黃景慧，袁海龍，王夢真

空軍特色醫(yī)學(xué)中心藥學(xué)部，北京 100142

急性軟組織損傷是臨床骨科一種常見病、多發(fā)病。損傷造成局部組織紅腫、疼痛、毛細(xì)血管破裂，使患者行動能力受限，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量[1]。中重度疼痛的急性軟組織損傷，經(jīng)醫(yī)師批準(zhǔn)可使用阿片受體激動劑。雖然阿片受體激動劑具有快速鎮(zhèn)痛作用，但不能緩解損傷造成的水腫、炎癥、外周組織出血，也不能縮短創(chuàng)傷恢復(fù)時間[2]。因此，尋找針對急性軟組織損傷具有快速治療作用的藥物具有重要意義。本研究在大鼠急性軟組織損傷模型上評價一系列中西藥物的抗炎鎮(zhèn)痛作用，旨在篩選發(fā)現(xiàn)對急性損傷癥狀具有快速抗炎鎮(zhèn)痛作用的潛在藥物組合，為針對急性軟組織損傷具有良好治療作用藥物的研發(fā)及臨床應(yīng)用提供了藥理學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 藥物、試劑 阿司匹林腸溶片(Bayer HealthCare Manufacturing S.r.l.國藥準(zhǔn)字J20171021批號BJ45966)雙氯芬酸鈉緩釋片(北京諾華制藥有限公司國藥準(zhǔn)字H10980297批號X0747)塞來昔布膠囊(輝瑞制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字J20140072，批號x43537)氨酚羥考酮片(SpecGx LLC USA，國藥準(zhǔn)字J20171086，批號0512B02730)云南白藥貼(云南白藥集團股份有限公司，國藥準(zhǔn)字Z53020756，批號ZEB1932)活血止痛貼(安徽安科余良卿藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字Z34020905，批號20190660)奇正消痛貼(西藏奇正藏藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字Z54020113，批號1905071)

1.1.2 動物 雄性SD大鼠，體重(180±25)g，由解放軍302醫(yī)院實驗動物中心提供。

1.1.3 儀器 自制動物挫傷模型臺、熱板實驗臺、測量尺、游標(biāo)、卡尺、顯微鏡等由解放軍302醫(yī)院實驗動物中心提供。

1.2 試驗方法

1.2.1 大鼠急性軟組織損傷模型的建立 將大鼠于實驗前脫去右后小腿部毛，將大鼠固定于軟組織打擊器上，選擇小腿中部外側(cè)軟組織做好標(biāo)記，0.2kg砝碼自20cm的高度自由落下，直接打擊大白鼠右下肢脫毛部位，連續(xù)同上操作5次，大鼠經(jīng)打擊后傷肢迅速出現(xiàn)腫脹、皮膚淤斑及皮下出血現(xiàn)象，表明急性損傷模型造模成功[3,4]。

1.2.2 藥物對大鼠急性軟組織損傷模型鎮(zhèn)痛療效研究 西藥組隨機分為5組，每組10只大鼠。根據(jù)臨床人用劑量換算給藥劑量分別為：塞來昔布組(Cel)21mg/kg，氨酚羥考酮組(Oxy)138mg/kg，雙氯芬酸組(Dic)7.8mg/kg，阿司匹林組(Asp)6.25mg/kg，溶媒組(Veh)給予2mL生理鹽水。在造模后每天灌胃給藥一次。中藥貼劑組隨機分為4組，分別為云南白藥貼組(Yunnan)，活血止痛貼組(Huoxue)及奇正消痛貼(Qizheng)組，貼劑均為2.5cm×2.5cm，溶媒組(Veh)給予同等面積膠布，每組10只大鼠，在造模后每天更換貼劑一次。

每日觀察損傷處的紅腫、瘀血情況，根據(jù)軟組織損傷的評分標(biāo)準(zhǔn)(損傷癥侯指數(shù))進行評分。具體評分標(biāo)準(zhǔn)為：①有輕微紅腫，但無瘀斑及行為障礙，0～1分；②有輕微紅腫和瘀斑，但無行為障礙，1.1～2分；③有輕微紅腫和瘀斑，以及輕微的行為障礙(能行走，不影響行動)，2.1～3分；④有明顯紅腫和瘀斑，行為障礙，3.1～4分；⑤嚴(yán)重的紅腫和瘀斑，完全不能自發(fā)行走，4.1～5分[4,5]。

1.1.3 藥物對大鼠急性軟組織損傷模型鎮(zhèn)痛作用研究 將急性軟組織損傷模型大鼠置于溫度為(52±0.2)℃的熱板上，環(huán)境溫度23℃～25℃，開始計時，直至出現(xiàn)疼痛反應(yīng)(跳躍，舔后足)為止，累計時間即為痛閾值。給藥前測定動物基礎(chǔ)痛閾，選擇基礎(chǔ)痛閾在5～20s范圍內(nèi)的大鼠用于實驗。每日在灌胃后每30min測定痛閾，比較前后大鼠痛閾值的改變。測時如大鼠60s無反應(yīng)，應(yīng)立即將其足離開熱板避免燙傷，其痛閾以60s計算。按下列公式計算給藥后最大鎮(zhèn)痛百分率(maximum possible effect,MPE%)。在實驗過程中為防止動物組織損傷，60s不出現(xiàn)疼痛反應(yīng)則中止測定，記為鎮(zhèn)痛100%。MPE%=(給藥后痛閾值-給藥前痛閾值)/(60 s-給藥前痛閾值)×100%[6]。

2 結(jié)果

2.1 藥物對大鼠急性軟組織損傷恢復(fù)的影響Veh組大鼠24h內(nèi)損傷癥侯指數(shù)達(dá)到最高，之后逐漸降低至第7d恢復(fù)正常。Cel、Oxy及Dic組與Veh組比較損傷評分均顯著降低(P＜0.001)，而Asp組與Veh組無顯著性差異(P＞0.05)；Cel組組織損傷恢復(fù)最快，與Oxy、Dic、Asp組均有顯著差異(P＜0.001)(圖1)。

圖1 西藥組不同時間點損傷癥狀指數(shù)的變化。

圖2 中藥組不同時間點損傷癥狀指數(shù)的變化。

圖3 西藥組不同時間點MPE%的變化。

中藥貼劑Yunnan組只在第2、3天與Veh組有顯著差異(P＜0.05)，Qizheng組從造模后第1～6天均與Veh組相比，可明顯改善損傷組織紅腫狀態(tài)，降低損傷評分(P＜0.001)(圖2)。從絕對值上看，Qizheng組急性損傷組織恢復(fù)速度最快。

西藥Cel組與中藥貼劑Qizheng組比較，治療第1～5天，Cel組的損傷評分顯著低于Qizheng組(P＜0.05)，從第6天起兩組無顯著性差異(P＞0.05)。

2.2 藥物對大鼠急性軟組織損傷所致疼痛的影響Veh組小鼠痛閾值在給藥后30～300min無顯著性改變，Oxy組大鼠在給藥30min后痛閾值顯著升高(P＜0.001)，在150min藥效達(dá)峰值，之后藥效逐漸下降；Cel及Asp組給藥后60min痛閾值均明顯升高，Cel組給藥后150min藥效下降，Asp組給藥后240min藥效下降，Dic組大鼠在給藥后90min痛閾值明顯升高，180min后藥效下降(P＜0.001)(圖3)。

3 討論

急性軟組織損傷的機制為毛細(xì)血管破裂、出血，引發(fā)炎性反應(yīng)，組織胺、5-羥色胺等炎性因子使微血管先收縮，后擴張充血，通透性增加，血管內(nèi)的水、蛋白等物質(zhì)從血管內(nèi)滲入組織間隙，臨床表現(xiàn)為局部疼痛、壓痛、腫脹、青紫瘀斑、肢體活動功能障礙等[2]。本文研究的四種非甾體抗炎藥物中，阿司匹林、雙氯芬酸均為非選擇性環(huán)氧酶(cyclooxygenase,COX)抑制劑，通過抑制下丘腦和外周前列腺素的合成和釋放，起到抗炎、鎮(zhèn)痛的作用[7,8]。塞來昔布能特異性抑制COX-2，阻止炎性前列腺素類物質(zhì)的產(chǎn)生，達(dá)到抗炎、鎮(zhèn)痛及解熱的作用[9]。在大鼠急性軟組織損傷模型灌胃給予塞來昔布、氨酚羥考酮、雙氯芬酸均能促進軟組織損傷恢復(fù)，其中塞來昔布療效最佳，阿司匹林無顯著作用，表明COX-2在急性軟組織損傷發(fā)病機制中可能起到關(guān)鍵作用，選擇性COX-2抑制劑產(chǎn)生較好促進損傷恢復(fù)的效果。

氨酚羥考酮是對乙酰氨基酚和鹽酸羥考酮組成的復(fù)方制劑(每片含對乙酰氨基酚325mg，鹽酸羥考酮5mg)。該藥在乙酰氨基酚的外周抗炎鎮(zhèn)痛基礎(chǔ)上加入鹽酸羥考酮激動中樞阿片受體加強鎮(zhèn)痛作用[10]。本實驗表明西藥組均對大鼠急性軟組織損傷模型表現(xiàn)出時間依賴性鎮(zhèn)痛作用，其中氨酚羥考酮的急性鎮(zhèn)痛起效時間短，作用最強，阿司匹林和塞來昔布起效晚于氨酚羥考酮，也表現(xiàn)出一定程度的鎮(zhèn)痛作用，雙氯芬酸起效時間最晚，鎮(zhèn)痛作用最弱。雖然氨酚羥考酮的鎮(zhèn)痛作用較強，但根據(jù)國家藥監(jiān)局、公安部、國家衛(wèi)生健康委員會《關(guān)于將含羥考酮復(fù)方制劑等品種列入精神藥品管理的公告》規(guī)定，口服固體制劑每劑量單位含羥考酮堿不超過5mg的復(fù)方制劑自2019年9月1日起列入第二類精神藥品加強管理，該藥物的臨床應(yīng)用受限。因此，尋找鎮(zhèn)痛活性強且無中樞依賴的替代藥物或研發(fā)新型的復(fù)方制劑組合具有重要意義。

云南白藥貼為國家保密方，在靜脈炎、乳腺炎等疾病的外敷治療方面具有良好效果[11,12]，本研究在急性軟組織損傷模型上發(fā)現(xiàn)該藥物僅在個別時間點有效。活血止痛貼含有干姜、獨活、牡丹皮等成分，文獻(xiàn)報道對臨床急慢性扭挫傷具有一定鎮(zhèn)痛抗炎作用[13,14]，但對本研究模型不能促進軟組織損傷恢復(fù)的作用。奇正消痛貼成分為獨一味、棘豆、姜黃等，本實驗顯示可顯著促進損傷恢復(fù)，與文獻(xiàn)報道一致[15,16]。推測奇正消痛貼中某些活性成分可能對急性軟組織損傷模型鎮(zhèn)痛抗炎療效更為顯著，具體機制尚待研究。

綜上所述，在大鼠急型軟組織損傷模型上，一系列的中西藥均表現(xiàn)出不同程度的治療作用。塞來昔布、奇正消痛貼的促軟組織損傷恢復(fù)效果最好；氨酚羥考酮鎮(zhèn)痛作用起效最快，效能最強。本研究結(jié)果可為制定急性軟組織損傷的救治方案或研制鎮(zhèn)痛抗炎復(fù)方制劑提供實驗證據(jù)。