搖勻，即得。

2.1.4 陰性對照品溶液的制備 按參芪益氣消渴丸水提處方稱取除黃芪外的陰性處方飲片，加8倍量水煎煮2次，每次1h，過濾，濃縮至200mL，即得陰性對照溶液。

2.1.5 線性關系考察 分別量取對照品溶液，分別進樣5、10、15、20、25μL，按“2.1.1”項下色譜條件測得峰面積。以進樣量（X）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標，得標準曲線的回歸方程為Y=111132.24X-185325.39，相關系數(shù)r=0.9999，結果表明黃芪甲苷在2.65～13.25μg范圍內線性關系良好。

2.2 固形物質量測定精密吸取各樣品濃縮液20mL，置干燥潔凈的蒸發(fā)皿中，照浸出物測定法（《中國藥典》2015版四部0831）測定，計算固形物質量，公式如下：

W為20mL濃縮液中干浸膏重量，V為定容體積。

2.3 正交試驗優(yōu)化水提工藝

2.3.1 試驗設計及結果［5-6]根據(jù)前期預實驗結果，分別確定加水量、提取時間、提取次數(shù)為因素，每個因素設3個水平，以黃芪甲苷含量和固形物質量為考察指標，選用L9（34）正交表，試驗安排及結果見表1～3。

表1 正交試驗因素水平表

表2 正交試驗結果

表3 方差分析

由直觀分析可見，影響提取效果的因素順序為：提取次數(shù)（C）＞提取時間（B）＞加水倍量（A）。方差分析結果表明，因素C（提取次數(shù)）、B（提取時間）對提取結果有顯著影響（P＜0.05），因素A（加水量）對結果無顯著影響，結合生產(chǎn)實際，綜合考慮生產(chǎn)成本，確定優(yōu)選工藝組合為A2B2C3，即煎煮三次，每次加10倍量水，每次1.5h。

2.3.2 驗證試驗 按處方比例，稱取3份藥材，按上述優(yōu)選的提取工藝條件進行提取，測定黃芪甲苷的含量和固形物質量，計算綜合評分值，結果見表4。

表4 驗證試驗結果

結果表明：驗證試驗結果與正交試驗優(yōu)選結果基本吻合，三次驗證試驗結果的綜合評分均值為95.15，說明正交試驗選出的工藝條件合理、穩(wěn)定可行。

2.4 制丸工藝研究采用綜合評分的方法［7-8]，以成型率、溶散時限、吸濕率三個指標來評價藥丸的成型工藝，丸劑吸濕率的加權系數(shù)為0.5，成型率和溶散時限的加權系數(shù)分別為0.25。綜合評分=（最小吸濕率值/吸濕率）×0.5×100%＋（成型率值/最大成型率值）×0.25×100%＋（最小溶散時限值/溶散時限值）×0.25×100%。將投料的軟材和成型后的丸粒分別稱重，計算成型率。取供試品6丸，按2015版《中華人民共和國藥典》（一部）附錄ⅫA崩解時限檢查法項下操作，記錄溶散時限。將盛有氯化鈉飽和溶液的玻璃干燥器放入25℃恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng)48 h，使其內部的相對濕度保持在75%。在恒重后的稱量瓶中放入研細的濃縮丸，使其均勻塘開，準確稱重后放入底部盛有氯化鈉過飽和溶液的玻璃干燥器內，并將稱量瓶蓋打開，放置48h后稱重，計算吸濕率［9]。

2.4.1 浸膏相對密度的確定 取水提液適量，60℃下減壓濃縮成相對密度為1.20的浸膏。分成5等份，留1份備用，其余4份分別在60℃下濃縮成相對密度為1.25、1.30、1.35、1.40的浸膏。稱取5份藥材細粉15g，藥粉細度為100目，60℃干燥8 h，混合均勻，加入不同相對密度的浸膏中，制軟材，制丸，考察不同的浸膏相對密度對綜合評分的影響。結果見表5。

表5 不同浸膏相對密度對綜合評分的影響

結果表明，相對密度為1.35時，其綜合評分較高，因此成型工藝的相對密度確定為1.35（60℃）。

2.4.2 藥粉用量與浸膏比例確定 取浸膏適量，將浸膏相對密度濃縮至1.35（60℃），稱定浸膏重量后平均分成5份，每份50g，藥粉粉碎至100目。考察不同的藥材細粉量與浸膏比對綜合評分的影響。結果見表6。

表6 藥粉用量與浸膏比例對綜合評分的影響

結果表明，藥粉量與浸膏比為2∶1時，其綜合評分較高，因此藥粉量與浸膏比確定為：2∶1。

2.4.3 藥粉細度的確定 取浸膏適量，將浸膏相對密度濃縮至1.35（60℃），稱重后平均分成5份，每份50g，浸膏與藥粉量的比固定為2∶1，考察不同的藥材細度比對綜合評分的影響。結果見表7。

表7 不同藥粉細度對綜合評分的影響

由試驗結果可知，藥粉細度與綜合評分成正比關系，當粉末目數(shù)越高，藥粉越細，丸劑成型率越好，丸劑圓整光滑，評分高，反之則表面粗糙、凹凸不平，粘合性差，易開裂，但粉末越細，粉碎時間長，成本增加，結合大批量生產(chǎn)的可操作性與節(jié)能性的考慮，將藥粉目數(shù)定為100目。

2.4.4 臨界相對濕度的確定［9-10]丸劑極易吸濕，吸濕會引起丸劑粘連、潮解、有效成分含量降低，為了保證丸劑的質量，本試驗測定吸濕率和其臨界相對濕度（critical relative humidity，CRH），以保證生產(chǎn)中環(huán)境適合本品包裝。配置不同飽和鹽溶液，分別置于玻璃干燥器中，恒溫25℃放置48h，使其內部平衡構成不同相對濕度（RH）的環(huán)境。取丸劑，研細，每份約2.0g放置在已干燥置恒重的稱量瓶中，使其均勻攤開，分別放入上述盛有不同過飽和溶液的干燥器內，打開稱量瓶蓋，在恒溫培養(yǎng)箱中25℃下放置48h，然后精密稱量并計算吸濕率，測定其CRH。以吸濕率為縱坐標，相對濕度為橫坐標作圖，結果見表8和圖2。

表8 不同鹽飽和溶液中的吸濕率

圖2 不同RH %中濃縮丸的吸濕率

對圖中兩條切線進行線性回歸，得到方程Y=0.1108X-1.4614，Y=0.3027X-13.6468，其交點處即為臨界相對濕度，為63.54%。因此在參芪益氣消渴丸生產(chǎn)、包裝時，其環(huán)境濕度應保持在63.54%以下。

2.5 中試放大試驗按每一個制劑單位處方量不少與10倍量進行3批中試放大試驗研究，結果見表9。參芪益氣消渴丸3批中試放大結果表明，干浸膏得率與小試結果接近，表明本品制備工藝可行。

表9 批中試結果

結果表明，三批中試濃縮丸平均得率為95.67%，且與小試結果接近，提示本制備工藝穩(wěn)定可行。

3 討論

參芪益氣消渴丸為復方制劑，組分多且復雜，不適合將全部藥材粉碎制丸；由于中藥材提取液中含糖量高，水提取得到的浸膏吸濕性強，也不適合將所有藥材提取濃縮成浸膏再粉碎成粉末制備丸劑，因此我們將其中一些藥材經(jīng)提取濃縮成浸膏，作為粘合劑，其余粉碎為細粉，運用塑制法將其研發(fā)制作成中藥濃縮丸，運用此工藝制備的中藥濃縮丸，既減少病人吞服劑量，又可以最大限度的保存藥材中的有效成分、便于攜帶保存和吞服，易于溶出與吸收，能顯著提高療效，此外相比湯劑、散劑，丸劑更方便攜帶且服用量減少；相比片劑、顆粒劑這些固體制劑，丸劑的制劑工藝更簡單，制作成本更低，從而降低了病人的治療成本。

根據(jù)評價指標對丸劑制備工藝影響大小來確定各指標的權重系數(shù)。吸濕率對丸劑的生產(chǎn)環(huán)境、包裝材料和貯存條件均有影響，故選為主要指標，綜合評分加權系數(shù)定為50%，成型率和溶散時限權重系數(shù)均定為25%。

本研究經(jīng)過對處方主治功效及中草藥有效成分的理化性質分析［11-13]，選用黃芪、黨參等11味藥提取，由于黃芪、玉米須、干石斛等藥材，纖維性比較強，難以粉碎成細粉；黨參含糖量高，吸濕性強，粉碎難度大，干益母草為全草，荔枝核、酒女貞子、醋五味子為種子果實類，油性較大，不適合粉碎；麩炒蒼術含揮發(fā)油類；玄參、黃連均含水溶性成分，適合水提取，因此選取該11種藥材進行水提取。山藥、天花粉，含淀粉量高；丹參、法半夏易于粉碎，故選取該4種藥材進行粉碎，出粉率高。

對水提取工藝及制劑成型工藝進行優(yōu)化，以黃芪甲苷含量和固形物質量為評價指標，采用L9（34）正交試驗設計優(yōu)化黃芪等藥味的水提取工藝，優(yōu)選最佳提取工藝為：加10倍量水提取3次，每次提取時間為1.5h。以成型率、溶散時限、吸濕率為評價指標，采用單因素優(yōu)化制劑成型工藝，最終確定浸膏相對密度濃縮至1.35（60℃），浸膏與藥粉量的比固定為2∶1，藥粉細度目數(shù)為100目，改工藝所得丸劑表面完整光滑、色澤均勻、且有效成分能被人體吸收更完全。