劉莉麗

一、材料與方法

1.儀器與試劑。Agilent 1290高效液相色譜儀（美國安捷倫科技有限公司），Agilent G6460三重串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國安捷倫科技有限公司）。黃芪甲苷對照品購于中國藥品生物制品檢定所，批號為110781-200613；市售百消丹美齡丸（鄭州百消丹藥業(yè)有限公司）；甲醇、乙腈為色譜純，超純水。

2.色譜及質(zhì)譜條件。①色譜條件：Agilent SB-C18色譜柱（2.1×50mm，1.8μm）；乙腈-水（35∶65）為流動相，流速為0.2mL/min；柱溫為室溫；進樣量5μL。②質(zhì)譜條件：采用電噴霧正電離源模式（ESI+），掃描方式為多反應監(jiān)測（MRM）；霧化氣壓力35psi；干燥氣流速9L/min，干燥氣溫度350℃；毛細管電壓4000V；黃芪甲苷定量離子質(zhì)荷比（m/z）807.3/202.9，定性離子質(zhì)荷比（m/z）807.3/627.1；定性離子和定量離子對應的碰撞能量壓分別為65V、60V，碎裂電壓均為115V。

3.對照品儲備液的制備。精密稱取10mg對照品置于100mL容量瓶中，使用甲醇作為溶劑，溶解樣品并稀釋至刻度（濃度為100μg/mL），搖勻備用。

4.供試品溶液的制備。稱取0.5g樣品于20mL容量瓶中，用甲醇作為溶劑，溶解樣品并稀釋至刻度，搖勻后超聲處理30min，放冷至室溫；用中性三氧化二鋁柱（AgelaCleanert Alumina-N-SPE∶1000mg/3mL）除去雜質(zhì)，精密吸取10mL濾液，置于平行蒸發(fā)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮蒸干，用甲醇溶解殘渣并定容至1mL，經(jīng)0.22μm的微孔濾膜過濾備用。

二、實驗與結果

1.線性關系考察試驗。精密量取對照品儲備液0.10mL、0.30mL、0.50mL、0.70mL、1.00mL、10mL，分別置于10mL容量瓶中，甲醇作溶劑，稀釋至刻度后搖勻，超聲處理30min，放冷至室溫，得到對照品待測液。精密吸取對照品待測液，上機進樣測定，記錄測得峰面積。橫坐標為濃度（X），縱坐標為峰面積值（Y），得到線性回歸方程y=527.05x-25.44（r=0.9991），表明黃芪甲苷在1μg/mL-100μg/mL范圍內(nèi)線性關系良好。

2.方法學考察。①精密度試驗：精密吸取黃芪甲苷對照品儲備液，上機測定，重復進樣6次測其峰面積，RSD=1.40%，表明精密度較好。②穩(wěn)定性試驗：取同一批樣品適量，按供試品溶液的制備方法制成樣品溶液，分別在樣品溶液制備后的0h、2h、4h、8h、12h進樣測定其峰面積，RSD=1.51%，表明使用該方法樣品在12h內(nèi)的穩(wěn)定性良好。③重復性試驗：取同一批樣品，按供試品溶液的制備方法制成6份樣品溶液，上機測定，記錄黃芪甲苷的峰面積，RSD=1.65%，表明該方法重現(xiàn)性良好。④加樣回收率試驗：稱取0.5g樣品9份，每3份分別精密加入黃芪甲苷對照品儲備液20μL、40μL、60μL制成三個濃度梯度試樣，按供試品溶液的制備方法制備溶液，上機測定，記錄測定峰面積，結果回收率的平均值為93.00%、RSD值為1.62%，表明樣品加樣回收率良好。⑤樣品測定：取樣品3份，按供試品溶液的制備方法和配置樣品溶液的方法制備實驗用供試品溶液，上機測定，計算黃芪甲苷的含量，結果平均含量為8.559μg/g，RSD為1.52%。

本實驗采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對百消丹美齡丸中的黃芪甲苷進行了測定，該方法具有提取效率高、前處理快速、靈敏度高、準確度高、重復性好等優(yōu)點，可以很好地應用于百消丹美齡丸中黃芪甲苷含量的分析檢測。