伍 偉, 黃河頌, 俞 橋, 丁曉娟, 楊文超, 張夢(mèng)云, 劉 琳, 肖靜靜, 張 勇

(中國(guó)人民解放軍中部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科， 湖北 武漢 430070)

新型冠狀病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID-19)是由新型冠狀病毒感染而導(dǎo)致的急性呼吸道傳染病，該病自2019年12月于武漢爆發(fā)，并擴(kuò)散至全國(guó)[1]。由于發(fā)病機(jī)制尚不明確，且無(wú)特效藥物治療，該疫情給我國(guó)群眾生命、健康造成重大威脅和損失。我們?cè)谂R床工作中發(fā)現(xiàn)，患者T淋巴細(xì)胞亞群變化較大，因此研究T淋巴亞群，及時(shí)發(fā)現(xiàn)病情變化，早期指導(dǎo)臨床有一定意義。

1 資料與方法

1.1一般資料:收集2020年1月17日至2020年2月20我科住院、資料齊全的新型冠狀病毒肺炎患者88例設(shè)為觀察組。其中女18例、男70例，年齡20～91歲，平均年齡49.500(33.000,65.250)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合2020年《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)》關(guān)于新型冠狀病毒肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]。排除標(biāo)準(zhǔn)：①排除上呼吸道感染、流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病、支原體衣原體、柯薩奇病毒、巨細(xì)胞病毒感染；②排除血管炎、皮肌炎和激化性肺炎等。臨床分型[1]：普通型：具有發(fā)熱、呼吸道等癥狀，影像學(xué)可見(jiàn)肺炎表現(xiàn)。重型：符合下列任何一條：①出現(xiàn)氣促，RR≥30次/min；②靜息狀態(tài)下，指氧飽和度≤93%；③動(dòng)脈血氧分壓/吸氧濃度≤300mmHg；肺部影像學(xué)顯示24～48h內(nèi)病灶明顯進(jìn)展大于50%者按重型管理。危重型：符合一下情況之一者：①出現(xiàn)呼吸衰竭，且需要機(jī)械通氣；②出現(xiàn)休克；③合并其它器官功能衰竭需ICU監(jiān)護(hù)治療。同時(shí)選取健康體檢人群30例為對(duì)照組，其中男性20例，女性10例，年齡24～75歲，平均年齡51.233±15.401歲。觀察組、對(duì)照組兩組在性別、年齡方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2研究方法：利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群,分析CD4+絕對(duì)數(shù)、CD4+百分比、CD8+絕對(duì)數(shù)、CD8+百分比、CD4+/CD8+比值。檢驗(yàn)指標(biāo)由中部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室完成。

2 結(jié) 果

2.1觀察組、對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群比較:觀察組外周血CD4+、CD8+絕對(duì)數(shù)較對(duì)照組明顯降低，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),但CD4+百分比、CD8+百分比以及CD4+/CD8+比值兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)表1。

表1 兩組T淋巴細(xì)胞亞群比較

2.2觀察組不同疾病組CD4+和CD8+情況：88例患者67例(76.13%)CD4+T絕對(duì)數(shù)降低，最低值52個(gè)/μL；65例(73.86%)CD8+T絕對(duì)數(shù)降低，最低值54個(gè)/μL。普通型、重型、危重型三組CD4+、CD8+T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)方面比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)表2。

表2 入院時(shí)不同組別T淋巴細(xì)胞亞群比較

*普通型分別與重型、危重型比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.01或0.05，重型與危重型比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P>0.05

2.3T淋巴細(xì)胞亞群與疾病程度相關(guān)性分析:CD4+、CD8+T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)與疾病輕重程度呈負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(rs分別為-0.328、-0.394，P<0.01)。

2.4CD4+、CD8+T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)水平預(yù)測(cè)疾病是否加重的ROC曲線分析：結(jié)果表明CD4+、CD8+絕對(duì)數(shù)預(yù)測(cè)疾病加重的曲線下面積(AUC)分別為0.688、0.716，95% CI分別為(0.577～0.799，0.610～0.823)，最佳臨界值分別為362個(gè)/μL、222個(gè)/μL。(見(jiàn)表3、圖1)

表3 CD4+ CD8+曲線下的面積及最佳臨界值

圖1 CD4+、CD8+T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)水平預(yù)測(cè)疾病是否加重的ROC曲線

3 討 論

COVID-19是由新型冠狀病毒感染而導(dǎo)致的急性呼吸道傳染病，新型冠狀病毒屬于β屬冠狀病毒，其基因特征與SARS-COV和MERS-COV有明顯區(qū)別，目前對(duì)其發(fā)病機(jī)制尚未明確[1]。已有研究表明COVID-19患者具有嚴(yán)重免疫異常和細(xì)胞因子釋放綜合征的風(fēng)險(xiǎn)[2]，外周血CD4+和CD8+ T細(xì)胞數(shù)量顯著減少，CD4+ T細(xì)胞中高促炎性CCR6+Th17的濃度增加,CD8+ T細(xì)胞含有高濃度的細(xì)胞毒顆粒,說(shuō)明T細(xì)胞過(guò)度活化，部分原因是嚴(yán)重的免疫損傷[3]。同時(shí)DIAO[4]研究發(fā)現(xiàn)，COVID-19患者的總T細(xì)胞、CD4+、CD8+T細(xì)胞明顯減少，T細(xì)胞數(shù)與血清IL-6、IL-10和TNF-α濃度呈負(fù)相關(guān)，隨著患者從前驅(qū)期到明顯癥狀期，T細(xì)胞PD-1和Tim-3表達(dá)增加，進(jìn)一步提示T細(xì)胞衰竭。而恢復(fù)期患者IL-6、IL-10和TNF-α濃度降低，T細(xì)胞數(shù)恢復(fù)。在癥狀恢復(fù)前，血液中檢測(cè)到抗體分泌細(xì)胞、濾泡輔助性T細(xì)胞、活化的CD4+和CD8+T細(xì)胞以及IgM/IgG SARS-CoV-2結(jié)合抗體。這些免疫變化在癥狀完全緩解后至少持續(xù)7d，表明COVID-19中存在大量抗病毒免疫[5]。

本研究發(fā)現(xiàn)新型冠狀病毒肺炎患者CD4+、CD8+T絕對(duì)數(shù)較健康對(duì)照組明顯降低，表明患者免疫系統(tǒng)受到損害。同時(shí)普通型、重型、危重型患者間CD4+、CD8+T絕對(duì)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，CD4+、CD8+絕對(duì)數(shù)越低表明病情越重，且T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)與病情呈負(fù)相關(guān)，與上述文獻(xiàn)報(bào)道一致。同時(shí)通過(guò)ROC分析表明CD4+、CD8+絕對(duì)數(shù)可用于評(píng)估疾病輕重程度，CD4+、CD8+絕對(duì)數(shù)分別以362個(gè)/μL、222個(gè)/μL為臨界值，低于臨界值提示疾病可能出現(xiàn)加重的風(fēng)險(xiǎn)。說(shuō)明免疫調(diào)節(jié)在病情的發(fā)展過(guò)程重起到非常重要作用[6]。然而COVID-2019造成CD4+T、CD8+T下降的確切機(jī)制仍不明確。隨著世界范圍內(nèi)COVID-19的流行，新的遺傳學(xué)和臨床證據(jù)表明COVID-19與SARS、MERS有著相似的途徑。目前研究表明，Th1型反應(yīng)是成功控制SARS-CoV和MERS-CoV的關(guān)鍵，對(duì)COVID-2019也可能是如此[7]。文獻(xiàn)報(bào)道SARS-CoV感染可導(dǎo)致CD4和CD8下降[8],COVID-19是否和SARS-CoV感染導(dǎo)致CD4和CD8下降機(jī)制相似，如與CD25、CD28和CD69的表達(dá)、適應(yīng)性免疫反應(yīng)的延遲發(fā)展、抗原遞呈細(xì)胞(APC)功能的改變和DC遷移的受損、活躍的I型干擾素反應(yīng)，以及正常應(yīng)激反應(yīng)引起的高水平糖皮質(zhì)激素等相關(guān)，還需進(jìn)一步研究分析。

綜上所述，COVID-2019外周血CD4+和CD8+ T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)減少提示免疫功能受損，可能有助于預(yù)測(cè)疾病的發(fā)展和預(yù)后，以及指導(dǎo)臨床的治療。