張紅石 馬天姝 祝恩智 (長春中醫(yī)藥大學創(chuàng)新實踐中心，吉林 長春 130017)

睡眠剝奪(SD)狀態(tài)勢必會嚴重影響員工的職業(yè)能力和職業(yè)壽命〔1～3〕。目前臨床上還沒有明確針對SD的調(diào)養(yǎng)方案。中藥酸棗仁有較好的促進睡眠、養(yǎng)心安神的效果，可以有效促進人體睡眠〔4，5〕。酸棗仁加鋅合劑可以有效改善SD后小鼠的學習記憶能力〔6～8〕，但缺乏基礎研究。下丘腦為人體多種生物調(diào)節(jié)節(jié)律中樞，星形膠質(zhì)細胞(AS)對其有明確的保護作用〔9〕。

AS廣泛分布于腦的各個部位。在丘腦，AS占整個膠質(zhì)細胞的30%～40%。AS參與了人體生物鐘的調(diào)節(jié)作用。目前AS分原漿性AS和纖維性AS。兩者雖然形態(tài)、分布不完全一樣，但功能上幾乎相同。本研究擬分析酸棗仁加鋅合劑對SD大鼠下丘腦AS細胞活性的影響。

1 材料與方法

1.1一般材料 清潔級10月齡Wistar大鼠50只，雌雄各半，體重(180±20)g，均購于維通利華(許可證號：SCXK(京)2011-0004)，實驗動物飼養(yǎng)于潔凈動物籠中，相對濕度50%～60%，溫度(22±3)℃，人工照明，食用標準飼料，自由飲水。試劑及儀器：改良Bielschowsky銀神經(jīng)染色試劑盒：Leagene Biotechnology CoDK0015.Ltd：試劑(A)Bielschowsky 硝酸銀溶液50 ml；試劑(B)：還原劑 250 ml；試劑(C)：Bielschowsky氨銀溶液50 ml；試劑(D)：氯化金溶液 50 ml；試劑(E)：海波溶液 50 ml。酸棗仁加鋅合劑組制備：按專利酸棗仁加鋅合劑專利配方進行制作。酶標儀：伯騰酶標儀BIOTek-SMAT;組織切片機：LEICA EG1150H；酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒:Rat GFAP ELISA KIT30024153。

1.2造模 水上站立法〔10〕造模。剝奪強度為24 h/d。將大鼠放入水深2～5 cm的塑料籠內(nèi)，每籠放5只大鼠，出現(xiàn)節(jié)律性垂頭觸水而覺醒，如此反復從而造成大鼠難以進入睡眠狀態(tài)導致SD。

1.3分組與給藥 按體重隨機分為空白組、模型組、陽性藥組、高劑量組、低劑量組，每組10只。模型組:連續(xù)7 d灌胃(清水)；陽性藥組：連續(xù)7 d灌胃葡萄糖酸鋅口服液；高劑量組：連續(xù)7 d灌胃高劑量的酸棗仁加鋅合劑；低劑量組：連續(xù)7 d灌胃低劑量的酸棗仁加鋅合劑；以上各組正常喂養(yǎng)，7 d后進行24 h SD。ELISA檢測血清膠原纖維酸性蛋白(GFAP)水平，并進行銀染。計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

1.4統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0軟件行t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1各組血清GFAP水平比較 空白組、陽性藥組、低劑量組及高劑量組GAFP水平(OD值：0.31±0.09、0.52±0.12、0.49±0.11、0.52±0.17)與模型組(0.37±0.11)差異有統(tǒng)計學意義(t=3.78、2.91、2.44、2.34、均P<0.05)。

2.2AS銀染 空白組下丘腦AS細胞排列整齊，細胞大小均勻，細胞間突觸連接較少。模型組細胞排列雜亂，細胞內(nèi)蛋白表達活躍，出現(xiàn)雜亂、新的突觸連接。陽性藥物組、低劑量組、高劑量組與模型組比較，細胞排列相對整齊，突觸連接較為規(guī)律，見圖1。

圖1 SD 24 h后大鼠AS銀染(×400)

3 討 論

SD機制研究較為少見，阻礙了其臨床應用〔11～13〕。神經(jīng)膠質(zhì)細胞數(shù)量是神經(jīng)元的10～50倍，在睡眠過程中，AS可以在谷氨酸誘導下以鈣離子依賴的胞吐方式釋放ATP，參與腦的能量代謝〔14,15〕。AS對睡眠-覺醒周期的維持及AS對睡眠能量代謝的作用，說明該細胞與睡眠存在較為密切的關(guān)系〔16〕。GFAP是AS的骨架蛋白，被公認為是AS的特征性標志物。

本研究表明，當實驗動物處于SD狀態(tài)時，AS開始發(fā)揮對神經(jīng)細胞的保護作用，活性開始升高，且藥物有提高AS活性的作用。進而對腦組織起到保護、支持、營養(yǎng)的作用。

中藥飲食調(diào)理是中醫(yī)“治未病”的重要體現(xiàn)，其不同于藥物治療和心理暗示，是將藥物融于食物，有效緩解疾病狀態(tài)的一種有效方法，目前針對性的基礎研究較為少見。本課題組發(fā)現(xiàn)酸棗仁加鋅合劑有較好的對抗SD狀態(tài)的作用，可以起到養(yǎng)心安神保護大腦各項功能的作用，減少SD帶來的腦組織損傷，其作用機制與AS活性密切相關(guān)。