張藝馨

【摘要】LAMP技術(shù)（環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)）是一種新型的體外等溫擴(kuò)增特異核算片段技術(shù)，該技術(shù)具有靈敏度高，擴(kuò)增效率腔以及特異性強(qiáng)等優(yōu)勢。本文簡單介紹LAMP技術(shù)，并探討LAMP技術(shù)及其在食品安全檢測中的應(yīng)用

【關(guān)鍵詞】LAMP技術(shù);食品安全;檢測

LAMP技術(shù)（環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)是由日本研究人員在2000年發(fā)明的一種新型的體外等溫擴(kuò)增特異核算片段技術(shù)。該技術(shù)通過對特殊引物與有鏈置換活性的Bst（芽孢桿菌嗜熱脂肪酸）DNA聚合酶，使反應(yīng)在模板兩端的引物結(jié)合處循環(huán)出現(xiàn)環(huán)狀單鏈接結(jié)構(gòu)，從而在等溫條件下促進(jìn)引物與模板的順利結(jié)合以及鏈置換擴(kuò)增反應(yīng)的形成。相關(guān)資料顯示，LAMP會在60分鐘內(nèi)擴(kuò)增出109至1010倍的靶序列復(fù)制，從而使DNA濃度高達(dá)500txg/mL。LAMP技術(shù)中的擴(kuò)增產(chǎn)物可以通過常規(guī)的熒光定屠以及電泳檢測。在對食品安全進(jìn)行檢測時應(yīng)用LAMP技術(shù)，可明顯提高檢測質(zhì)量，且時間短，靈敏度高，目前在食品安全檢測領(lǐng)域中應(yīng)用十分廣泛。

一、簡述LAMP技術(shù)的原理及特點(diǎn)

（一）LAMP技術(shù)的原理

LAMP技術(shù)的核心是針對靶基因的六個區(qū)域中的四條特殊引物進(jìn)行相關(guān)設(shè)計，并對具有鏈置換活性的BstDNA聚合酶進(jìn)行反應(yīng)。在LAMP技術(shù)的反應(yīng)過程中，會對靶基因的6個不同區(qū)域進(jìn)行設(shè)計，例如設(shè)計1號對應(yīng)外引物F3與D3，1對內(nèi)引物FIP以及BIP，并加入具有置換鏈作用的DNA聚合酶。在溫度保持在60到65攝氏度時，對DNA片段特異性基因序列上的6個單獨(dú)區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)過程中會產(chǎn)后白色的焦磷酸鎂沉淀物。

（二）LAMP技術(shù)的特點(diǎn)

LAMP技術(shù)具有特晃性強(qiáng)，檢測速度較快，且檢測靈敏度較高，并且檢測過程中可以清晰的觀察檢測過程，可脫離儀器進(jìn)行現(xiàn)場檢測等特點(diǎn)。

二、LAMP技術(shù)在食品安全檢測中的應(yīng)用

LAMP技術(shù)可以從食品中的致病微生物以及轉(zhuǎn)基因食品安全性等方面進(jìn)行食品安全監(jiān)測。

（一）LAMP技術(shù)在致病微生物中的檢測應(yīng)用。

病原微生物室食品安全中造成食品生物污染的主要原因。常規(guī)的檢驗方式通過對病原微生物進(jìn)行分離培養(yǎng)或者生活試驗進(jìn)行檢測，但是會耗費(fèi)大量的人力物力，且時間較長，而且類似于大腸桿菌等細(xì)菌在機(jī)體營養(yǎng)匱乏的環(huán)境下會進(jìn)入休眠狀態(tài)，而進(jìn)入適宜的環(huán)境后會馬上復(fù)蘇，就導(dǎo)致常規(guī)檢測中相關(guān)性質(zhì)的細(xì)菌會產(chǎn)生漏檢。應(yīng)用LAMP技術(shù)可以避免該現(xiàn)象的發(fā)生。LAMP技術(shù)可以對大腸桿菌，沙門氏菌等多種食品中的常見細(xì)菌進(jìn)行檢測。（1）大腸桿菌的檢測。大腸桿菌是食品安全問題中的常見細(xì)菌，會引起人體出現(xiàn)嚴(yán)重腹瀉與敗血癥。大腸桿菌是一種普通的原核生物，是人類以及動物腸道內(nèi)的常見菌群。但是致病性大腸桿菌以及血性大腸桿菌會引起人體出血性腸炎以及腹瀉。在應(yīng)用LAMP技術(shù)對致病性大腸桿菌以及血性大腸桿菌進(jìn)行檢測時，發(fā)現(xiàn)建立的LAMP反應(yīng)體系只擴(kuò)增大腸桿菌基因，特異性較好，結(jié)果顯示，該體系的最佳反應(yīng)溫度為63℃，最佳反應(yīng)時間為1小時，檢測濃度為0.0001pg，檢測結(jié)果較精細(xì)。（2）沙門氏菌的檢測。在沙門氏菌的檢測過程中，對沙門氏菌的純培養(yǎng)物進(jìn)行檢測，測定其靈敏度，并按照靈敏度對相關(guān)待檢測食品進(jìn)行檢測對比，該檢測方式的特異性較強(qiáng)，且用時較短。

（二）LAMP技術(shù)在轉(zhuǎn)基因食品安全性中的檢測應(yīng)用。

隨著轉(zhuǎn)基因食品在人民生活中的增多，轉(zhuǎn)基因食品安全問題已經(jīng)成為食品安全質(zhì)量檢測中的關(guān)注重點(diǎn)。相關(guān)資料顯示，目前大部分國家對轉(zhuǎn)基因食品都會進(jìn)行比較嚴(yán)格的管理，在轉(zhuǎn)基因食品包裝袋上會有明顯的轉(zhuǎn)基因食品標(biāo)志。因此轉(zhuǎn)基因食品的安全檢測，對人們的食品安全以及國家的食品出口都存在重要意義。

在轉(zhuǎn)基因食品安全檢測中應(yīng)用LAMP技術(shù)，主要是通過檢測食品中轉(zhuǎn)入的外援啟動字盡心相關(guān)判斷。大部分轉(zhuǎn)基因食品中都含有花椰菜花葉病毒355啟動子，應(yīng)用LAMP檢測法，將花椰菜花葉病毒啟動子作為研究對象進(jìn)行檢測，檢查出轉(zhuǎn)基因大豆中的轉(zhuǎn)基因成分，然后將轉(zhuǎn)基因大豆與非轉(zhuǎn)基因大豆進(jìn)行一定比例的混合后，分析比較LAMP技術(shù)檢測大豆中的轉(zhuǎn)基因分子的成功率。相關(guān)研究結(jié)果表示，LAMP技術(shù)可以成功檢測出混合大豆中的轉(zhuǎn)基因成分，檢測結(jié)果顯示成功?？筛鶕?jù)檢測結(jié)果建立轉(zhuǎn)基因大豆及相關(guān)豆制品的LAMP技術(shù)檢測方式。

（三）LAMP技術(shù)在食品過敏性殘留物檢測中的應(yīng)用。

在食品安全檢測中，過敏性殘留物的檢測也至關(guān)重要。食品中常見的過敏性食品有雞蛋，牛奶，花生等，此類食品的主要過敏性物質(zhì)主要為蛋白質(zhì)。在食品安全檢測中應(yīng)用LAMP技術(shù)進(jìn)行檢測，可以將食物中蛋白質(zhì)分子作為研究對象進(jìn)行檢測，根據(jù)檢測結(jié)果建立對蛋白質(zhì)等過敏性殘留物的LAMP技術(shù)檢測方式。LAMP技術(shù)檢測在食品過敏性殘留物的檢測中，結(jié)果較準(zhǔn)確，操作簡潔。

三、LAMP技術(shù)在食品安全檢測中的優(yōu)勢，問題以及解決方法

（一）LAMP技術(shù)在食品安全檢測中的優(yōu)勢

在食品安全檢測中應(yīng)用LAMP技術(shù)，較傳統(tǒng)檢測方式時間明顯縮短，且操作簡單，檢測時間一般在1到2小時內(nèi)完成，且具有更高的靈敏度檢測結(jié)果準(zhǔn)確度高，檢測成本較低，并且LAMP技術(shù)的檢測過程中不需要應(yīng)用相關(guān)儀器設(shè)備，使用配套的試劑盒與水浴鍋即可完成檢驗，特別適合野外，山區(qū)等偏遠(yuǎn)地方進(jìn)行食品安全檢測。

（二）LAMP技術(shù)在食品安全檢測中存在的問題

1.LAMP技術(shù)在食品安全檢測的過程中，對溫度的要求較高。2.LAMP技術(shù)在檢測過程中，需要選擇待檢測的分子標(biāo)本才能制做LAMP技術(shù)檢測，如果檢測標(biāo)本不準(zhǔn)確容易導(dǎo)致結(jié)果失效。

（三）酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)中相關(guān)問題的解決方式

1.在食品安全檢測中應(yīng)用LAMP技術(shù)時，盡量將室內(nèi)溫度調(diào)高，保證LAMP技術(shù)的靈敏度。2.可在檢測過程中改善抗標(biāo)本的制作方式，根據(jù)待檢測食品的特性，應(yīng)用相關(guān)知識建立不同結(jié)構(gòu)的評價模式，提高標(biāo)本的親和性。在對多個結(jié)構(gòu)類似食品進(jìn)行檢測時，將標(biāo)本針對同種分子進(jìn)行檢測，可以避免工作的重復(fù)性，減少檢測過程中的交叉反應(yīng)。

綜上所述，LAMP技術(shù)是一種簡便，準(zhǔn)確，價格低廉且用時較短的基因擴(kuò)增技術(shù)。目前在食品安全檢測中應(yīng)用廣泛。隨著相關(guān)技術(shù)的不斷進(jìn)步與發(fā)展，LAMP檢測技術(shù)在更多領(lǐng)域得到了更全面的應(yīng)用。在食品安全檢測中應(yīng)用LAMP技術(shù)，可明顯提高食品安全的檢測靈敏度，檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確，且檢測用時明顯縮短，LAMP技術(shù)的操作方式簡單明了，檢測成本相對低廉，可在技術(shù)水平發(fā)展價較差的山區(qū)等偏遠(yuǎn)地區(qū)應(yīng)用，并且檢測過程中不會對環(huán)境造成污染，可在食品安全檢測中推廣應(yīng)用。