許秦　唐一秋　鄭世妍

[摘要]本文對(duì)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食品中蘇丹紅染料的檢測(cè)方法 高效液相色譜法》（GB/T 19681—2005）中利用高效液相色譜法測(cè)定辣椒油中蘇丹紅含量的方法進(jìn)行優(yōu)化，使方法更加簡(jiǎn)便快捷，且滿足實(shí)驗(yàn)要求。以正己烷為提取溶劑，提取液經(jīng)ProElut SDH固相萃取柱凈化，經(jīng)高效液相色譜柱分離，外標(biāo)法定量。優(yōu)化后的方法中，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ在0.16～2.56?g/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的檢出限分別為0.010 7?g/kg、0.011 1?g/kg、0.011 9?g/kg、0.011 0?g/kg，加標(biāo)回收率為89.21%～95.69%。優(yōu)化后的實(shí)驗(yàn)方法易于操作，能夠縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間，有良好的回收率，更適合檢測(cè)辣椒油中蘇丹紅的含量。

[關(guān)鍵詞]高效液相色譜法;辣椒油;蘇丹紅

中圖分類號(hào)：O657.72;TS264 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：ADOI：10.16465/j.gste.cn431252ts.202004

蘇丹紅是親脂性偶氮化合物，它的化學(xué)成分中含有一種叫萘的化合物，此物質(zhì)具有偶氮結(jié)構(gòu)，這種化學(xué)結(jié)構(gòu)決定了它的致突變性和致癌性，對(duì)人體的肝腎器官具有明顯的毒性作用，在人類肝細(xì)胞研究中顯現(xiàn)出可能致癌的特性。蘇丹紅屬于化工染色劑，主要用于石油、機(jī)油和其他一些工業(yè)溶劑中，目的是使其增色，在我國(guó)禁止應(yīng)用于食品加工。食品中蘇丹紅含量的檢測(cè)方法主要有薄層色譜法、高效液相色譜法、近紅外光譜、凝膠滲透色譜、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，該方法有機(jī)試劑用量大、操作過程煩瑣、耗時(shí)長(zhǎng)。本文對(duì)此方法進(jìn)行了優(yōu)化，使操作過程簡(jiǎn)單直觀，減少了有機(jī)試劑用量，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間，提高了實(shí)驗(yàn)效率，更適合用于辣椒油中蘇丹紅含量的檢測(cè)[1-4]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀（戴安Ultimate 3000）：賽默飛世爾科技有限公司;萬分之一電子天平（先行者CP224C）：奧豪斯儀器（上海）有限公司;十萬分之一天平（METTLER AE 240）：梅特勒-托利多有限公司;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（Rotavapor R210）：BUCHI有限公司;數(shù)控超聲波清洗器（KQ5200DB）：昆明市超聲儀器有限公司[5]。

1.1.2 試劑與材料

蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)品：美國(guó)Stanford Chemicals;正己烷：色譜純;丙酮：色譜純;乙腈：色譜純;磷酸：分析純;超純水;ProElut SDH 6mL 30/pkg固相萃取柱：迪馬科技;濾膜：0.22?m;辣椒油樣品：市售。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別稱取蘇丹紅I、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)品各10mg于250mL容量瓶中，正己烷溶解后并定容至刻度線。

標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1mL、1.6mL，用正己烷定容至25mL，該標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為0.16?g/mL、0.32?g/mL、0.64?g/mL、1.28?g/mL、1.6?g/mL、2.56?g/mL，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3 樣品的前處理

1.3.1 《食品中蘇丹紅染料的檢測(cè)方法 高效液相色譜法》的前處理方法

稱取1g樣品于小燒杯中，加入適量的正己烷溶解（約10mL），慢慢加入氧化鋁層析柱中（柱中頁面約為2mm時(shí)上樣），待樣液完全流出后，根據(jù)樣品中油類雜志的多少用10～30mL正己烷洗柱，直至流出液無色，棄去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60mL洗脫，收集，濃縮，用丙酮定容至5mL，過0.22?m的濾膜，備用[6]。

1.3.2 優(yōu)化后的前處理方法

精密稱取樣品約1g于50mL離心管中，加入10mL正己烷溶解，超聲30min，將上清液全部加入ProElut SDH固相萃取柱中（預(yù)先用5mL二氯甲烷，5mL正己烷活化平衡），待上清液全部過濾完后，用5mL正己烷淋洗，再用5mL二氯甲烷洗脫，收集洗脫液于50mL雞心瓶中，40℃旋干，再用1mL正己烷定容，過0.22?m的濾膜，備用。

1.4 色譜條件

1.4.1 《食品中蘇丹紅染料的檢測(cè)方法 高效液相色譜法》的色譜條件

色譜柱：Poroshell 120 EC-C18 4.6×150mm，4.0?m;柱溫：30℃;流動(dòng)相A：0.1%甲酸水的溶液∶乙腈=85∶15;流動(dòng)相B：0.1%甲酸乙腈溶液∶丙酮=80∶20。流速1.0mL/min;進(jìn)樣量10?L;檢測(cè)波長(zhǎng)：蘇丹紅Ⅰ為478nm，蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ均為520nm。

1.4.2 優(yōu)化方法一的色譜條件

色譜柱：Poroshell 120 EC-C18 4.6×150mm，4.0?m;柱溫：40℃;流動(dòng)相乙腈：水（V∶V=90∶10）。流速1.0mL/min;進(jìn)樣量10?L;檢測(cè)波長(zhǎng)：500nm。

1.4.3 優(yōu)化方法二的色譜條件

色譜柱：Poroshell 120 EC-C18 4.6×150mm，4.0?m;柱溫：40℃;流動(dòng)相A：乙腈;流動(dòng)相B：0.2%磷酸。流速1.0mL/min;進(jìn)樣量10?L;檢測(cè)波長(zhǎng)：500nm。

2結(jié)果與分析

2.1 色譜圖比較

比較國(guó)標(biāo)法、優(yōu)化方法一和優(yōu)化方法二所得到的色譜圖可看出，三種方法中不同的流動(dòng)相均能使蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ和蘇丹紅Ⅳ有效分離。但國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中的流動(dòng)相配置過程煩瑣，使用有機(jī)試劑量較大，且分析時(shí)間最長(zhǎng)。優(yōu)化方法一中所用的是乙腈和水進(jìn)行等度洗脫，雖分析時(shí)間最短，但蘇丹紅Ⅱ和蘇丹紅Ⅲ的分離度較其余兩種方法較差，且蘇丹紅Ⅳ的峰型也不如其余兩種方法好。優(yōu)化方法二的流動(dòng)相是乙腈與0.2%磷酸進(jìn)行梯度洗脫，各蘇丹紅的峰型良好，分離度佳，且分析時(shí)間也不長(zhǎng)[7-8]。

2.2 方法檢出限、定量限和線性回歸方程

以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度為縱坐標(biāo)，峰面積為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。均以3倍信噪比（S/N）為檢出限，以10倍信噪比（S/N）為定量限。

可看出三種方法在一定濃度范圍內(nèi)均形成良好的線性關(guān)系，但優(yōu)化方法二中各蘇丹紅的檢出限和定量限最低。

2.3 樣品回收率

分別按照三種方法進(jìn)行樣品處理，樣品加標(biāo)濃度分別為0.321 6?g/mL和1.286 4?g/mL，加標(biāo)回收率?？煽闯?，優(yōu)化方法二加標(biāo)回收率優(yōu)于《食品中蘇丹紅染料的檢測(cè)方法 高效液相色譜法》（GB/T 19681—2005）和優(yōu)化方法一。

3 結(jié) 論

在對(duì)辣椒油中蘇丹紅混合物的含量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中，對(duì)《食品中蘇丹紅染料的檢測(cè)方法》（GB/T 19681—2005）規(guī)定的高效液相色譜法進(jìn)行反復(fù)實(shí)驗(yàn)，并對(duì)樣品前處理和色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)優(yōu)化方法二操作過程更簡(jiǎn)便快速、色譜分析時(shí)間更短、各色譜峰間分離度佳、回收率更高、檢出限和定量限更低，更適合于實(shí)驗(yàn)室中大批量進(jìn)行辣椒油中蘇丹紅含量的測(cè)定。

參考文獻(xiàn)

[1]王明月，桂衛(wèi)星，袁宏球.HPLC法測(cè)定咸蛋、皮蛋黃中的四種蘇丹紅染料[J].食品科學(xué)，2009，30（2）：193-195.

[2]梁桂娟，肖洋，王文平，等.超高液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（UPLC-MS/MS）測(cè)定辣椒制品中蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的含量[J].食品科技， 2012（8）：301-304.

[3]王坤，趙浩軍，張燕.高效液相色譜法測(cè)定辣椒油中的蘇丹紅染料[J].云南化工，2015，42（1）：38-41.

[4]杜志峰，黃宇鋒，羅海英，等.高效液相色譜法測(cè)定辣椒油中蘇丹紅Ⅰ染料的不確定度[J].化學(xué)分析計(jì)量，2008（2）：10-12+33.

[5]于維森，于紅衛(wèi)，曲青.高效液相色譜法測(cè)定辣椒油中蘇丹紅的不確定度評(píng)定[J].職業(yè)與健康，2006（20）：1696-1698.

[6]劉昱，岳振峰，彭艷，等.高效液相色譜法快速測(cè)定辣椒制品中蘇丹色素含量[J].中國(guó)國(guó)境衛(wèi)生檢疫雜志，2005（2）：110-112.

[7]吳銀良，楊挺，趙健，等.固相萃取高效液相色譜法測(cè)定辣椒油中蘇丹紅和對(duì)位紅染料[J].食品科學(xué)，2009，30（16）：243-246.

[8]劉珺，弓振斌.高效液相色譜-柱后在線光化學(xué)衍生熒光檢測(cè)法測(cè)定辣椒油中4種蘇丹紅染料[J].色譜，2012，30（6）：624-629.