鄧婷，王琳★，杜平，李相敏

（1.貴州省畢節(jié)市中醫(yī)院，貴州 畢節(jié)；2.貴州中醫(yī)藥大學，貴州 貴陽）

0 引言

苦參為豆科植物苦參Sophora flavescens Ait. 的干燥根，春、秋二季采挖，除去根頭和小支根，洗凈，干燥，或趁鮮切片，干燥[1]。苦參化學研究主要集中在根部，包括生物堿、黃酮、脂肪酸等成分[2-4]。具有殺蟲、抗心律失常、抗腫瘤、降血糖、降壓等作用[5-10]。現(xiàn)已知苦參抗菌的主要活性成分是苦參堿、氧化苦參堿、槐定堿和高麗槐素[11]?？鄥⒅兄饕煞挚梢宰鳛樘烊话踩南境煞执?zhèn)鹘y(tǒng)化學成分，具有環(huán)保、綠色、安全的特點[12]。目前有關(guān)苦參炮制工藝沒有具體操作技術(shù)標準，缺乏參數(shù)化的管理，導致飲片的質(zhì)量參差不齊。因此，本研究以苦參堿、氧化苦參堿及水溶性浸出物為指標，采用L9（34）正交試驗優(yōu)化苦參炮制工藝，制定工藝技術(shù)參數(shù)，為更深入研究苦參藥材及其應用奠定基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20AT 高效液相色譜儀（LC-20AT 二元梯度泵、SPD-20A檢測器，日本島津）；JT5003 型全自動天平（余姚金諾）；HH-2 數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州澳華）；101-2AB 電熱鼓風干燥箱（天津市泰斯特）；HS10260D 超聲波清洗器（天津恒奧）；WP-UP-WF-20 實驗室超純水機（四川沃特爾）等。

1.2 材料

甲醇、乙腈為色譜純，磷酸、三氯甲烷、濃氨水、無水乙醇為分析純，苦參堿與氧化苦參堿對照品（批號分別為VJOY-9B2S、BVFN-43CD），購于中國食品藥品檢定研究院，中性氧化鋁柱（100～200 目，5g，內(nèi)徑1cm）等。

苦參藥材購自貴州省大方縣羊場鎮(zhèn)，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學生藥教研室魏升華教授鑒定為豆科植物苦參Sophora flavescens Ait.的干燥根。

2 方法與結(jié)果

2.1 苦參堿與氧化苦參堿的測定

2.1.1 色譜適用性條件

色譜柱：BP-NH2 柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液（80：10：10）；檢測波長：220nm；體積流量：1.0mL/min；柱溫：30℃；進樣量：10μL；理論板數(shù)按氧化苦參堿峰計算應不低于2000。

2.1.2 對照品溶液的制備

取苦參堿對照品、氧化苦參堿對照品適量，精密稱定，加乙腈- 無水乙醇（80：20）混合溶液分別制成每1mL 含苦參堿0.02mg、氧化苦參堿0.2mg 的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備

取苦參飲片粉末0.3g（過三號篩），精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液0.5mL，精密加入三氯甲烷20mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）30min，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5mL，加在中性氧化鋁柱上，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇（7：3）各20mL洗脫，合并收集洗脫液，回收溶劑至干，殘渣加無水乙醇適量使溶解，轉(zhuǎn)移至10mL 量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.1.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取苦參堿、氧化苦參堿對照品0.5、1.0、5.0、9.0、13.0、17.0、20.0μL 注入高效液相色譜儀中，按“2.1.1”項下色譜條件進行測定。以對照品質(zhì)量（X）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標，分別得苦參堿的回歸方程為Y=283002X-780.54，r=0.9998；哈巴俄苷的回歸方程為Y=516574X-1468.8，r=0.9997；結(jié)果表明，苦參堿在0.010～0.400μg、氧化苦參堿在0.10～4.00μg 呈良好線性關(guān)系。

2.1.5 精密度試驗

取苦參飲片粉末0.3g，精密稱定，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件連續(xù)進樣6 次，結(jié)果苦參堿、氧化苦參堿的RSD 分別為1.37%、0.73%，表明儀器精密度良好。

2.1.6 重復性實驗

取苦參飲片粉末6 份，每份0.3g，精密稱定，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件進行測定，結(jié)果苦參堿、氧化苦參堿的RSD 分別為2.75%、2.07%，表明該方法的重復性良好。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗

取苦參飲片粉末0.3g，精密稱定，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件分別在0、2、4、6、8、10h 進行測定，結(jié)果苦參堿、氧化苦參堿的RSD 分別為2.27%、1.90%，表明供試品溶液于室溫下10h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.8 加樣回收率試驗

精密稱取同一批苦參藥材粉末6 份，每份約0.15 g，分別精密加入苦參堿、氧化苦參堿對照品適量，按“2.1.3”項下方法制備，按“2.1.1”項下色譜條件測定，結(jié)果苦參堿、氧化苦參堿的平均加樣回收率分別為98.6%、100.71%，RSD 分別為2.83%、2.46%。

2.2 水溶性浸出物的測定

照2015 版《中國藥典》四部通則“2201”項下水溶性浸出物測定法中的冷浸法測定。

2.3 炮制工藝考察

2.3.1 單因素考察

以苦參中苦參堿、氧化苦參堿和水浸出物的含量為指標，對苦參藥材的軟化用水量（A）、軟化水溫度（B）、軟化時間（C）、干燥溫度（D）進行單因素考察。結(jié)果以0.8 倍25±2℃水軟化苦參，軟化22 h，切厚片，90℃干燥最佳。

2.3.2 正交試驗

根據(jù)“2.3.1”項下單因素考察結(jié)果，選用L9（34）正交表安排試驗（見表1、表2）。取9 份苦參藥材，分別加入不同用量及不同溫度水進行軟化，軟化一定時間，取出，切厚片，再在不同溫度下干燥，即得9 份樣品。按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件進行測定。分差分析結(jié)果見表3。

表1 因素水平表

表2 正交試驗設計及結(jié)果表

表3 方差分析結(jié)果表

直觀分析表明：以苦參堿與氧化苦參堿總量為指標，炮制過程中的影響因素為：C＞D＞B＞A；以水浸出物含量為指標，炮制過程中的影響因素為：C＞A＞D＞B。說明軟化水溫度對苦參中苦參堿、氧化苦參堿及水溶性浸出物含量的影響最大。方差分析結(jié)果表明：以苦參堿與氧化苦參堿總量為指標，其實驗結(jié)果均無顯著性差異；以水溶性浸出物為指標，則軟化時間有顯著性影響，其它因素無顯著性差異。水溶性浸出物是衡量中藥飲片質(zhì)量的重要指標之一，因此綜合各因素考慮，確定的炮制工藝為：A3B3C2D1。即用1 倍量25±2℃水，軟化22h，切厚片，置烘箱內(nèi)80℃干燥，即得。

2.4 工藝驗證

取同一批次的苦參干藥材3 份，每份5000g，用1 倍量25±2℃水軟化22 h，取出，稍潤，切厚片，置烘箱內(nèi)80℃干燥。按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件進行測定。結(jié)果見表4。

表4 工藝驗證結(jié)果表

結(jié)果表明，分別測定3 個指標含量，三次結(jié)果差異較小，表明研究的炮制工藝穩(wěn)定、合理、可行。

3 討論

在苦參切制過程中，影響苦參炮制工藝的因素有軟化用水量、軟化水溫度、軟化時間、干燥溫度4 個因素；研究結(jié)果表明，將4 個因素納入L9（34）正交試驗，得到的最佳切制工藝為：用1 倍量25±2℃水，軟化22 h，切厚片，置烘箱內(nèi)80℃干燥。工藝驗證結(jié)果表明，該炮制工藝穩(wěn)定、可行。

中藥材在飲片切制前，用水進行浸泡、潤軟化處理，是中藥傳統(tǒng)加工炮制中的一個重要內(nèi)容。本研究采用“浸潤結(jié)合，藥透水盡”的原則，經(jīng)預實驗結(jié)果表明，苦參干藥材的吸水率（M 水：M 藥材）為0.71，與2015 版《中國藥典》“浸泡至約六成透時，潤透，切厚片”描述相吻合，單因素考察設置軟化用水量梯度分別為0.2、0.4、0.6、0.8、1、2、4、6、8 倍，結(jié)果軟化用水量為0.8 倍時，各指標含量最高，再經(jīng)正交工藝優(yōu)選，結(jié)果以1 倍水為最佳軟化用水量，使藥材整個軟化過程中浸-潤有機結(jié)合，既保證苦參內(nèi)在成分，又達到軟化便于切制的目的。