陳 娟 吳志成* 賴(lài)小婷 馮景虹

隨著醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的發(fā)展，全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀得以廣泛應(yīng)用，各種血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)技術(shù)不斷升級(jí)，而同一實(shí)驗(yàn)室采用不同廠(chǎng)家、不同檢測(cè)原理的血細(xì)胞分析儀是檢驗(yàn)科發(fā)展的必然趨勢(shì)。由于不同血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)原理、使用試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品以及所處的環(huán)境溫度和濕度不同，同一份標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果間存在差異，導(dǎo)致無(wú)法滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)量評(píng)價(jià)的要求。因此，為確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性，滿(mǎn)足室間質(zhì)量評(píng)價(jià)的要求，做好實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不同儀器間檢測(cè)結(jié)果的比對(duì)顯得尤為重要[1-4]。本試驗(yàn)結(jié)合臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)發(fā)布的《用患者樣本進(jìn)行方法比對(duì)及偏差評(píng)估-批準(zhǔn)指南》(EP9-A2)[5]文件和原國(guó)家衛(wèi)生部發(fā)布的《臨床血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求》(WS/T406-2012)，以北京大學(xué)深圳醫(yī)院檢驗(yàn)科參加衛(wèi)生部臨床中心室間質(zhì)評(píng)的XN-9000型血細(xì)胞分析儀為對(duì)照儀器，對(duì)D6-CRP型血細(xì)胞分析儀進(jìn)行結(jié)果比對(duì)分析，并判斷其結(jié)果間的臨床可接受性[6]。

1 材料與方法

1.1 檢測(cè)材料

使用乙二胺四乙酸二鉀(ethylenediaminetetraacetic acid-K2，EDTA-K2)抗凝真空采血管，采集北京大學(xué)深圳醫(yī)院2019年1-5月臨床患者新鮮全血標(biāo)本2 ml，按照原國(guó)家衛(wèi)生部發(fā)布的《臨床血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求》(WS/T406-2012)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果可比性驗(yàn)證對(duì)樣本濃度的要求，收集40份EDTA-K2抗凝新鮮全血樣本，剔除由于檢測(cè)原理限制導(dǎo)致結(jié)果不可靠的樣本，如溶血、乳糜、小紅細(xì)胞以及有核紅細(xì)胞等，所有標(biāo)本從采集到檢測(cè)完成時(shí)間均在2 h內(nèi)[7]。

1.2 儀器與試劑

使用D6-CRP型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀(深圳市帝邁生物技術(shù)有限公司)、校準(zhǔn)品(帝邁PLUS0319)、質(zhì)控品(帝邁DH1901)及其配套試劑；XN-9000型血細(xì)胞分析儀(日本Sysmex公司)、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品及其原裝配套試劑。

1.3 檢測(cè)方法

(1)比對(duì)項(xiàng)目。白細(xì)胞(white blood cell，WBC)計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞(red blood cell，RBC)計(jì)數(shù)、血紅蛋白(haemoglobin，HGB)、血細(xì)胞比容(hematocrit，HCT)和血小板計(jì)數(shù)(platelet，PLT)。

(2)儀器與試劑。根據(jù)CLSI EP9-A2文件[8]選取XN-9000型血細(xì)胞分析儀為對(duì)照儀器及其配套試劑，定期用原裝配套校準(zhǔn)物進(jìn)行校準(zhǔn)；每個(gè)工作日用配套低、中、高3個(gè)濃度的全血質(zhì)控物進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制；定期參加衛(wèi)生部和本省臨檢中心的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)。

(3)試驗(yàn)條件。根據(jù)原國(guó)家衛(wèi)生部發(fā)布的《血細(xì)胞分析的校準(zhǔn)指南》(WS/T347-2011)[9]要求，儀器在第一次使用前需對(duì)其進(jìn)行校準(zhǔn)，后期至少每半年進(jìn)行一次校準(zhǔn)，使用期間按使用說(shuō)明書(shū)定期維護(hù)和保養(yǎng)[10-12]。比對(duì)期間對(duì)儀器開(kāi)機(jī)后的空白允許值進(jìn)行確認(rèn)，并完成高、中、低3個(gè)水平濃度質(zhì)控品的監(jiān)控，確保結(jié)果均在控。

(4)試驗(yàn)方法。在儀器狀態(tài)良好情況下，每日選取8份樣本，同時(shí)用各儀器按常規(guī)樣本檢測(cè)方法測(cè)定各項(xiàng)參數(shù)，每份樣本測(cè)2次，其測(cè)定順序?yàn)?～8和8～1。連續(xù)測(cè)定5 d，共40份樣本記錄測(cè)定結(jié)果，取2次測(cè)定的平均值做比對(duì)分析，其取值范圍為：WBC(1.18～55.97)×109/L，RBC(2.69～6.46)×1012/L，HGB(77～183)g/L，HCT(23.8～53.0)%，PLT(36～715)×109[13]。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)

(1)日間精密度應(yīng)符合《臨床血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求》(WS/T406-2012)[6]表5的要求。

(2)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果可比性每個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的相對(duì)偏差應(yīng)符合《臨床血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求》(WS/T406-2012)[6]表8要求的比例應(yīng)≥80%。

(3)線(xiàn)性回歸計(jì)算斜率a、截距b及線(xiàn)性回歸方程Y=ax+b。

(4)方法間相對(duì)偏差根據(jù)實(shí)驗(yàn)室使用要求，將各檢測(cè)項(xiàng)目給定的醫(yī)學(xué)決定水平(Xc)代入回歸方程，計(jì)算Y與X之間預(yù)期偏倚Bc，Bc=|Y-Xc|，相對(duì)偏差(Bc%)=(Bc/Xc)×100%。以美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)法案修正法案(CLIA'88)規(guī)定的允許總誤差(TEa)的1/2作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，兩臺(tái)儀器WBC、RBC、HGB、HCT和PLT比對(duì)的可以接受范圍依次為±7.5%、±3.0%、±3.5%、±3.0%和±12.5%。

(5)方法間絕對(duì)偏差按該文件所給的公式計(jì)算Bc的95%置信區(qū)間(confidence interval，95%CI)，即在Xc處的絕對(duì)偏差，Ea=1/2TEa，絕對(duì)允許誤差TEa=TEa%×Xc，以1/2CLIA’88絕對(duì)允許總誤差TEa作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。

(6)臨床可接受性判斷Bc%≤1/2TEa%，表明待評(píng)方法的檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照方法一致，相反則不具可比性[14]。1/2TEa在95%CI內(nèi)，表明待評(píng)方法的偏差可接受，Ea＞Bc的95%CI上限，表明預(yù)期偏差很可能(＞97.5%)＜Ea，表明待評(píng)方法的性能等同于對(duì)照方法；Ea＜Bc的95%CI下限，表明預(yù)期偏差很可能(＞97.5%)＞Ea，表明待評(píng)方法的性能和對(duì)照方法不等同。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

檢測(cè)所得數(shù)據(jù)均使用Microsoft Excel 2010軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)算偏倚、制作散點(diǎn)圖以及線(xiàn)性回歸分析。

2 結(jié)果

2.1 日間精密度

檢測(cè)低、中、高3個(gè)水平濃度質(zhì)控品，均符合WS/T 406-2012的要求[6]。D6-CRP型血細(xì)胞分析儀各檢測(cè)項(xiàng)目的日間精密度結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 實(shí)驗(yàn)室結(jié)果可比性

根據(jù)WS/T406-2012表8要求，分別計(jì)算不同濃度的相對(duì)偏差，WBC、RBC、HGB、HCT及PLT的5個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的相對(duì)偏差符合要求比例均≥80.0%，且均符合WS/T 406-2012的要求，D6-CRP型血細(xì)胞分析儀各檢測(cè)項(xiàng)目的相對(duì)偏差符合率結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 D6-CRP型血細(xì)胞分析儀各檢測(cè)項(xiàng)目的日間精密度(%)

表2 D6-CRP型血細(xì)胞分析儀各檢測(cè)項(xiàng)目的相對(duì)偏差符合率

2.3 相關(guān)性

以XN-9000型血細(xì)胞分析儀為對(duì)照儀器，D6-CRP型血細(xì)胞分析儀與其進(jìn)行線(xiàn)性關(guān)系和回歸分析結(jié)果顯示，2臺(tái)儀器各檢測(cè)項(xiàng)目間的相關(guān)系數(shù)均＞0.975，符合EP9-A2的要求，其結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 D6-CRP型血細(xì)胞分析儀各檢測(cè)項(xiàng)目相關(guān)系數(shù)及直線(xiàn)回歸方程

2.4 臨床可接受判斷

根據(jù)臨床可接受性判斷[14]標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)其臨床可接受性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，對(duì)檢測(cè)項(xiàng)目相對(duì)偏差Bc%＞1/2TEa，分析預(yù)期偏倚Bc的95%CI。其結(jié)果見(jiàn)表4和表5。

表4 D6-CRP型血細(xì)胞分析儀各檢測(cè)項(xiàng)目臨床可接受性能評(píng)價(jià)

表5 D6-CRP型血細(xì)胞分析儀檢測(cè)項(xiàng)目臨床可接受性能評(píng)價(jià)

3 討論

血常規(guī)是臨床上常見(jiàn)的檢測(cè)項(xiàng)目，無(wú)論是健康體檢、急診檢測(cè)或生病入院均離不開(kāi)血常規(guī)檢測(cè)。由于樣本量大、采血方式和科室區(qū)分等限制，導(dǎo)致僅靠1臺(tái)血細(xì)胞分析儀滿(mǎn)足不了臨床使用需求，目前較多實(shí)驗(yàn)室均配有多臺(tái)相同或不同廠(chǎng)家的血細(xì)胞分析儀，不同的血細(xì)胞分析儀之間的檢測(cè)原理、試劑、質(zhì)控品及校準(zhǔn)品等的不同，可能導(dǎo)致儀器間的檢測(cè)結(jié)果存在較大的偏差。本實(shí)驗(yàn)比對(duì)的2臺(tái)血液分析儀為不同公司的儀器，使用不同的室內(nèi)質(zhì)控品，因此選擇EP9-A2指南進(jìn)行了儀器間WBC，RBC，HGB，HCT和PLT的5個(gè)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比對(duì)。研究結(jié)果表明，2臺(tái)儀器間結(jié)果有良好的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)均＞0.975；在各個(gè)醫(yī)學(xué)決定水平處，其中PLT為50×109/L的相對(duì)偏差Bc%＞1/2TEa，但其Ea均落在95%CI內(nèi)，表明是由抽樣誤差所造成，其待評(píng)方法的偏差可接受，其余項(xiàng)目的相對(duì)偏差Bc%均≤1/2TEa。因此，XN-9000與D6-CRP儀器之間具有可比性，為臨床所接受。

4 結(jié)論

為保證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)結(jié)果統(tǒng)一以及不同實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的統(tǒng)一，除完善室內(nèi)、室間質(zhì)量檢測(cè)體系，還需根據(jù)現(xiàn)有參考文件建立合理的比對(duì)程序制度，定期開(kāi)展儀器間的比對(duì)工作，保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性，也給室內(nèi)、室間質(zhì)量控制得到良好補(bǔ)充[15]。醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法明確規(guī)定同一檢驗(yàn)項(xiàng)目在不同儀器或系統(tǒng)上測(cè)定時(shí)，每年至少要比對(duì)一次，既是重要的質(zhì)量控制方法，也是同一份新鮮全血在同一實(shí)驗(yàn)室不同儀器間傳遞的可溯源性，從而使各檢測(cè)系統(tǒng)之間具有一致性，才能給患者提供一份安全的保障和責(zé)任感，方可滿(mǎn)足臨床所需[16-17]。