祝慶亮*，谷 江，詹德明，楊永國(guó)，馬洪貴，張永春，朱 鵬，薛浩良，崇延坤，鄭 翔

（1.揚(yáng)州市江都人民醫(yī)院泌尿外科，江蘇 揚(yáng)州 225200； 2.貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科，貴州 貴陽(yáng) 550004；3.揚(yáng)州市江都人民醫(yī)院病理科，江蘇 揚(yáng)州 225200）

臨床上老年多原發(fā)膀胱癌患者不斷增多，靶向治療可能成為拒絕或不能耐受手術(shù)及放化療患者的治療方法之一。研究表明C-erbB-2、EGFR等基因與膀胱癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)[1-2]，目前以C-erbB-2為靶點(diǎn)的藥物曲妥珠單抗、以EGFR為靶點(diǎn)的藥物吉非替尼等腫瘤靶向藥物已廣泛運(yùn)用于臨床腫瘤的靶向治療，C-erbB-2、EGFR靶點(diǎn)檢測(cè)表達(dá)陽(yáng)性的患者相關(guān)靶向治療效果較好[3-4]，我們研究發(fā)現(xiàn)老年多原發(fā)膀胱癌中膀胱癌C-erbB-2、EGFR表達(dá)低于老年單發(fā)膀胱癌[5]，是否明顯高于老年腺性膀胱炎等非腫瘤疾病，是否有靶向治療的可行性需進(jìn)一步研究。老年多原發(fā)膀胱癌是一種特殊的膀胱癌，它除膀胱癌外，還有其他惡性腫瘤（第二癌）存在，C-erbB-2、EGFR在老年多原發(fā)膀胱癌其他腫瘤（第二癌）中表達(dá)情況，也是老年多原發(fā)膀胱癌靶向治療的重要基礎(chǔ)。因此本研究通過(guò)測(cè)定老年多原發(fā)膀胱癌中膀胱癌及第二癌中C-erbB-2、EGFR靶點(diǎn)表達(dá)，比較老年多原發(fā)膀胱癌中膀胱癌組織與老年腺性膀胱炎組織中C-erbB-2、EGFR表達(dá)差異，同時(shí)觀察C-erbB-2、EGFR靶點(diǎn)在老年多原發(fā)膀胱癌其他腫瘤（第二癌）中表達(dá)情況，為老年多原發(fā)膀胱癌靶向治療可行性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我們醫(yī)院1995年～2020年老年多原發(fā)膀胱癌病理石蠟切片標(biāo)本21例，男性13例，女性8例，年齡60～80歲，平均69.7歲，其中膀胱癌臨床分期、病理分級(jí)見(jiàn)表1。老年腺性膀胱炎21例，男13例，女8例，年齡60～80歲，平均69.7歲，21例正常膀胱組織患者，男13例，女8例，年齡60～80歲，平均69.7歲（正常膀胱組織的來(lái)源：（1）膀胱鏡活檢組織；（2）開(kāi)放手術(shù)膀胱組織；（3）尸檢膀胱組織）（見(jiàn)表1）。其中老年腺性膀胱炎患者、老年正常膀胱組織患者與老年多原發(fā)膀胱癌患者性別完全相同、年齡基本相同，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。三組共63例患者（老年多原發(fā)膀胱癌包括第二癌標(biāo)本）的標(biāo)本，4%中性福爾馬林固定，常規(guī)脫水包埋。

表1 老年多原發(fā)膀胱癌、老年腺性膀胱炎及老年正常膀胱患者資料（各21例）

1.2 試劑及方法

C-erbB-2抗體試劑（免疫組化化學(xué)法）、EGFR受體抗體試劑（免疫組化化學(xué)法）及同型對(duì)照抗體、SP免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒均購(gòu)于均購(gòu)買(mǎi)于福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。檢測(cè)步驟按說(shuō)明書(shū)開(kāi)展。每份標(biāo)本作3張切片，厚度4 μm，2張分別標(biāo)記C-erbB-2、EGFR抗體行C-erbB-2、EGFR免疫組化染色，1張作H.E.染色。

1.3 結(jié)果判定方法

結(jié)果判定采用圖象分析系統(tǒng)分析，C-erbB-2、EGFR免疫標(biāo)記采用測(cè)量平均光密度方法。圖象分析步驟：（1）顯微鏡下，通過(guò)攝像頭采集免疫組化切片圖象，輸入分析系統(tǒng)，進(jìn)行平均光密度測(cè)量。（2）每例隨機(jī)選取5個(gè)不同視場(chǎng)，每個(gè)視場(chǎng)選取4個(gè)陽(yáng)性區(qū)域，分別測(cè)量平均光密度。（3）每例有20個(gè)數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)進(jìn)行系統(tǒng)數(shù)據(jù)分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用方差分析比較C-erbB-2、EGFR的組間表達(dá)，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.001有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 老年多原發(fā)膀胱癌、老年腺性膀胱炎及老年正常膀胱組織中C-erbB-2、EGFR免疫組化結(jié)果圖(見(jiàn)圖1～6)

2.2 老年多原發(fā)膀胱癌的第二癌（肺癌、乳腺癌、肝癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、腎癌）EGFR免疫組化陽(yáng)性染色結(jié)果圖(見(jiàn)圖1～6)

2.3 老年多原發(fā)膀胱癌、老年腺性膀胱炎及老年正常膀胱組織中C-erbB-2、EGFR表達(dá)情況（見(jiàn)表2）

表2 老年多原發(fā)膀胱癌、腺性膀胱炎及正常膀胱組織中C-erbB-2、EGFR表達(dá)比較（±s）

表2 老年多原發(fā)膀胱癌、腺性膀胱炎及正常膀胱組織中C-erbB-2、EGFR表達(dá)比較（±s）

注：陽(yáng)性表達(dá)與平均光密度值成反比（平均光密度值越小表示陽(yáng)性表達(dá)越強(qiáng)，越大表示陽(yáng)性表達(dá)越弱）。

標(biāo)本nC-erbB-2EGFR images/BZ_37_1351_1170_1373_1213.png±sP值images/BZ_37_1351_1170_1373_1213.png±sP值老年多原發(fā)膀胱癌 21 95.18±12.72 ＜ 0.05 115.58±12.66 ＜ 0.001老年腺性膀胱炎21 101.16±11.12 ＜ 0.001 124.18±11.20 ＜ 0.001老年正常膀胱組織 21 109.36±9.78 ＜ 0.001 148.86±11.68 ＜ 0.001

2.4 老年多原發(fā)膀胱癌膀胱癌及第二癌（肺癌、乳腺癌、肝癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、腎癌）C-erbB-2、EGFR表達(dá)情況（見(jiàn)表3）

2.5 結(jié)果分析

21例老年多原發(fā)膀胱癌組織中C-erbB-2的平均光密度值為95.18±12.72，21例老年腺性膀胱炎組織中C-erbB-2的平均光密度值為101.16±11.12，21例老年正常膀胱組織中C-erbB-2的平均光密度值為109.36±9.78。老年多原發(fā)膀胱癌及老年腺性膀胱炎組織組織中C-erbB-2表達(dá)均高于老年正常膀胱組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。老年多原發(fā)膀胱癌組織中C-erbB-2表達(dá)高于老年腺性膀胱炎，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

21例老年多原發(fā)膀胱癌組織中EGFR的平均光密度值為115.58±12.66，21例老年腺性膀胱炎組織中EGFR的平均光密度值為124.18±11.20，21例老年正常膀胱組織中C-erbB-2的平均光密度值為148.86±11.68。老年多原發(fā)膀胱癌、老年腺性膀胱炎中EGFR表達(dá)均高于老年正常膀胱組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。老年多原發(fā)膀胱癌組織中EGFR表達(dá)明顯高于老年腺性膀胱炎，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表3 老年多原發(fā)膀胱癌中膀胱癌及第二癌C-erbB-2、EGFR表達(dá)情況

3 討 論

C-erbB-2基因又名neu或HER-2基因，在許多腫瘤中高表達(dá)，與腫瘤的惡性程度和侵襲力密切相關(guān)[6]。本研究結(jié)果顯示老年多原發(fā)膀胱癌中C-erbB-2表達(dá)顯著高于老年正常膀胱組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明C-erbB-2可能在老年多原發(fā)膀胱癌的膀胱癌（第一癌）發(fā)展過(guò)程中起作用。老年腺性膀胱炎中C-erbB-2表達(dá)高于老年正常膀胱組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），可能跟部分腺性膀胱炎為癌前病變有向膀胱癌發(fā)展有關(guān)[7]，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明C-erbB-2靶點(diǎn)在老年多原發(fā)膀胱癌第二癌（乳腺癌）中表達(dá)陽(yáng)性可能是老年多原發(fā)膀胱癌（第二癌為乳腺癌）靶向治療的基礎(chǔ)，C-erbB-2靶點(diǎn)在老年多原發(fā)膀胱癌第二癌除乳腺癌以外均為陰性，說(shuō)明老年多原發(fā)膀胱癌以C-erbB-2為靶點(diǎn)的靶向治療可能效果不佳，但具體效果有待進(jìn)一步研究。

EGFR是原癌基因C-erbB-1的表達(dá)產(chǎn)物，EGFR過(guò)度表達(dá)與腫瘤發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，報(bào)道顯示在膀胱癌非腫瘤粘膜中EGFR的表達(dá)高于正常膀胱組織[8]。目前認(rèn)為EGFR是腫瘤靶向治療的相關(guān)靶點(diǎn)，EGFR通路異常與腫瘤的增值、浸潤(rùn)、抗凋亡等有關(guān)[9]。本研究表明老年腺性膀胱炎組織中EGFR表達(dá)均明顯高于老年正常膀胱組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），老年多原發(fā)膀胱癌中EGFR表達(dá)高于老年腺性膀胱炎，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），結(jié)果表明EGFR基因可能在老年多原發(fā)膀胱癌發(fā)展過(guò)程中起作用，本實(shí)驗(yàn)EGFR靶點(diǎn)表達(dá)在老年多原發(fā)膀胱癌第二癌（肺癌、乳腺癌、肝癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、腎癌）為陽(yáng)性，這為第二癌是肺癌、乳腺癌、肝癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、腎癌的老年多原發(fā)膀胱癌的靶向治療提供了治療靶點(diǎn)。老年腺性膀胱炎組織中EGFR表達(dá)均明顯高于老年正常膀胱組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），可能與部分腺性膀胱炎患者發(fā)展成為膀胱癌有關(guān)，說(shuō)明EGFR在老年腺性膀胱炎發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中也可能起一定作用[7,8,10]。

綜上所述，本研究C-erbB-2、EGFR在老年多原發(fā)膀胱癌的第一癌（膀胱癌）中表達(dá)高于老年正常膀胱組織、老年腺性膀胱炎，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）及在第二癌中表達(dá)陽(yáng)性，為靶向治療老年多原發(fā)膀胱癌提供了可能。隨著吉非替尼、厄洛替尼、伊馬替尼等EGFR的靶向藥物以及針對(duì)C-erbB-2的曲妥珠單抗等腫瘤靶向藥物不斷用于臨床腫瘤靶向治療[11]，相信在不遠(yuǎn)將來(lái)老年多原發(fā)膀胱癌的靶向治療有可能得以實(shí)現(xiàn)。