張俊喜 成曉松 葛兆建

摘要：介紹一種簡易稻曲病田間接種方法（厚垣孢子直接噴霧），包括菌源的采集保存、水稻種植過程、接種體制備、接種實(shí)施過程以及最終接種效果，為水稻新品種對稻曲病的抗性田間鑒定、殺菌劑新品種對稻曲病的田間藥效試驗(yàn)提供一種簡易可行的操作方法，從而為水稻生產(chǎn)上新品種、新藥劑的選擇提供保障。

關(guān)鍵詞：稻曲病;田間接種;厚垣孢子;殺菌劑;鑒定

中圖分類號：S435.111.4+6? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A? 文章編號：1002-1302（2020）06-0107-03

水稻稻曲病是由稻綠核菌[有性態(tài)：Villosiclava virens （Nakata） E. Tanaka & C. Tanaka;無性態(tài)：Ustilaginoidea virens（Cooke）Takah.]引起的水稻穗部谷粒病害，是一種全球性的真菌病害，在亞洲、美洲、非洲等許多國家和地區(qū)均有較大面積發(fā)生，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)，病穗率可達(dá)40%以上。近年來，由于水稻耕作制度和生產(chǎn)技術(shù)條件發(fā)生較大變化，我國稻曲病發(fā)生日趨加重，已從次要病害上升為主要病害。穗粒發(fā)病后內(nèi)部菌絲體膨大，呈現(xiàn)大于穗粒多倍的稻曲球，不但影響水稻產(chǎn)量和稻米品質(zhì)，而且含有對人、畜劇毒的稻曲菌毒素，對動(dòng)物球形分子蛋白具有抑制效應(yīng)，能夠引起老鼠的肝臟、腎臟和膀胱細(xì)胞壞死。稻曲病不僅影響農(nóng)作物水稻產(chǎn)量，而且對人類健康構(gòu)成了重大負(fù)面影響[1-2]。

稻曲病的發(fā)生規(guī)律尚未完全清楚，對發(fā)生溫度都有相佐觀點(diǎn)。對稻曲病的研究已有較長時(shí)間，近年來國家、省、市（區(qū)）立項(xiàng)研究主要在致病菌類型及分子機(jī)制等方面有階段性結(jié)論，但生產(chǎn)上如何采取切實(shí)可行的高效防控措施還沒有定論。達(dá)成共識的是不同水稻品種抗病性和不同殺菌劑品種對稻曲病的防控效果具有明顯差異。筆者開展稻曲病田間簡易接種方法研究，為水稻新品種推廣應(yīng)用、殺菌劑新品種篩選提供保障。

1 材料與方法

1.1 稻曲球采集保存

2014年、2017年江蘇省鹽城市大面積生產(chǎn)上水稻稻曲病發(fā)生極少，尋找發(fā)病重的田塊采集稻曲球（表1），為下年試驗(yàn)作準(zhǔn)備，各采集300粒稻曲球帶入江蘇沿海地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所（鹽城市亭湖區(qū)）工作室自然晾干，裝入塑料袋于室內(nèi)常溫下保存。

1.2 水稻種植

為提高試驗(yàn)接種效果，于2015年選擇高感稻曲病的鹽稻10號[3-4]，2018年選擇生產(chǎn)上常見發(fā)生稻曲病的南粳9108[5-6]，作為供試水稻品種，2～3本栽插，常規(guī)肥水管理，其他見表2。

1.3 接種體制備和接種

各試驗(yàn)取上年采集保存的300粒稻曲球，裝入550 mL塑料瓶中，加入清水浸泡，反復(fù)振蕩至見穗粒露出為止。用2～3層紗布過濾，濾掉稻谷殘?jiān)推渌s質(zhì)，將含有厚垣孢子的懸浮液灌裝進(jìn)2.0 L“市下牌”噴霧器中，兌水到正常水位后到田間噴灑。噴灑階段每隔30～40 s時(shí)間晃動(dòng)1次噴霧裝置，使溶液中厚垣孢子均勻散開（表3）。

1.4 對照區(qū)設(shè)置

各試驗(yàn)均設(shè)不接種（厚垣孢子液）、水稻全生育期不用藥、單用殺蟲劑、選擇性用不同殺菌劑等處理為對照區(qū)。

1.5 調(diào)查方法

在接種稻曲病菌50 d后至收獲前，每區(qū)對角線選取3點(diǎn)，分別記載病穗數(shù)量、病穗病粒數(shù)和對應(yīng)級別，計(jì)算病穗率和病情指數(shù)。稻曲病病情分級采用標(biāo)準(zhǔn)：0級，未見稻曲球;1級，每穗1個(gè)稻曲球;2級，每穗2個(gè)稻曲球;3級，每穗3～5個(gè)稻曲球;4級，每穗6～9個(gè)稻曲球;5級，每穗10個(gè)以上稻曲球。

1.6 氣象數(shù)據(jù)

2015年、2018年和常年7月下旬至8月下旬平均氣溫、降水見表4。

2 結(jié)果與分析

接種稻曲病厚垣孢子液50 d后調(diào)查發(fā)現(xiàn)，接種區(qū)稻曲病發(fā)病明顯，其對照區(qū)病穗率、病情指數(shù)為0，均未發(fā)病，發(fā)病結(jié)果見表5。

3 結(jié)論與討論

上述2個(gè)年度3組試驗(yàn)區(qū)相鄰還種植有鹽稻1173、淮稻5號等20個(gè)抗稻瘟病監(jiān)測品種，從調(diào)查結(jié)果來看，非接種稻曲病孢子液區(qū)水稻稻曲病的發(fā)生率極低，說明這2年綜合條件對稻曲病的自然發(fā)生極為不利。不采取措施， 在自然條件下田間鑒定不同水稻品種對稻曲病的抗性、殺菌劑對稻曲病的防控效果是不準(zhǔn)確的。但在特定水稻生育期（破口前20 d左右）噴灑含有稻曲病厚垣孢子的懸浮液，無需其他特別條件，即可引起水稻稻曲病的發(fā)生，即能在田間鑒定不同水稻品種對稻曲病的抗病水平和新殺菌劑對稻曲病的防控效果，可信度高。不需要強(qiáng)調(diào)分離病菌、培養(yǎng)菌株，也不必強(qiáng)求溫濕度條件控制和采用特殊的保存方式，一切順應(yīng)自然環(huán)境，常規(guī)操作即可。此接種方法操作簡便、工作強(qiáng)度不大、勞力成本低廉，且準(zhǔn)確性、可靠性好，不會(huì)因噴霧接種影響水稻的正常生長發(fā)育，是其他接種方法所不及的。

張君成等研究證實(shí)，利用稻曲病分生孢子與菌絲體混合液接種，可引起水稻稻曲病大發(fā)生，而接種當(dāng)年新鮮厚垣孢子，其發(fā)病率極低;利用上年保存于-20 ℃的厚垣孢子接種，不能引起稻田病害發(fā)生[7-8]。楊秀娟等研究證明，多種來源的厚垣孢子于水稻孕穗期接種多次也不能致使病害發(fā)生[9]。伏榮桃等研究證明，接種上年保存的稻曲病厚垣孢子，同樣不能引起病害發(fā)生[10]。王國良研究表明，在室內(nèi)26 ℃和在高濕條件下處理老熟稻曲病厚垣孢子20 d即可打破休眠，而田間抗性鑒定情況未見報(bào)道[11]。多位專家學(xué)者的研究表明，稻曲病厚垣孢子簡便接種一般難以獲得成功，極大地制約了研究人員進(jìn)行水稻品種稻曲病的田間抗性鑒定。

筆者根據(jù)多年的研究和實(shí)踐，結(jié)合他人研究成果（厚垣孢子特性），在田間提前接種，可使稻曲病菌厚垣孢子在自然條件下解除休眠而萌發(fā)，產(chǎn)生分生孢子、菌絲于水稻孕穗破口適宜浸染期入侵，進(jìn)而促使稻曲病發(fā)生。筆者仍有疑慮的是，接種區(qū)發(fā)生稻曲病而相鄰小區(qū)未見發(fā)病，分生孢子和菌絲在自然環(huán)境中難道漂移50 cm的距離都沒有嗎，此試驗(yàn)過程中是否產(chǎn)生分生孢子和菌絲方可浸染，分生孢子和菌絲是否為浸染的必經(jīng)過程等，值得進(jìn)一步研究。

盡管已有研究表明，稻曲病菌產(chǎn)生的厚垣孢子是水稻發(fā)生稻曲病最重要的初侵染源[12]，但其浸染規(guī)律仍須進(jìn)一步研究。本研究介紹的接種方法，2017年在福建省農(nóng)科院試驗(yàn)田應(yīng)用未取得成功，其操作方法和影響因素值得進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]張俊喜，成曉松，宋益民，等. 中國水稻稻曲病研究進(jìn)展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2016，32（1）：234-240.

[2]張俊喜，成曉松，高 波，等. 江蘇水稻稻曲病綜合防控技術(shù)[J]. 大麥與谷類科學(xué)，2018，35（4）：31-34.

[3]唐紅生，孫明法，姚立生，等. 遲熟中粳糯稻新品種鹽稻10號的選育及其高產(chǎn)栽培技術(shù)[J]. 大麥與谷類科學(xué)，2009，26（4）：59-60.

[4]張俊喜，蔣林忠，霍金蘭，等. 2014年江蘇省稻曲病發(fā)生情況調(diào)查[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（10）：162-164.

[5]強(qiáng)建萍，唐瑞森，唐愛國. 2016年寶應(yīng)縣水稻品種比較試驗(yàn)總結(jié)[J]. 種子科技，2017（7）：145-146，148.

[6]朱仁武，趙雄成. 2014年和縣粳稻新品種比較試驗(yàn)[J]. 安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2015，21（2）：29-30，32.

[7]張君成，張炳欣，陳志誼，等. 稻曲病的接種方法及其效果初探[J]. 中國水稻科學(xué)，2003，17（4）：390-392.

[8]張君成，陳志誼，張炳欣，等. 稻曲病的接種技術(shù)研究[J]. 植物病理學(xué)報(bào)，2004，34（5）：463-467.

[9]楊秀娟，王舒婷，阮宏椿，等. 水稻稻曲病室內(nèi)人工接種技術(shù)[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2011，38（5）：395-400.

[10]伏榮桃，王 劍，盧代華，等. 水稻稻曲病抗性鑒定技術(shù)及影響因子研究[J]. 中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2015，31（18）：266-272.

[11]王國良. 影響稻曲病菌厚垣孢子萌發(fā)因素的研究[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào)，1988，15（4）：241-245.

[12]陳永堅(jiān)，肖炎農(nóng)，趙永靜. 稻曲病菌越冬厚垣孢子萌發(fā)力及其侵染力的研究[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào)，1995，22（2）：102-106.竇超銀，郭海瑞，孟維忠，等. 大棚黃瓜滴灌水肥一體化土壤硝態(tài)氮分布特征[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2020，48（6）：110-116.