李麗娟，陳丹娜，謝小燕

（東莞市人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣東 東莞523000）

肺炎克雷伯菌 （Klebsilla pneumoniae，KP）屬于常見的革蘭氏陰性桿菌，在院內(nèi)感染和社區(qū)感染的致病菌中，肺炎克雷伯菌屬于常見的細(xì)菌之一。近年來細(xì)菌耐藥監(jiān)測顯示，肺炎克雷伯菌的分離率在不斷增加，在患者機(jī)體免疫力下降的時候，可能會出現(xiàn)病菌的轉(zhuǎn)移，造成其他系統(tǒng)出現(xiàn)感染的情況［1］。1986年，高毒力肺炎克雷伯菌 （hypervirulentKlebsilla pneumoniae，hvKP）在臺灣被首次報道后，由hvKP引起的患者感染逐年上升，與醫(yī)院獲得性感染的 “經(jīng)典”肺炎克雷伯菌 （classicKlebsiella pneumoniae，cKP）相比，hvKP所致感染區(qū)別在于［2］：主要導(dǎo)致流動性、健康人群嚴(yán)重感染；易發(fā)生感染的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散，如脾膿腫、肺炎、眼內(nèi)炎和腦膜炎等，且患者更容易出現(xiàn)血液感染，不能及時控制將發(fā)展成為多臟器衰竭、感染性休克，威脅患者的生命。本研究分析東莞地區(qū)高毒力肺炎克雷伯桿菌的耐藥情況和分子分型，現(xiàn)報道如下。

1 材料和方法

1.1 研究菌株收集2018年6月至12月東莞市人民醫(yī)院臨床非重復(fù)標(biāo)本分離的255株肺炎克雷伯菌菌株作為試驗(yàn)菌株，并剔除同一個患者相同部位的重復(fù)菌株。

1.2 拉絲試驗(yàn)將分離的菌株接種于哥倫比亞血瓊脂平板上，放置在溫度37℃恒溫箱中孵育24 h，使用接種環(huán)在菌落表面輕挑，當(dāng)挑起過程中出現(xiàn)絲狀物，且絲狀物大于5 mm可判定拉絲試驗(yàn)陽性，則為hvKP。

1.3 藥敏試驗(yàn)采用Vitek2 Compact全自動微生物分析系統(tǒng)進(jìn)行常用抗菌藥物的敏感性檢測，按照美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會 （2019版）［3］推薦標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判讀。

1.4 血清型檢測采取煮沸法提取DNA，應(yīng)用PCR技術(shù)對肺炎克雷伯菌莢膜血清型進(jìn)行檢測［4］。莢膜血清型包括K1、K2、K5、 K20、 K54、 K57。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，應(yīng)用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 hvKP菌株檢出率收集2018年6月至12月本院臨床非重復(fù)標(biāo)本分離的255株肺炎克雷伯菌菌株，拉絲陽性有80株，即hvKP菌株檢出率為31.37%。

2.2 血清分型hvKP菌株中血清型K2型22株 （27.50%），K1型20株 （25.00%），K57型18株 （22.50%），K54型11株（13.75%）， K5型5株 （6.25%）， K20型4株 （5.00%）。 見表1。

表1 肺炎克雷伯菌的血清分型 ［n（%）］

2.3 hvKP與cKP的抗生素敏感性比較除對氨芐西林天然耐藥之外，hvKP對氨芐西林-舒巴坦、頭孢唑啉、頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢吡肟、氨曲南、慶大霉素、妥布霉素、環(huán)丙沙星、左旋氧氟沙星及復(fù)方新諾明的耐藥率均低于cKP，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （均P＜0.05）；hvKP的ESBLs檢出率為 4.9%，低于cKP的27.1%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。見表2。

表2 高毒性與經(jīng)典肺炎克雷伯菌對常用抗菌藥物的耐藥率 （%）

3 討論

在20世紀(jì)90年代，臺灣研究者首次發(fā)現(xiàn)了一例高致病的肺炎克雷伯菌導(dǎo)致的肝膿腫，高毒力肺炎克雷伯菌 （hvKP）才逐漸被人們認(rèn)知，該菌株存在高毒性、高侵襲性，患者感染后病情發(fā)展迅速，易出現(xiàn)全身轉(zhuǎn)移性病灶和感染性休克［5］。臨床上hvKP與傳統(tǒng)經(jīng)典的肺炎克雷伯菌的感染情況類似，均以肺部感染和消化道感染多見。

本研究對我院肺炎克雷伯菌感染的患者進(jìn)行菌株分離，結(jié)果顯示hvKP菌株中檢測出6種血清型，分別為K1、K2、K5、K20、K54、K57，其中以K2型和K1型為主，分別占27.50%（22／80） 和 25.00% （20／80）。 目前研究［6］發(fā)現(xiàn)肺炎克雷伯菌有78種血清型，不同區(qū)域的肺炎克雷伯菌的血清型有區(qū)別，亞洲地區(qū)以K1、K2、K54、K57型最常見，其中K1型和K2型具有高毒力；本研究與汪強(qiáng)等［7］的研究一致，hvKP以K2型和K1型為主。K1型和K2型hvKP與其他分型的hvKP相比較，可以更耐受中性粒細(xì)胞的水解吞噬等作用，并且K2型菌株產(chǎn)生的莢膜還能發(fā)揮逃避吞噬的作用，因此K1型和K2型更容易發(fā)生肝膿腫進(jìn)而轉(zhuǎn)移誘發(fā)全身感染甚至是感染性休克［8］?？股孛舾行詸z測顯示，hvKP除對氨芐西林天然耐藥之外，對氨芐西林-舒巴坦、頭孢唑啉、頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢吡肟、氨曲南、慶大霉素、妥布霉素、環(huán)丙沙星、左旋氧氟沙星及復(fù)方新諾明的耐藥率均顯著低于cKP（P＜0.05）；hvKP的ESBLs檢出率為4.9%，顯著低于cKP的27.1% （P＜0.05）。ESBLs是一種超廣譜β內(nèi)酰胺酶，研究［9］顯示hvKP產(chǎn)生的ESBLs可以水解青霉素、一代頭孢、二代頭孢、三代頭孢、單環(huán)內(nèi)酰胺類抗生素，發(fā)揮耐藥作用。

綜上所述，東莞地區(qū)hvKP的血清型以K2型、K1型為主，對常用抗生素敏感，可檢測出ESBLs陽性菌株，臨床上可據(jù)此給予hvKP患者早期診斷和治療，改善預(yù)后。