宋凌元 趙亮亮 張成碩 趙巖 趙金良 筴金華 張艷紅 任炳琛

摘要： 分別在淡水（S0A0）、咸水（S10A0）和鹽、堿（NaHCO3）混合（S10A2、S10A4、S10A6）水體中，進行尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）鹽堿選育4代和對照組（非選育群體）魚種60 d養(yǎng)殖對比試驗，同時通過慢性鹽、堿脅迫試驗比較其鹽、堿耐受差異。結(jié)果顯示，淡水組日均增質(zhì)量顯著高于鹽、堿試驗組（P<0.05），各試驗組隨著堿度的增加，日均增質(zhì)量呈下降趨勢;在S10A0、S10A2、S10A4和S10A6試驗組中，選育4代日均增質(zhì)量顯著高于對照組（P<0.05）。慢性鹽、堿脅迫試驗中，選育4代半致死濃度分別為（55.730±1.34）、（16.31±1.37） g/L，顯著高于對照組[（46.47±1.64）、（12.27±1.08） g/L]（P<0.05）。研究結(jié)果為尼羅羅非魚鹽堿選育工作提供基礎數(shù)據(jù)和參考。

關鍵詞： 尼羅羅非魚;選育;鹽度;堿度;半致死濃度;日均增質(zhì)量

中圖分類號： S965.125? 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2020）05-0171-04

我國北方和沿黃地區(qū)有大片鹽堿水域，因其含有一定的鹽、堿成分，不利于常規(guī)淡水養(yǎng)殖品種生長[1]。因此，馴化選育鹽、堿耐受性較強的養(yǎng)殖品種，對鹽、堿水養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要的現(xiàn)實意義。尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）為廣鹽性魚類，對環(huán)境有較強的適應能力，是開展魚類鹽、堿選育的優(yōu)良材料[2-6]。本實驗室于2012年開始進行尼羅羅非魚耐鹽堿選育工作，首先對不同基礎群體鹽、堿耐受性和生長性能進行了比較分析[7-8]，隨后通過篩耐鹽、堿性狀優(yōu)良，生長快的個體進行羅非魚耐鹽堿選育。2013—2016年分別獲得鹽堿選育1代、2代和3代，評估表明，選育1代、2代和3代魚苗鹽、堿耐受性高于基礎群體，且隨選育世代增加呈上升趨勢;各選育世代生長性能較基礎群體也有提高，各世代生長性能呈上升趨勢[9-11]。本研究繼續(xù)評估尼羅羅非魚鹽堿選育4代（F4）鹽、堿養(yǎng)殖生長性能和鹽、堿的耐受性能，為尼羅羅非魚鹽堿選育提供基礎資料。

1 材料與方法

1.1 試驗魚

試驗魚為2017年7月繁殖的尼羅羅非鹽堿選育4代（F4）魚苗，經(jīng)馴化篩選、越冬培育后的1齡魚種。同時，從河北中捷羅非魚養(yǎng)殖有限公司挑選相同規(guī)格的未選育的尼羅羅非魚，作為對照組。

1.2 試驗用水

慢性鹽度試驗用水使用養(yǎng)殖場鹽鹵水（鹽度為32 g/L）與地下井水按比例混合調(diào)制，超過鹽鹵水鹽度上限時，添加海水晶調(diào)制。慢性堿度試驗用水使用在地下井水中按比例溶入碳酸氫鈉（NaHCO3）調(diào)制。

生長試驗用水調(diào)制，S0A0試驗組為直接使用地下井水，S10A0試驗組利用鹽鹵水和地下水混合配制，鹽、堿混合試驗組用水的配制是先用地下井水將NaHCO3溶解按比例配制成各堿度，然后將鹽度調(diào)整至10 g/L，配制完成后，曝氣2～3 d，取上清備用。

每天上午10：00測量1次，試驗用水溫度在 25 ℃ 左右，pH值穩(wěn)定在8.5左右，溶氧在5.5～7.8 g/L，各指標均處于尼羅羅非魚正常生長的耐受范圍內(nèi)。

1.3 試驗方法

慢性致死試驗在400 L的塑料桶中進行，每桶隨機放入15尾受試魚種，設置3個重復組。慢性鹽度試驗：從0鹽度開始，每天提高8 g/L鹽度直至受試魚種全部死亡為止;慢性堿度試驗：從0堿度開始，每天提高2 g/L堿度直至受試魚種全部死亡為止。試驗期間，每天定時（08：30、10：30、14：30）投喂羅非魚專用浮性顆粒飼料3次，定時利用虹吸法清理殘餌、糞便。每2天換水1/2，以減少對受試魚種的刺激，連續(xù)充氧，保證水中溶氧充足。每天檢查受試魚種的活動狀況，并記錄死亡數(shù)量。以魚體對外界刺激有無反應判斷其是否死亡[13]。

鹽、堿生長試驗在5 m×6 m×1 m水泥池中進行，首先對試驗魚和對照魚分別做剪左、右鰭條標記，然后進行鹽堿馴化，馴化過程參考趙麗慧等的方法[8]。每個養(yǎng)殖池中分別隨機放入80尾鹽堿選育4代魚種和80尾對照魚種。入池前，測量初始體質(zhì)量，試驗結(jié)束后測量終末體質(zhì)量，試驗時間為2018年6月20日至2018年8月18日。試驗期間，每天定時（08：30、10：30、14：30）、定量（約為體質(zhì)量5%）投喂羅非魚專用浮性顆粒飼料3次。根據(jù)水質(zhì)狀況，15、45 d時換水1/2，30 d時整體換水1次，換水后將鹽、堿提高至初始水平。增氧機僅在魚種進食期間關閉，其余時間均為開機狀態(tài)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

慢性馴化試驗結(jié)果分析，通過統(tǒng)計不同濃度下累計死亡率，并計算累計存活率，累計存活率=100%-累計死亡率。制作鹽度（堿度）-累計存活率曲線，推算鹽度（堿度）的半致死濃度。

日均增質(zhì)量=m2-m1 t;

體質(zhì)量變異系數(shù)=s m×100%。

式中：m1為初始體質(zhì)量（g），m2為終末體質(zhì)量（g），t為試驗天數(shù)，m[TX-*5]為平均體質(zhì)量，s為標準差。采用SPSS 22.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，以α=0.05作為差異顯著性水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 慢性鹽、堿致死試驗

隨著鹽、堿濃度的上升，試驗組和對照組的受試魚種出現(xiàn)活動異常表現(xiàn)。慢性鹽度試驗中，受試魚種表現(xiàn)為攝食量明顯下降（試驗組在鹽度為 32 g/L 時停止攝食，對照組在鹽度為24 g/L時停止攝食）、對外界刺激反應減緩，體表發(fā)黑，游動緩慢并逐漸沉入水底死亡;試驗組魚種在鹽度32 g/L時開始死亡，鹽度提高到88 g/L時全部死亡;對照組在鹽度16 g/L時開始死亡，當鹽度提高到80 g/L時全部死亡。選育4代（F4）鹽度半致死濃度為（55.930±1.34） g/L，對照組鹽度半致死濃度為（46.47±1.64） g/L（圖1）。慢性堿度試驗中，受試魚種表現(xiàn)為攝食量下降（試驗組在堿度為10 g/L時停止攝食，對照組在堿度為6 g/L時停止攝食），游動遲緩，最后沉入水底死亡;試驗組魚種在10 g/L堿度時開始死亡，24 g/L時全部死亡;對照組魚種在6 g/L時開始死亡，18 g/L時全部死亡。選育4代堿度半致死濃度為（16.31±1.37） g/L，對照組堿度半致死濃度為（12.27±1.08） g/L（圖2）。

2.2 生長試驗

淡水組、S10A0、S10A2、S10A4和S10A6試驗組中，選育4代和對照組魚種日均增質(zhì)量、成活率、體質(zhì)量變異系數(shù)見表1。除S10A6組外，各試驗組中選育4代均無死亡情況出現(xiàn)，對照組在S10A4和S10A6試驗組中均出現(xiàn)死亡情況。淡水組中，選育4代和對照組的日均增質(zhì)量顯著差異（P>0.05），其余各試驗組中，選育4代的日均增質(zhì)量顯著高于對照組（P<0.05）。隨著鹽度、堿度的增加，選育4代的日均增質(zhì)量顯著下降（P<0.05）（圖3）。

3 討論

本研究中采用慢性脅迫方法評估了選育4代魚種的鹽堿耐受性能，結(jié)果表明選育4代慢性鹽、堿耐受性能顯著高于對照組（P<0.05），說明鹽、堿選育尼羅羅非魚的鹽堿耐受性高于未選育群體。研究表明，不同規(guī)格的尼羅羅非魚對鹽、堿的耐受力不同[14-15]。前期對各選育世代魚苗進行的急性鹽、堿脅迫試驗結(jié)果表明，選育各世代鹽、堿耐受性能呈上升趨勢，同時選育前期鹽、堿耐受性提升較為明顯，選育后期鹽、堿耐受性提升較為緩慢[9，16-17]。筆者推測，選育尼羅羅非魚對鹽、堿的耐受性可能接近機體調(diào)節(jié)的極限。由于各選育世代慢性鹽、堿脅迫試驗用魚存在規(guī)格差異，各世代間慢性鹽、堿耐受性存在一定差異，但大致呈上升的趨勢[9-11]。綜合來看，鹽、堿選育4代尼羅羅非魚對鹽、堿的耐受性能得到了提升。

[CM（20]在鹽堿水環(huán)境下，水生動物機體為適應環(huán)境變 化，不僅需要消耗大量的能量，還會對其攝食水平、飼料轉(zhuǎn)化率等指標產(chǎn)生影響，進而使其生長受到抑制[18-20]。本研究中，S10A2、S10A4和S10A6試驗組中，尼羅羅非魚日均增質(zhì)量均顯著低于淡水組（P<0.05），同時，各試驗組隨著堿度的升高日均增質(zhì)量呈下降的趨勢。由于各世代生長試驗所用魚種的規(guī)格差異較大，不能對各世代日均增重直接進行比較。為此，筆者將選育1代、2代、3代和4代各世代中S10A0、S10A2、S10A4和S10A64個試驗組日均增質(zhì)量加和，之后歸“1”，比較各選育世代在不同鹽、堿處理下相對增質(zhì)量比例。在S10A4試驗組中，選育1代、2代、3代和4代相對增質(zhì)量分別為 19.9%～22.4%、21.7%、21.7%和22.6%;S10A6試驗組中，分別為13.3%～14.9%、13.9%、19.6%和22.3%[9-11]。由此可知，鹽堿選育4代尼羅羅非魚較選育1代、2代和3代有所提升。

研究表明，鹽、堿對魚類的致毒效應有協(xié)同影響[21]。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著堿度的提高，尼羅羅非魚的生長抑制效應越大，可能是由于鹽、堿協(xié)同作用，增大了脅迫效應，而且隨著堿度升高協(xié)同作用越明顯，脅迫效力越高，對尼羅羅非魚生長抑制的影響越大。

參考文獻：

[1]梁利群，任 波，常玉梅，等. 中國內(nèi)陸咸（鹽堿）水資源及漁業(yè)綜合開發(fā)利用[J]. 中國漁業(yè)經(jīng)濟，2013，31（4）：138-145.

[2]史為良. 我國某些魚類對達里湖碳酸鹽型半咸水的適應能力[J]. 水生生物學集刊，2005，7（3）：359-369.

[3]Lemarié G，Baroiller J F，Clota F，et al. A simple test to estimate the salinity resistance of fish with specific application to O. niloticus and S. melanotheron[J]. Aquaculture，2004，240（1/2/3/4）：575-587.

[4]Al-Amoundi M M. Acclimation of commercially cultured Oreochromis species to sea water：an experimental study[J]. Aquaculture，1987，65（3）：333-342.

[5]趙 巖，吳俊偉，孟 森，等. 碳酸鹽堿度脅迫對尼羅羅非魚血清pH、游離氨濃度及相關基因表達的影響[J]. 南方農(nóng)業(yè)學報，2016，47（6）：1032-1038.

[6]么宗利，王 慧. 羅非魚咸水養(yǎng)殖研究進展[J]. 海洋漁業(yè)，2006，28（3）：251-256.

[7]趙麗慧，筴金華，張艷紅，等. 不同鹽、堿度下3品系尼羅羅非魚幼魚網(wǎng)箱養(yǎng)殖的生長比較[J]. 南方水產(chǎn)科學，2013，9（4）：1-7.

[8]趙麗慧，筴金華，張艷紅，等. 3種品系尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）鹽堿耐受性和生長比較[J]. 漁業(yè)科學進展，2014，35（5）：26-32.

[9]梁從飛，筴金華，張艷紅，等. 尼羅羅非魚選育一代耐鹽堿和生長性能評估[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學，2015，42（9）：115-119.

[10]吳俊偉，涂翰卿，筴金華，等. 尼羅羅非魚選育二代鹽堿耐受性和生長研究[J]. 水產(chǎn)學雜志，2016，29（3）：30-34.

[11]涂翰卿，筴金華，張艷紅，等. 尼羅羅非魚鹽堿選育三代鹽堿耐受及生長性能研究[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學，2017，44（2）：154-159. [HJ2.3mm]

[12]么宗利，李思發(fā)，李學軍，等. 尼羅羅非魚和以色列紅羅非魚耐鹽馴化初步報告[J]. 上海水產(chǎn)大學學報，2003，12（2）：97-101.

[13]范武江，李思發(fā)，孟慶輝，等. 4種遺傳型羅非魚的耐鹽慢性馴化表現(xiàn)[J]. 中國水產(chǎn)科學，2012，19（3）：430-435.

[14]Watanabe W O，Kuo C M，Huang M C. Salinity tolerance of Nile tilapia fry（Oreochromis niloticus），spawned and hatched at various salinities[J]. Aquaculture，1985，48（2）：159-176.

[15]Breves J P，Hasegawa S，Yoshioka M，et al. Acute salinity challenges in Mozambique and Nile tilapia：differential responses of plasma prolactin，growth hormone and branchial expression of ion transporters[J]. General and Comparative Endocrinology，2010，167（1）：135-142.

[16]梁從飛，趙麗慧，筴金華，等. 尼羅羅非魚基礎群體與選育一代幼魚鹽堿度耐受性比較[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2014，42（8）：227-231.

[17]吳俊偉，梁從飛，筴金華，等. 尼羅羅非魚鹽堿選育二代幼魚耐受性研究[J]. 河北漁業(yè)，2015，7（7）：11-13.

[18]孫雪梅，陳碧鵑，高 萍，等. 高鹽脅迫對黃河口四角蛤蜊攝食與生長的影響[J]. 漁業(yè)科學進展，2012，33（5）：85-90.

[19]胡 煒，李成林，趙 斌，等. 低鹽脅迫對刺參存活、攝食和生長的影響[J]. 漁業(yè)科學進展，2012，33（2）：92-96.

[20]de Bravo M I S. Influence of salinity on the physiological conditions in mussels，Perna perna and Perna viridis （Bivalvia：Mytilidae）[J]. Revista de Biologia Tropical，2003，51（Suppl 4）：153-158.

[21]鄭偉剛，張兆琪，張美昭. 澎澤鯽幼魚對鹽度和堿度耐受性的研究[J]. 集美大學學報（自然科學版），2004，9（2）：127-130.

收 稿日期：2019-01-27

基金項目：國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設專項（編號：CARS-46）。

作者簡介：宋凌元（1993—），男，遼寧丹東人，碩士研究生，從事魚類遺傳育種和繁殖研究。E-mail：786785555@qq.com。

通信作者：趙金良，博士，教授，從事水產(chǎn)動物遺傳與育種研究。E-mail：jlzhao@shou.edu.cn。