李東，管改弟，劉文

(太原市紅十字血液中心，山西 太原 030000)

《血站技術(shù)操作規(guī)程(2015版)》質(zhì)量控制章節(jié)中明確規(guī)定，各采供血機(jī)構(gòu)應(yīng)每月對(duì)1%或至少4袋的全血及血液成分進(jìn)行無(wú)菌實(shí)驗(yàn)[1]。當(dāng)前各采供血機(jī)構(gòu)采集制備環(huán)節(jié)已形成較為嚴(yán)謹(jǐn)、科學(xué)且安全的操作模式，獻(xiàn)血人群大多數(shù)為健康人群，并且每月進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)的血液成分相對(duì)較少，通常無(wú)菌實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果均多年持續(xù)陰性，血液產(chǎn)品的細(xì)菌檢出率很低[2]。故對(duì)細(xì)菌檢測(cè)設(shè)備的靈敏度有待檢驗(yàn)。為此，我中心參加了中國(guó)國(guó)際輸血感染預(yù)防與控制項(xiàng)目組(CITIC)開(kāi)展的血液成分細(xì)菌檢測(cè)能力驗(yàn)證項(xiàng)目。本文就2017年我中心質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室參加的3次血液成分細(xì)菌檢測(cè)項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，旨在驗(yàn)證中心質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌檢測(cè)設(shè)備靈敏度，為工作人員無(wú)菌操作規(guī)范性的考察提供數(shù)據(jù)支持和理論依據(jù)，進(jìn)而提高中心質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室對(duì)血液標(biāo)本中細(xì)菌的檢出能力，提升相關(guān)工作人員的業(yè)務(wù)技能與水平。報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源與接收

2017年3月、6月、10月分別接收由CITIC項(xiàng)目組統(tǒng)一發(fā)放的血液成分細(xì)菌檢測(cè)室間質(zhì)評(píng)樣品(BTBS4310)各10份，共計(jì)30份。所有樣品均為商品化的標(biāo)準(zhǔn)菌株，凍干樣品，并配有用于復(fù)溶所需無(wú)菌檢測(cè)用水及無(wú)菌生理鹽水。接收標(biāo)本時(shí)，查看確認(rèn)標(biāo)本包裝完整，無(wú)破損；核對(duì)標(biāo)本種類(lèi)、數(shù)量、標(biāo)簽無(wú)誤，顏色狀態(tài)正常；查看無(wú)菌檢測(cè)用水及生理鹽水狀態(tài)、數(shù)量正確無(wú)誤。標(biāo)本的保存嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求執(zhí)行。

1.2 儀器與試劑

BacT/ALERT 3D全自動(dòng)細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng)(生物梅里埃公司)，BacT/ALERT 3D配套需氧培養(yǎng)瓶(BPA)，HR40-ⅡA2生物安全柜(山東青島海爾公司)，10 mL無(wú)菌注射器。

1.3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

在生物安全柜內(nèi)，用無(wú)菌注射器吸取2 mL無(wú)菌檢測(cè)用水充分溶解凍干樣品，隨后加入2 mL無(wú)菌生理鹽水稀釋并混勻樣品。用無(wú)菌注射器盡可能完全吸取配制好的菌液，并將其接種于需氧培養(yǎng)瓶中。待全部接種完畢后，將培養(yǎng)瓶裝載入BacT/ALERT 3D全自動(dòng)細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)系統(tǒng)中，37 ℃條件下培養(yǎng)168 h，觀察記錄出現(xiàn)反應(yīng)性信號(hào)的時(shí)間并通過(guò)Oneworld Accuracy System在線信息系統(tǒng)上報(bào)結(jié)果。

1.4 回報(bào)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析

根據(jù)菌種種類(lèi)、濃度的不同，使用Excel2007對(duì)三次室間質(zhì)評(píng)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理匯總，并與CITIC項(xiàng)目組提供的相同檢測(cè)設(shè)備同一分析組的均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差等進(jìn)行比較分析。

2 結(jié) 果

根據(jù)菌種種類(lèi)、菌液濃度的不同，2017年我室參與CITIC項(xiàng)目組血液成分細(xì)菌檢測(cè)室間質(zhì)評(píng)(BTBS4310)標(biāo)本共有18種樣品。我室上報(bào)陰性結(jié)果中，除常規(guī)無(wú)菌樣品外，另有2例參考結(jié)果為陽(yáng)性的樣品我室檢測(cè)結(jié)果為陰性，分別為10 cfu/mL的黑曲霉、30 cfu/mL的大腸埃希菌，兩份樣品均為CITIC項(xiàng)目組特別設(shè)置的教育型樣品(樣品濃度低不易檢出)。詳見(jiàn)表1。

表1 2017年血液成分細(xì)菌檢測(cè)室間質(zhì)評(píng)結(jié)果

由表1可知，與參考檢測(cè)時(shí)間均值相比，我室上報(bào)有反應(yīng)性信號(hào)的15種樣品中的1種(100 cfu/mL的金黃色葡萄球菌)與參考檢測(cè)時(shí)間均值相差在1%以?xún)?nèi)，7種樣品出現(xiàn)反應(yīng)性信號(hào)較早，其余7種出現(xiàn)反應(yīng)性時(shí)間晚于參考檢測(cè)時(shí)間均值。與在參考檢測(cè)時(shí)間范圍相比，15種有反應(yīng)性信號(hào)的樣品中，我室檢測(cè)的14種樣品均在參考范圍之內(nèi)，30 cfu/mL白色念珠菌檢出時(shí)間為35.52 h，超出參考檢測(cè)時(shí)間(30.46±2.35) h的范圍。15種樣品反應(yīng)性檢出時(shí)間分布情況見(jiàn)圖1。

3 討 論

近年來(lái)不斷有研究報(bào)道單采血小板制品有細(xì)菌檢出[3-5]，提示血液成分的細(xì)菌污染仍然是采供血機(jī)構(gòu)在質(zhì)量管理與控制方面不容忽視的重要問(wèn)題。CITIC開(kāi)展的血液成分細(xì)菌檢測(cè)能力驗(yàn)證項(xiàng)目與國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委臨床檢驗(yàn)中心組織的臨床微生物學(xué)室間質(zhì)評(píng)項(xiàng)目有所差別。該項(xiàng)目考慮采供血機(jī)構(gòu)血液制品無(wú)菌試驗(yàn)的特點(diǎn)，側(cè)重于測(cè)評(píng)細(xì)菌檢出的符合率[6]。旨在滿足對(duì)全國(guó)各采供血機(jī)構(gòu)質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室血液制品無(wú)菌試驗(yàn)抽檢的外部評(píng)價(jià)需求，確保血液成分細(xì)菌檢測(cè)系統(tǒng)的穩(wěn)定性和可靠性[7]。2017年CITIC項(xiàng)目組選取用于血液成分細(xì)菌檢測(cè)樣品的菌種分別為白色念珠菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、黑曲霉、枯草芽孢桿菌6種菌種。有研究表明單采血小板中可以檢測(cè)出大腸埃希菌[8-9]，而白色念珠菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、黑曲霉、枯草芽孢桿菌5種菌種則被認(rèn)為是驗(yàn)證無(wú)菌檢測(cè)所用培養(yǎng)基靈敏度的標(biāo)準(zhǔn)菌種[10]，因此選取這些菌種用于全自動(dòng)微生物檢測(cè)系統(tǒng)有效性的監(jiān)測(cè)具有代表性。

通過(guò)對(duì)2017年CITIC血液成分細(xì)菌檢測(cè)室間質(zhì)評(píng)結(jié)果的分析發(fā)現(xiàn)，我室對(duì)血液成分細(xì)菌檢測(cè)的能力尚可，但沒(méi)有完全具備檢出菌液濃度較低的教育型樣品的能力(三種教育型樣品中僅檢測(cè)出30 cfu/mL的銅綠假單胞菌)，該情況與全國(guó)絕大多數(shù)采供血機(jī)構(gòu)相似，提示我們應(yīng)進(jìn)一步分析原因持續(xù)改進(jìn)，并積極向先進(jìn)采供血機(jī)構(gòu)學(xué)習(xí)。通過(guò)參與該項(xiàng)室間質(zhì)評(píng)，也提示我室在日常無(wú)菌檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中，必須在從接收 標(biāo)本到結(jié)果錄入的全過(guò)程中嚴(yán)格規(guī)范操作，以避免因標(biāo)本質(zhì)量、操作不規(guī)范等問(wèn)題造成樣品的假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果。具體而言，接收標(biāo)本時(shí)要評(píng)估標(biāo)本的包裝、數(shù)量、顏色狀態(tài)等是否正常。收到樣本后應(yīng)盡量在當(dāng)天接種，如不能當(dāng)天接種應(yīng)將標(biāo)本存放于符合相應(yīng)溫度要求的存放空間；在接種過(guò)程中，要嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作，避免因污染造成假陽(yáng)性。在使用注射器吸取標(biāo)本時(shí)應(yīng)盡可能完全吸取菌液(操作過(guò)程中發(fā)現(xiàn)因樣品瓶中壓力問(wèn)題，較難全部吸出)，以免影響檢測(cè)結(jié)果。接種完成后裝載培養(yǎng)瓶應(yīng)盡可能在0.5 h內(nèi)完成，如果不能立刻放入，應(yīng)將培養(yǎng)瓶暫放于室溫環(huán)境，因?yàn)闇囟冗^(guò)高會(huì)使低產(chǎn)細(xì)菌的生長(zhǎng)錯(cuò)過(guò)對(duì)數(shù)期，而無(wú)法達(dá)到報(bào)告陽(yáng)性的閾值，從而導(dǎo)致假陰性結(jié)果。而溫度過(guò)低則會(huì)不利于對(duì)低溫敏感細(xì)菌的檢出[11]。此外結(jié)果錄入也應(yīng)引起注意，我室曾出現(xiàn)因工作人員疏忽導(dǎo)致結(jié)果錄入錯(cuò)誤的情況，隨后我室采取雙人核對(duì)的方法，加強(qiáng)結(jié)果核對(duì)工作，以避免此類(lèi)錯(cuò)誤的再次發(fā)生。

圖1 反應(yīng)性信號(hào)檢出時(shí)間分布

綜上所述，通過(guò)參加CITIC血液成分細(xì)菌檢測(cè)能力驗(yàn)證項(xiàng)目對(duì)我室細(xì)菌檢測(cè)能力進(jìn)行驗(yàn)證，不僅可對(duì)工作人員業(yè)務(wù)水平的提高起到積極推動(dòng)作用，也可促進(jìn)我們對(duì)日常細(xì)菌培養(yǎng)工作進(jìn)行不斷的反思與完善。