張耀文，馬文峰，張志丹，劉方圓，王 杰，曹忠洋，王占彬*

(1.河南科技大學 動物科技學院，河南省飼草飼料資源開發(fā)與畜禽健康養(yǎng)殖院士工作站，河南 洛陽 471003；2.河南仰韶生化工程有限公司，河南 三門峽 472400)

抗生素有助于減少傳染病的發(fā)病率和死亡率并提高動物的生產性能，所以在醫(yī)療行業(yè)和畜牧業(yè)得到廣泛使用。然而，由于抗生素的濫用導致了細菌產生抗藥性以及畜產品中藥物殘留等一系列問題，各個國家已開始限制抗生素在養(yǎng)殖業(yè)的使用，并積極尋找抗生素的替代品?？咕?Antimicrobial peptides, AMPs)是一類多肽物質，廣泛存在于自然界的生物中，具有抗細菌、真菌、病毒和抗炎、抗癌、作為食品防腐劑等功能[1-3]?？咕木哂休^好的水溶性和熱穩(wěn)定性，且不易對動物正常細胞產生毒害作用[4]，所以適合作為飼料添加劑在畜牧業(yè)生產中使用。研究表明，在飼糧中添加抗菌肽能提高斷奶仔豬生長性能，改善其腸道黏膜形態(tài)與功能[5-6]，并提高其成活率，降低腹瀉發(fā)生率[7]，提高肉雞生長性能，改善腸道黏膜形態(tài)并減少病原菌數量[8-10]，降低熱應激對雞的不利良影響[11]，提高蛋雞生產性能、蛋品質、機體免疫水平和抗氧化能力，改善其腸道菌群結構[12-14]。天蠶素抗菌肽是被人發(fā)現的第一種昆蟲抗菌肽，也是現有昆蟲抗菌肽中最受關注的一種。有研究表明，飼喂天蠶素抗菌肽可提高蛋雞產蛋率[15]，改善肉仔雞腸道黏膜形態(tài)[16]。產蛋后期蛋雞存在著生產性能、免疫力和蛋品質量下降及組織器官損傷等問題，故探討飼糧營養(yǎng)對產蛋后期蛋雞健康的影響有著較為重要的理論和現實意義。但至目前有關天蠶素抗菌肽對海蘭褐蛋雞產蛋后期生產性能與蛋品質影響的研究還尚不多見，有關其對海蘭褐蛋雞產蛋后期腸道黏膜形態(tài)影響的研究還未見報道。本試驗旨在探討天蠶素抗菌肽對產蛋后期蛋雞生產性能、蛋品質及腸道黏膜形態(tài)的作用效果，為其作為新型飼料添加劑的利用提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

天蠶素抗菌肽由河南省仰韶生化工程有限公司提供，該產品為天蠶素提取物，是抗菌肽粗提品，主要成分為抗菌活性多肽、淀粉等，抗菌肽含量12×104U/g。

1.2 試驗動物與飼糧

選取70周齡產蛋率相近的海蘭褐蛋雞270只。基礎飼糧為參照NRC(1994)營養(yǎng)需要配制的粉狀配合飼糧，其組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)Table 1 Ingredients and nutrient composition of the basal diet (air-dry basis)

注：①預混料為每千克飼糧提供: 維生素A 14 300 IU,維生素D32 700 IU，維生素E 29 IU，維生素K 1.8 mg，維生素B12.25 mg，維生素B28 mg，維生素B61.5 mg，維生素B120.03 mg,煙酸35.75 mg，D-泛酸 7 mg，葉酸 0.5 mg，生物素0.06 mg，氯化膽堿0.47 mg，Ca 15 g，P 5 g， Mn 87.5 mg，Fe 100 mg，Cu 5 mg，Zn 75 mg，DL-蛋氨酸0.2%，氯化鈉0.3%。②代謝能為計算值，其余為實測值。

Notes:①The Premix provided the following per kg of the diet: VA 14 300 IU, VD32 700 IU，VE 29 IU，VK 1.8 mg，VB12.25 mg，VB28 mg，VB61.5 mg，VB120.03 mg, nicotinic acid 35.75 mg，D-pantothenic acid 7 mg，folic acid 0.5 mg，biotin 0.06 mg，choline chloride 0.47 mg，Ca 15 g，P 5 g，Mn 87.5 mg，Fe 100 mg，Cu 5 mg，Zn 75 mg，DL-Met 0.2%，NaCl 0.3%。②ME was calculated, the others were measured.

選取70周齡產蛋率相近的海蘭褐蛋雞270只。參照NRC(1994)蛋雞飼養(yǎng)標準，結合海蘭公司推薦飼糧營養(yǎng)水平，設計玉米-豆粕型基礎日糧，其組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 試驗設計及飼養(yǎng)管理

采用單因素完全隨機分組試驗設計，將270只產蛋率相近的海蘭褐蛋雞隨機分為3個處理(產蛋率依次為：85.83%，85.96%，85.28%)，每處理6個重復，每個重復15只雞，分別為對照組(基礎飼糧)、試驗Ⅰ組(基礎飼糧+50 mg/kg天蠶素抗菌肽)、試驗Ⅱ組(基礎飼糧+100 mg/kg天蠶素抗菌肽)，預飼期7 d，正試期45 d。試驗雞采用3層階梯式籠養(yǎng)，每籠3只雞，自然光照加人工補光，縱向負壓通風，自由采食和飲水。人工喂料與收蛋，每天07:00、14:00、17:30喂料，確保料槽中料量均勻，17:00收蛋。每天觀察雞群健康狀況，記錄死淘雞數。常規(guī)免疫、消毒和飼養(yǎng)管理。

1.4 測定指標與方法

1.4.1 生產性能 試驗期間每天以重復為單位記錄產蛋數、破蛋數、蛋重，計算產蛋率、破蛋率與平均日產蛋重。每周以重復為單位，統(tǒng)計實際耗料量，計算平均日采食量與料蛋比。

1.4.2 蛋品質 試驗期第45天收集蛋樣，每個重復收集10個蛋，計算平均蛋重、蛋殼厚度、蛋殼強度、蛋黃相對重、蛋殼相對重、蛋白高度、哈氏單位、蛋形指數、蛋黃膽固醇含量。

蛋重、蛋白高度、哈氏單位：使用英國TSS蛋品質分析儀測定；蛋殼強度：使用美國In-spec2200強度測定儀測定；蛋形指數：使用游標卡尺測定雞蛋橫徑長與縱徑長并計算蛋形指數(縱徑/橫徑)；蛋殼厚度：使用螺旋測微器測定(去除內外蛋白膜后分別測量蛋殼銳端、中部、鈍端的厚度，取平均值)；蛋黃膽固醇含量：使用在南京建成生物工程研究所購買的總膽固醇(TC)測定試劑盒按照說明書操作測定；蛋殼相對重：蛋殼重/蛋重×100%；蛋黃相對重：蛋黃重/蛋重×100%。

1.4.3 腸道黏膜形態(tài) 試驗雞在屠宰前禁食12 h，每個重復隨機抽取1只雞，快速屠宰，分別截取每只雞的十二指腸、空腸和回腸中段2 cm，用4%多聚甲醛固定24 h以上。石蠟包埋后，在切片機切片，厚4 μm。HE染色，中性樹膠封片。

用顯微鏡觀察，圖像采集分析，選取6個典型視野，用CaseViewer圖像分析軟件測量腸絨毛高度(villous height，VH)、黏膜隱窩深度(crypt depth，CD)、腸壁厚度(Intestinal wall thickness)，并計算絨毛高度/隱窩深度(VH/CD)。

1.5 數據處理

采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件One-Way ANOVA模塊進行方差分析，Duncan法多重比較，數據均用“平均值±標準差”表示，以P<0.05作為差異顯著性判斷標準。

2 結果與分析

2.1 抗菌肽對產蛋后期蛋雞生產性能的影響

由表2可知，各試驗組與對照組蛋雞的平均日產蛋重、平均日采食量、破蛋率無顯著差異(P>0.05)。試驗Ⅰ、Ⅱ組料蛋比顯著降低(P<0.05),產蛋率試驗Ⅱ組顯著高于試驗Ⅰ組與對照組(P<0.05)，試驗Ⅰ組與對照組無顯著差異(P>0.05)。

2.2 抗菌肽對產蛋后期蛋雞蛋品質的影響

由表3可知，與對照組相比，試驗Ⅰ、Ⅱ組的蛋殼厚度、蛋殼強度、蛋形指數、蛋白高度、哈氏單位、蛋黃相對重、蛋殼相對重與蛋黃膽固醇含量均無顯著差異(P>0.05)。

2.3 抗菌肽對產蛋后期蛋雞腸道黏膜形態(tài)的影響

由表4可知，與對照組相比，試驗Ⅰ組、Ⅱ組蛋雞十二指腸的絨毛高度、隱窩深度、VH/CD值及腸壁厚度均無顯著差異(P>0.05)。

表2 抗菌肽對蛋雞生產性能的影響Table 2 Effects of AMPs on production performance of laying hens

注：同行數據肩標字母相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同字母表示差異顯著(P<0.05)，下同。

Note: Values with the same or without superscripts mean insignificant difference (P<0.05), while the different superscripts mean significant difference (P>0.05). The same below.

表3 抗菌肽對蛋雞蛋品質的影響Table 3 Effects of AMPs supplement on egg quality of laying hens

試驗Ⅰ組、Ⅱ組蛋雞空腸絨毛高度、隱窩深度、VH/CD值、腸壁厚度與對照組相比均無顯著差異(P>0.05)。

與對照組相比，試驗Ⅰ、Ⅱ組蛋雞回腸絨毛高度顯著提高(P<0.05),VH/CD值無顯著變化(P>0.05)，隱窩深度有提高趨勢(P>0.05)。試驗Ⅰ、Ⅱ組蛋雞回腸腸壁厚度與對照組相比無顯著差異(P>0.05)，但試驗Ⅰ組顯著低于試驗Ⅱ組(P<0.05)。

3 討 論

3.1 抗菌肽對產蛋后期蛋雞生產性能的影響

目前有關天蠶素抗菌肽對海蘭褐蛋雞產蛋后期生產性能影響的研究尚不多見。有研究表明，在飼糧中添加抗菌肽可顯著提高24周齡海蘭褐蛋雞產蛋率[17]。在380日齡海蘭褐蛋雞飼糧中添加天蠶素抗菌肽可顯著提高產蛋率[15]。在30周齡海塞克斯褐殼蛋雞飼糧中添加抗菌肽粗提物可顯著提高產蛋率[13]。在380日齡海蘭褐蛋雞飼糧中添加鱟素抗菌肽可顯著提高產蛋率和平均蛋重[14]。本試驗研究結果表明，在產蛋后期蛋雞飼糧中添加不同劑量的天蠶素抗菌肽，對其平均日采食量與破蛋率無顯著影響，但均可顯著降低其料蛋比。試驗Ⅱ組產蛋率顯著高于試驗Ⅰ組與對照組，并且從試驗數據可看出試驗組蛋雞產蛋率與天蠶素抗菌肽添加劑量呈正相關，因此試驗Ⅰ組產蛋率變化不顯著可能是由于天蠶素抗菌肽添加量少的原因。本文研究結果與上述研究結果基本一致，可能是由于抗菌肽能加強機體代謝水平，促進其對營養(yǎng)物質的合成和利用，從而提高生產性能[18]。

表4 抗菌肽對蛋雞腸道黏膜形態(tài)的影響Table 4 Effects of AMPs supplement on intestinal morphology of laying hens μm

3.2 抗菌肽對產蛋后期蛋雞蛋品質的影響

以往研究報道表明，飼喂抗菌肽可顯著改善蛋雞蛋殼強度[14-17]。王棚等[12]研究表明，在380日齡海蘭褐蛋雞飼糧中添加抗菌肽Catesbeiania-1可顯著提高蛋殼厚度與蛋殼相對質量。而本試驗結果顯示，在蛋雞產蛋后期飼喂天蠶素抗菌肽對各項蛋品質指標均無顯著影響，與以上試驗結果不一致，可能是因為選用抗菌肽種類與蛋雞日齡不同有關，具體影響機制還需進一步研究。

3.3 抗菌肽對產蛋后期蛋雞腸道黏膜形態(tài)的影響

小腸絨毛是各種營養(yǎng)物質吸收的重要部位，對營養(yǎng)物質的消化吸收和轉運起著重要的作用，尤其是小腸絨毛高度、隱窩深度、VH/CD值、腸壁厚度是衡量小腸消化吸收功能的重要指標。當腸絨毛增長時，能增加腸黏膜與食糜接觸面積，從而提高小腸消化和吸收能力[19]。隱窩深度能反應細胞的增殖率，隱窩深度變淺說明腸上皮細胞成熟率上升，營養(yǎng)物質吸收功能增強。因此VH/CD值可綜合反應小腸功能，VH/CD值越高，小腸消化吸收功能越強，VH/CD值減小說明腸黏膜受損，影響小腸對營養(yǎng)物質的消化吸收[20]。腸壁厚度能反應腸道組織結構的完整性，特別是腸壁內肌層厚度的增加，能使小腸蠕動增強，可以提高其消化吸收能力，從而提高生產性能[21-24]。研究表明，飼喂人工合成抗菌肽A3與P5可提高斷奶仔豬十二指腸、空腸絨毛高度與VH/CD值[25-26]，飼喂兔圓小囊抗菌肽可提高1日齡仔公雞十二指腸、空腸絨毛高度[27]，飼喂抗菌肽P5可提高20日齡仔公雞十二指腸、空腸絨毛高度與十二指腸、回腸VH/CD值，并降低空腸隱窩深度[10]，飼喂不同水平天蠶素抗菌肽可提高海蘭褐仔公雞十二指腸、空腸、回腸絨毛高度、黏膜厚度，降低空腸、回腸隱窩深度[28]。本試驗研究表明，在產蛋后期蛋雞飼糧中添加不同水平天蠶素抗菌肽雖對其回腸隱窩深度有提高趨勢，但也顯著提高了回腸絨毛高度。說明在產蛋后期蛋雞飼糧中添加天蠶素抗菌肽有利于改善蛋雞腸道黏膜形態(tài)，這可能是由于抗菌肽通過抑菌或殺菌作用，減少有害菌對腸黏膜的破壞，從而改善腸道黏膜形態(tài)和功能[29]，具體影響機制還需進一步研究。

由此可知，在產蛋后期蛋雞飼糧中添加天蠶素抗菌肽可提高其生產性能，改善回腸黏膜形態(tài)。