代欣桃 ，李文銳 ，聞焜 ，楊志斌 , *

1. 云南省昆蟲生物醫(yī)藥研發(fā)重點實驗室（大理 671000）；2. 大理州食品藥品檢驗所（大理 671000）；3. 中國西南藥用昆蟲及蛛形類資源開發(fā)利用協(xié)同創(chuàng)新中心（大理 671000）；4. 藥用特種昆蟲開發(fā)國家地方聯(lián)合工程研究中心（大理 671000）

喙尾琵琶甲（Blaps rynchopetera Fairmaire）屬鞘翅目（Coleoptera）擬步甲科（Tenebrionidae）琵琶甲屬（Blaps Fab），別名臭殼子、小黑蟲、臭屁蟲、臭蟲等，是云南民間長期使用的一種藥用昆蟲，可食用，主要用于牙周疾病、發(fā)燒、積食、皮膚瘙癢、風(fēng)濕等，也常被用于治療腫瘤、咳嗽、胃炎等疑難雜癥[1]。對該昆蟲的研究報道主要集中在自然分布、化學(xué)成分和藥理作用等方面[2-5]，鮮有對其營養(yǎng)成分及價值的報道。試驗對喙尾琵琶甲的營養(yǎng)成分進(jìn)行分析和評價，為這一傳統(tǒng)藥用昆蟲的進(jìn)一步開發(fā)和應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 藥材

蟲種由大理大學(xué)昆蟲生物醫(yī)藥研究院提供，經(jīng)楊自忠教授鑒定為喙尾琵琶甲（Blaps rynchopetera Fairmaire），樣品現(xiàn)存于大理大學(xué)昆蟲生物醫(yī)藥研究院。

1.2 試劑

17種氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：蘇氨酸（Thr）、天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、絲氨酸（Ser）、纈氨酸（Val）、甘氨酸（Gly）、胱氨酸（Cys）、丙氨酸（Ala）、異亮氨酸（Ile）、蛋氨酸（Met）、酪氨酸（Tyr）、亮氨酸（Leu）、組氨酸（His）、苯丙氨酸（Phe）、精氨酸（Arg）、賴氨酸（Lys）、脯氨酸（Pro）（批號09070113，德國塞卡姆公司）；牛血清白蛋白（批號140619-201723，中國食品藥品檢定研究院）；葡萄糖（批號891921，上海化學(xué)試劑公司）；石油醚（30～60 ℃）、苯酚、硫酸、福林酚試液、茚三酮等（國產(chǎn)分析純）；超純水。

1.3 儀器與設(shè)備

全自動氨基酸分析儀（S-433D，德國賽卡姆公司）；紫外-可見分光光度計（UV-2550，日本島津公司）；電子天平（MS 205 DU，上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；全觸控恒溫干燥箱（SWOF-W155，大韓科學(xué)有限公司中國分公司）；酸度計（STARTER 3100，奧豪斯上海儀器有限公司）。

1.4 方法

1.4.1 水分

參照2015版中國藥典四部通則0832項下烘干法[6]測定。

1.4.2 總灰分

參照2015版中國藥典四部通則2302項下方法[6]測定。

1.4.3 粗脂肪

參照索氏提取法[7]進(jìn)行提取和測定。

1.4.4 粗多糖測定[8]

1.4.4.1 供試品溶液制備

準(zhǔn)確稱取2.0 g樣品粉末，加入20 mL石油醚，重復(fù)超聲提取離心3次，棄去上清液，干燥后加入10 mL水，回流提取1 h，離心，棄去上清液，重復(fù)提取2次，濾液合并后于50 ℃下減壓濃縮至5 mL，加入20 mL乙醇沉淀，4 ℃過夜，沉淀用無水乙醇脫水，低溫干燥。1.4.4.2 對照品溶液制備

準(zhǔn)確稱取10.0 mg干燥至恒質(zhì)量的葡萄糖對照品于一只10 mL容量瓶中，加適量水使溶解并稀釋至刻度。搖勻，精密量取2.5 mL置于另一只50 mL容量量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。

1.4.4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密吸取適量對照品溶液，用水依次稀釋，配制成質(zhì)量濃度分別為0.010，0.015，0.020，0.030，0.040和0.050 mg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入1.0 mL 5%苯酚溶液和5.0 mL硫酸，水浴加熱20 min，放至室溫，于490 nm波長處測定吸光度。橫坐標(biāo)X為對照品溶液濃度，縱坐標(biāo)Y為其對應(yīng)的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=13.431X+0.005 8，r=0.999 6。結(jié)果表明，葡萄糖含量在0.01～0.05 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.4.4.4 多糖含量測定

精密稱取15.0 mg所得粗多糖于50 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度。精密吸取2.0 mL，按1.4.4.4的方法測定，并按式（1）計算粗多糖含量。

式中：C為樣品中粗多糖濃度，mg/mL；V為樣品體積，mL；D為樣品中粗多糖占總粗多糖比例；m為樣品粉末質(zhì)量。g；ms為水分，g。

1.4.5 蛋白含量測定[8]

1.4.5.1 供試品溶液制備

準(zhǔn)確稱取1.0 g藥材粉末，加入15 mL 0.5%氫氧化鈉溶液，50 ℃浸提1 h，取上清液，用1 mol/L HCl調(diào)節(jié)pH至4.5，可見明顯的沉淀析出，離心，取沉淀，低溫干燥后用20%醋酸溶解，再用葡聚糖凝膠G-25色譜法去鹽，凍干后用適量水溶解（調(diào)節(jié)pH 8～9）并定容至50 mL量瓶中，搖勻，備用[7]。

1.4.5.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

參照2015版中國藥典四部通則0731項下福林酚法的方法1[6]測定。橫坐標(biāo)X為對照品溶液濃度，縱坐標(biāo)Y為其對應(yīng)的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=2.933 8X-0.003 6，r=0.999 6。結(jié)果表明，牛血清白蛋白含量在0.02～0.20 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.4.5.3 含量測定

按1.4.5.2的方法測定，并按式（2）計算蛋白含量。

式中：C為樣品中蛋白濃度，mg/mL；V為樣品體積，mL；D為樣品中粗鹽蛋白占總粗鹽蛋白比例；m為樣品粉末質(zhì)量，g；ms為水分，g。

1.4.6 氨基酸含量測定

精密稱取1.0 g藥材粉末，置水解管中，加入20 mL 6 mol/L的鹽酸，充氮?dú)饷芊?，?10 ℃干燥箱中水解24 h。取出后放至室溫，打開封口，將水解液過濾至蒸發(fā)皿中，用水少量多次沖洗水解管，洗滌液并入蒸發(fā)皿中，蒸干，殘渣加適量超純水溶解并稀釋至25 mL，搖勻，精密量取1 mL，用0.12 mol/L檸檬酸鈉（pH 2.20）定容至10 mL，作為供試品溶液，使用全自動氨基酸分析儀測定樣品中氨基酸含量。

1.4.7 氨基酸營養(yǎng)價值評價

根據(jù)氨基酸比值系數(shù)法[9]，將樣品中氨基酸組成與1973年世界衛(wèi)生組織（WHO）和聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）提出的必需氨基酸評分模式[10]為標(biāo)準(zhǔn)，全面評價其營養(yǎng)價值。計算氨基酸比值（RAA）、氨基酸比值系數(shù)（RC）和氨基酸比值系數(shù)分（SRC）。計算公式如式（3）～（5）所示。

式中：CV為RC的變異系數(shù)，CV=標(biāo)準(zhǔn)差/均數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 常規(guī)營養(yǎng)成分分析

由表1可知，喙尾琵琶甲中水分和總灰分的含量分別為6.04%和3.58%，符合云南省食品藥品監(jiān)督管理局云食藥監(jiān)注[2011]21號文件關(guān)于頒布琵琶甲等3個藥材及飲片標(biāo)準(zhǔn)的通知規(guī)定，水分不得過10.0%，總灰分不得過4.0%；脂肪含量10.51%，遠(yuǎn)低于豬肉（69.54%）和羊肉（42.59%）等動物性食品，蛋白含量10.12%，與牛肉（15.40%）接近[11]。說明喙尾琵琶甲具有高蛋白和低脂肪的特點。

表1 喙尾琵琶甲中水分、粗多糖、粗脂肪、總灰分、蛋白質(zhì)測定結(jié)果（n=3，x±s）

2.2 氨基酸組成分析

由表2～表4可知，喙尾琵琶甲所含氨基酸種類齊全，含有16種氨基酸，包含人體必需的7種氨基酸。除蛋氨酸+胱氨酸低于FAO/WHO模式譜，為第一限制氨基酸，其余各種必需氨基酸含量均與模式譜標(biāo)準(zhǔn)接近。另外，喙尾琵琶甲的氨基酸組成E/T為0.33，E/N為0.49，這與FAO/WHO提出的E/T應(yīng)為0.4左右，E/N應(yīng)為0.6左右的參考蛋白質(zhì)模式接近[12]。

表2 喙尾琵琶甲中氨基酸組成與質(zhì)量分?jǐn)?shù)

表3 喙尾琵琶甲中必需氨基酸占總氨基酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)

表4 喙尾琵琶甲的RAA、RC及SRC分析結(jié)果

3 結(jié)論

喙尾琵琶甲被廣泛應(yīng)用于民間，在云南民間用其治療肝癌、胃癌、直腸癌、膀胱癌、子宮頸癌、乳腺癌和食道癌等[13]。80%以上的彝族驗方中均有關(guān)于喙尾琵琶甲的記載，用于治療腫瘤、心血管及類風(fēng)濕等[14]。試驗結(jié)果表明，喙尾琵琶甲中粗多糖、蛋白質(zhì)和粗脂肪含量豐富，尤其是人體必需氨基酸含量較高，具有一定營養(yǎng)價值，是一種極具開發(fā)利用潛力的藥食兩用昆蟲資源，具有廣闊發(fā)展前景。