韋 鈺 蒙文娟 曾慶倫 劉佳佳 謝艷林 王 敏 蔣才淼 覃超林

廣西融水苗族自治縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣西融水 545300

禽流感是由A 型流感病毒感染引起的一種人畜共患病，其病毒變異快、傳播快、范圍廣，已成為危害禽類與人類健康的重大動(dòng)物疫病，臨床上分為高致病性禽流感、低致病性禽流感和無致病性禽流感，其中高致病性禽流感造成的危害最為嚴(yán)重。禽流感一年四季都可發(fā)生，禽流感病毒也一直威脅家禽養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的安全，一旦暴發(fā)將會(huì)給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，危害十分嚴(yán)重。禽流感毒株不斷變異，當(dāng)今危害世界各地的家禽禽流感主要由高致病性的H5 和H7 2 種亞型引起，做好疫苗免疫接種工作是防控禽流感的重要舉措、也是主要手段。為了有效防控禽流感疫情的發(fā)生，2017年我國農(nóng)業(yè)部推廣使用重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗。融水香鴨是中國國家地理標(biāo)志產(chǎn)品，肉鴨養(yǎng)殖周期為90～120日齡，周期較長，而禽流感往往一次免疫后免疫應(yīng)答水平普遍偏低、免疫效果不理想。為了解這個(gè)新疫苗免疫效果情況，本文進(jìn)行疫苗二次免疫后免疫抗體水平效果評(píng)估試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)對(duì)象

選擇在廣西融水縣融水鎮(zhèn)存欄量分別為5 300、6 800、8 900、5 000 羽的4 個(gè)融水香鴨肉鴨養(yǎng)殖場(chǎng)，對(duì)應(yīng)為試驗(yàn)A、B、C、D 場(chǎng)，均采用半放養(yǎng)+半圈養(yǎng)模式飼養(yǎng)。

1.2 試驗(yàn)疫苗

重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗（H5N1 Re-8 株+H7N9 H7-Re1 株）為青島某生物工程有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為171514501，有效日期為20180813，有效期1年。

1.3 檢測(cè)試劑

哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的禽流感H5 亞型血凝標(biāo)準(zhǔn)抗原（Re-8 株）、批號(hào)2018007，禽流感H7 亞型血凝標(biāo)準(zhǔn)抗原（Re-1 株）、批號(hào)2018008，陽性血清H5、批號(hào)2018003，陽性血清H7、批號(hào)2018002。

1.4 試驗(yàn)方法與劑量

試驗(yàn)A、B、C、D 場(chǎng)分別于14、29日齡全場(chǎng)進(jìn)行2 次重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗頸部皮下注射免疫接種、使用劑量分別為0.5、1.0 mL，并做好免疫接種后7 d 內(nèi)免疫副反應(yīng)的記錄。

1.5 樣品采集

為更好地評(píng)估免疫效果，試驗(yàn)A、B、C、D 每個(gè)場(chǎng)在45日齡（二次免疫后間隔21 d）、94日齡（二次免疫后間隔70 d）各采集60 份血樣，再按照隨機(jī)抽樣原則，對(duì)試驗(yàn)A 場(chǎng)在59日齡（二次免疫后間隔35 d）、試驗(yàn)B 場(chǎng)73日齡（二次免疫后間隔49 d）、試驗(yàn)C 場(chǎng)87日齡（二次免疫后間隔63 d）、試驗(yàn)D場(chǎng)80日齡（二次免疫后間隔56 d）各采集60 份血樣，并將采集到的血樣進(jìn)行血清分離待檢。

1.6 抗體檢測(cè)和結(jié)果判定

依據(jù)GB/T 18936-2003 高致病性禽流感診斷技術(shù)中血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗(yàn)，分別對(duì)采集的血清進(jìn)行禽流感病毒H5、H7 亞型免疫抗體檢測(cè)。以完全抑制4 個(gè)單位HAU 抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI 滴度；只有陰性對(duì)照孔血清滴度不大于2log2，陽性對(duì)照孔血清誤差不超過1 個(gè)滴度，試驗(yàn)結(jié)果才有效；禽流感抗體血凝抑制試驗(yàn)（HI）抗體效價(jià)≥24（即4 log2）判定為合格，存欄禽群體免疫抗體合格率≥70%判定為合格。

2 結(jié)果與分析

2.1 免疫副反應(yīng)觀察

通過觀察（表1），在首次免疫接種后有2 個(gè)融水香鴨養(yǎng)殖場(chǎng)出現(xiàn)了不同程度的副反應(yīng)情況，主要表現(xiàn)為精神狀態(tài)變差，采食量有一定下降，有個(gè)別鴨會(huì)出現(xiàn)死亡現(xiàn)象；二免有4 個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)都有死亡現(xiàn)象，但從解剖病理變化發(fā)現(xiàn)并不是疫苗免疫接種死亡，而是踩踏擁擠死亡。

2.2 二次免疫后固定抽樣H5、H7 亞型免疫抗體檢測(cè)

從表2可以看出，4 個(gè)試驗(yàn)場(chǎng)的融水香鴨在二次免疫接種后間隔21、70 d 所抽取的60 個(gè)樣本檢測(cè)H5 抗體、H7 亞型免疫抗體檢測(cè)合格率均達(dá)90%以上（最低92.08%，最高100%），都遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的70%免疫合格標(biāo)準(zhǔn)，且H5、H7 亞型免疫抗體平均效價(jià)大于6log2。試驗(yàn)結(jié)果表明，同一間隔時(shí)間、不同場(chǎng)地免疫效果差異不大，融水香鴨在二次免疫后抗體維持時(shí)間長，具有良好的免疫效果。

表1 免疫副反應(yīng)觀察情況

表2 二次免疫后固定抽樣H5、H7 亞型免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

表3 二次免疫后隨機(jī)抽樣H5、H7 亞型免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 二次免疫后隨機(jī)抽樣H5、H7 亞型免疫抗體檢測(cè)

從表3可以看出，4 個(gè)試驗(yàn)場(chǎng)的融水香鴨在二次免疫接種后間隔35、49、56、63 d 所抽取的60 個(gè)樣本檢測(cè)H5 抗體、H7 亞型免疫抗體檢測(cè)合格率均達(dá)90%以上（最低93.33%，最高100%），都遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的70%免疫合格標(biāo)準(zhǔn)，且H5、H7亞型免疫抗體平均效價(jià)大于7log2。試驗(yàn)結(jié)果表明，不同場(chǎng)地免疫效果差異不大，融水香鴨在二次免疫后抗體水平較為平穩(wěn)，維持時(shí)間長，具有良好的免疫效果。

3 結(jié) 論

通過本次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗（H5N1 Re-8 株+H7N9 H7-Re1 株）免疫接種對(duì)融水香鴨的生長發(fā)育幾乎沒有影響，具有免疫副作用較小的特點(diǎn)，能夠被廣大養(yǎng)殖戶所接受。融水香鴨在二次免疫間隔21～70 d 的隨機(jī)抽樣的幾次檢測(cè)結(jié)果，H5 抗體、H7 亞型免疫抗體合格率均在90%以上，且平均抗體效價(jià)高、維持時(shí)間長，免疫效果穩(wěn)定，取得了很好的免疫效果[1-2]。不同場(chǎng)地的免疫效果差異不大，群體合格率100%，防疫質(zhì)量總體較好，能較好地抵抗病毒的攻擊。本次融水香鴨的二次免疫重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗表現(xiàn)出較好的免疫效果，在今后融水香鴨禽流感防疫工作中有一定的推廣應(yīng)用價(jià)值。