許偉標(biāo) 蔡喆

【摘要】 目的 探討人絨毛膜促性腺激素（HCG）日血清雌、孕激素水平對(duì)內(nèi)膜整合素αVβ3、白血病抑制因子（LIF）表達(dá)及凍融胚胎移植（FET）結(jié)局的影響。方法 122例實(shí)施128個(gè)周期體外受精（IVF）助孕的患者， 按HCG日血清雌二醇（E2）及孕酮（P）水平分為A組（E2<5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 33個(gè)周期， 31例）、B組（E2≥5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 36個(gè)周期， 33例）、C組（E2<5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml，?28個(gè)周期， 28例）、D組（E2≥5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml， 31個(gè)周期， 30例）。所有患者均進(jìn)行超排卵方案及凍融胚胎移植。取卵后7 d左右吸取內(nèi)膜組織， 比較四組HCG日血清E2、P、LH水平及凍融胚胎移植臨床結(jié)局、種植窗期內(nèi)膜整合素αVβ3和LIF表達(dá)情況。結(jié)果 B組HCG日血清E2為（7528.2±239.0）pg/ml， D組HCG日血清E2為（7895.9±282.4）pg/ml， 均高于A組的（1739.1±162.9）pg/ml， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;C組HCG日血清P為（1.4±0.6）ng/ml， D組HCG日血清P為（1.2±0.4）ng/ml，?均高A組的（0.6±0.2）ng/ml， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 HCG日血清雌、孕激素水平不影響內(nèi)膜整合素αVβ3和LIF表達(dá)及凍融胚胎移植周期的結(jié)局。

【關(guān)鍵詞】 雌激素;孕激素;整合素αVβ3;白血病抑制因子

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.12.035

人類輔助生殖技術(shù)（assisted reproductive technology， ART）發(fā)展迅速， 體外受精-胚胎移植（in vitro fertilization?and embryo transfer， IVF-ET）獲得胚胎的數(shù)量及質(zhì)量也不斷提高， 但對(duì)于母體與胚胎間的聯(lián)系了解不多。IVF助孕中， 激素生理平衡的改變會(huì)使內(nèi)膜相關(guān)因子表達(dá)產(chǎn)生變化， 這種變化可能影響凍融胚胎移植（frozen-thawed embryo transfer， FET）周期結(jié)局。整合素是存在于細(xì)胞表面的一種跨膜糖蛋白， 在內(nèi)膜中會(huì)發(fā)生周期性改變。研究發(fā)現(xiàn)[1， 2]， 整合素αVβ3表達(dá)于黃體期， 持續(xù)至妊娠期， 與種植窗一致， 是內(nèi)膜容受性標(biāo)志物之一。白血病抑制因子（leuakemia inhibitory factor， LIF）是一種多功能糖蛋白， 黃體中期表達(dá)最高， 即種植窗期表達(dá)最高， 增生期極低水平表達(dá)， 是內(nèi)膜容受性標(biāo)記物。本研究探討HCG日血清雌、孕激素水平對(duì)種植窗期內(nèi)膜整合素αVβ3和LIF表達(dá)及凍融胚胎移植結(jié)局的影響。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2017年1～12月在本中心實(shí)施128個(gè)周期IVF助孕的122例患者， 依據(jù)Wu等[3]的研究， ROC曲線分析HCG日血清E2、P水平對(duì)IVF結(jié)局的影響， 確定高P界值為1.05 ng/ml，?高E2界值為5210 ng/ml。根據(jù)HCG日血清E2、P水平分為A組（E2<5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 33個(gè)周期，?31例）、B組（E2≥5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 36個(gè)周期， 33例）、C組（E2<5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml， 28個(gè)周期， 28例）、D組（E2≥5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml， 31個(gè)周期， 30例）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡<40歲;②卵巢儲(chǔ)備功能正常;③獲得>4個(gè)卵子;④男方精液常規(guī)檢查正常。四組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。見表1。

1. 2 方法

1. 2. 1 超排卵方案 采用黃體期長方案， 長效促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑（GnRH-a）降調(diào)節(jié)， 14～20 d后給予卵泡刺激素（FSH）超排卵治療， 卵泡最大直徑≥18 mm時(shí)注射HCG， 36～38 h后超聲指導(dǎo)下取卵。受精后18～20 h觀察受精情況， 胚胎培養(yǎng)3 d， 冷凍所有胚胎。

1. 2. 2 凍融胚胎移植 月經(jīng)第2～4天， 陰超記錄子宮、內(nèi)膜、卵巢及卵泡情況， 若未見優(yōu)勢(shì)卵泡且內(nèi)膜≤5 mm予戊酸雌二醇片（商品名：補(bǔ)佳樂）4 mg， b.i.d.， 12～14 d后抽血查促黃體生成素（LH）、E2及P， 如有卵泡發(fā)育或內(nèi)膜<8 mm則取消周期， 如內(nèi)膜厚度≥8 mm， 當(dāng)日給予黃體酮60 mg肌內(nèi)注射， 注射第4天行凍融胚胎移植。移植后第12～14天測(cè)定血清HCG。移植后第28～30天陰超檢查見宮腔內(nèi)有孕囊者為臨床妊娠。

1. 3 觀察指標(biāo) 比較四組HCG日血清E2、P、LH水平及凍融胚胎移植臨床結(jié)局、種植窗期內(nèi)膜整合素αVβ3和LIF表達(dá)情況。HCG日當(dāng)天抽取空腹肘靜脈血3 ml， 分血清， -20℃保存待測(cè)， 檢測(cè)E2、P及LH水平。在卵子獲取后的7～8 d吸取子宮內(nèi)膜組織。獲取子宮內(nèi)膜前用生理鹽水沖洗陰道、宮頸外口， 用子宮內(nèi)膜取樣器Pipelle管于子宮體中上段吸取少許內(nèi)膜組織， 檢測(cè)LIF、整合素αVβ3。凍融胚胎移植臨床結(jié)局包括可移植胚胎數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎率、種植率、臨床妊娠率、流產(chǎn)率。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 四組患者HCG日血清E2、P及LH水平比較 B組HCG日血清E2為（7528.2±239.0）pg/ml， D組HCG日血清E2為（7895.9±282.4）pg/ml， 均高于A組的（1739.1±162.9）pg/ml， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;C組HCG日血清P為（1.4±0.6）ng/ml， D組HCG日血清P為（1.2±0.4）ng/ml， 均高A組的（0.6±0.2）ng/ml， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2. 2 四組患者凍融胚胎移植臨床結(jié)局比較 四組可移植胚胎數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎率、種植率、臨床妊娠率、流產(chǎn)率比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

2. 3 四組種植窗期內(nèi)膜整合素αVβ3和LIF表達(dá)的比較 四組內(nèi)膜整合素αVβ3和LIF表達(dá)情況比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表4。

3 討論

子宮內(nèi)膜在組織學(xué)及分子學(xué)上周期性改變， 內(nèi)膜的容受性也發(fā)生改變[4]。在種植窗期， 雌、孕激素調(diào)節(jié)了子宮內(nèi)膜中因子的表達(dá)， 這些內(nèi)膜因子可能作為胚胎著床的介質(zhì)影響胚胎著床。大量的研究發(fā)現(xiàn)[5-7]， 子宮內(nèi)膜種植窗期一些因子的表達(dá)都可以反映內(nèi)膜容受性。

3. 1 整合素αVβ3和LIF 在內(nèi)膜中的表達(dá) 子宮內(nèi)膜上皮處于接受狀態(tài)時(shí)， 內(nèi)膜上皮上的粘附分子表達(dá)， 從而促使胚胎與之發(fā)生附著反應(yīng)。整合素作為粘附因子的一員， 是細(xì)胞膜上以α、β異二聚體形式存在的糖蛋白分子， 是多種細(xì)胞外基質(zhì)分子的受體， 其介導(dǎo)細(xì)胞間的信號(hào)傳導(dǎo)， 在內(nèi)膜的表達(dá)中存在多種亞型， 只有αVβ3開始表達(dá)于月經(jīng)的黃體中期， 維持到妊娠期， 是內(nèi)膜植入窗啟動(dòng)的標(biāo)示[8]。

LIF可以調(diào)節(jié)胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞功能和血管形成， 多種動(dòng)物的內(nèi)膜上發(fā)現(xiàn)有LIF-mRNA和其蛋白的表達(dá)。在增殖期， LIF-mRNA和蛋白很難測(cè)到， 但在分泌期， 兩者的水平明顯升高， 而此時(shí)段是胚胎種植時(shí)間， 因此， LIF與內(nèi)膜的容受性有關(guān)[9， 10]。Stewart等[11]通過研究發(fā)現(xiàn)， 老鼠的LIF基因被敲除后， 卵子受精后可以形成囊胚， 但不能著床， 而在該小鼠子宮腔內(nèi)補(bǔ)充LIF后， 囊胚的種植率有明顯提高， 這表明LIF可以作為內(nèi)膜容受性的標(biāo)志物。

3. 2 E2、P水平對(duì)整合素αVβ3和LIF表達(dá)及凍融胚胎移植結(jié)局的影響 超排卵中孕激素升高會(huì)使孕激素受體（PR）的表達(dá)下降， 同時(shí)會(huì)促進(jìn)內(nèi)膜的整合素αVβ3表達(dá)提早、增強(qiáng)。在一項(xiàng)對(duì)黃素化卵泡的研究中發(fā)現(xiàn)， 正常排卵組的P水平更高， 整合素αVβ3的表達(dá)增強(qiáng)， 表明植入窗推遲及內(nèi)膜容受性下降， 胚胎植入率下降[12]。林娜等[13]比較高雌孕激素水平對(duì)種植期整合素αVβ3表達(dá)的影響， 結(jié)果顯示高E2組、高P組、高E2并高P組整合素αVβ3與對(duì)照組比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。本研究中對(duì)照組為低E2并低P組， 結(jié)果顯示四個(gè)組中， 內(nèi)膜整合素αvβ3的表達(dá)也沒有差異， 這可能與P水平設(shè)定的界值不同有關(guān)， 使得研究的結(jié)果不一致。

相關(guān)研究[5]顯示， 種植窗期血清P水平在妊娠組高于非妊娠組， LIF的表達(dá)也在妊娠組較高， 且LIF的表達(dá)與血清P水平相關(guān)， 提示種植窗內(nèi)膜LIF的表達(dá)受P調(diào)節(jié)， 而E2的水平則與LIF的表達(dá)沒有相關(guān)性。也有研究[6]表明， 切除卵巢后， 添加外源性雌激素并不能誘導(dǎo)LIF蛋白的表達(dá)， 但是孕激素則可誘導(dǎo)LIF的表達(dá)增加。E2上升可使植入期時(shí)間縮短， 排卵后E2的變化也使LIF發(fā)生變化， 兩者關(guān)系密切。但是， 在本研究中， 無論是P升高組， 還是E2升高組， LIF的表達(dá)都沒有增加， 所以LIF的表達(dá)除了與P、E2的水平相關(guān)外， 還可能與E2/P的比例有關(guān)， 兩者維持在適當(dāng)比例， LIF的表達(dá)才可能增強(qiáng)。

本研究結(jié)果顯示， 四組可移植胚胎數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎率、種植率、臨床妊娠率、流產(chǎn)率比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。四組膜整合素αVβ3和LIF表達(dá)情況比較， 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

綜上所述， HCG日血清雌、孕激素水平不影響內(nèi)膜整合素αVβ3和LIF的表達(dá)及凍融胚胎移植周期的結(jié)局。雌孕激素對(duì)子宮內(nèi)膜容受性的影響是多方面的， 而子宮內(nèi)膜容受性的標(biāo)志物也不僅僅只有整合素αVβ3和LIF， 本研究只觀察αVβ3和LIF有其局限性， 需要臨床擴(kuò)大樣本量來進(jìn)一步研究， 且需要用更多的具有代表性的內(nèi)膜容受性標(biāo)志物來衡量， 才能有更準(zhǔn)確的結(jié)果。

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[收稿日期：2020-02-17]