羅群　蒲清榮　任桂林　李五生　黃銳

摘要：目的?研究建立腸炎灌腸液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為生產(chǎn)質(zhì)量提供保障。方法?采用薄層色譜法對(duì)腸炎灌腸液中白頭翁、秦皮、黃連、木香、當(dāng)歸進(jìn)行TLC鑒別;采用HPLC法測(cè)定腸炎灌腸液中鹽酸小檗堿的含量。結(jié)果?薄層色譜斑點(diǎn)清晰、分離度效果較好、且陰性無(wú)干擾;HPLC法測(cè)定腸炎灌腸液中鹽酸小檗堿的含量穩(wěn)定、可靠，且陰性無(wú)干擾。結(jié)論?該方法準(zhǔn)確可靠、專(zhuān)屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，可作為腸炎灌腸液質(zhì)量控制的有效方法。

關(guān)鍵詞：腸炎灌腸液;薄層色譜法;高效液相色譜法;鹽酸小檗堿

中圖分類(lèi)號(hào)：R927.11?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?文章編號(hào)：1007-2349（2020）03-0079-04

腸炎灌腸液是是以白頭翁湯為基礎(chǔ)，反復(fù)優(yōu)化而成，具有清熱解毒，涼血止痢，行氣止痛的功效，適用于濕熱內(nèi)蘊(yùn)型結(jié)腸病，癥見(jiàn)腹瀉、腹痛、黏液血便、里急后重、便秘等。該方由白頭翁、黃柏、酒黃連、秦皮、當(dāng)歸、木香等8味中藥組成，具有多年臨床使用經(jīng)驗(yàn)，療效確切。

方中君藥白頭翁能明顯改善潰瘍性胃腸炎的創(chuàng)面潰瘍程度，能夠緩解里急后重、腹痛等癥狀[1]。故對(duì)白頭翁進(jìn)行薄層鑒別。方中黃連的有效成分為小檗堿及黃連素，其主要藥理作用有抗病原體、抗菌、抗腹瀉、抗炎等[2];黃柏主要含有小檗堿、藥根堿、木蘭堿、黃柏堿等成分，其主要具有抗菌、抗?jié)?、提高免疫力、降血糖、降壓、抗氧化等藥理作用[3]。黃連、黃柏均含有小檗堿成分，而鹽酸小檗堿對(duì)痢疾桿菌、大腸桿菌、肺炎雙球菌、金葡菌、鏈球菌、傷寒桿菌及阿米巴原蟲(chóng)均有抑制作用[4]，且處方用量大，因此鹽酸小檗堿含量直接關(guān)系到制劑的有效成分含量和藥物治療效果。故重點(diǎn)對(duì)該制劑中鹽酸小檗堿的采用HPLC進(jìn)行含量測(cè)定，并同時(shí)對(duì)秦皮、當(dāng)歸、木香、黃連藥材進(jìn)行薄層鑒別，以期能夠全面掌握其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1?儀器與材料

1.1?實(shí)驗(yàn)材料?鹽酸小檗堿（批號(hào)：110713-201212）、白頭翁對(duì)照藥材（批號(hào)：121615-201302）、秦皮乙素（批號(hào)：110741-200506）、秦皮對(duì)照藥材（批號(hào)：121415-200702）、木香對(duì)照藥材（批號(hào)：120921-201309）、當(dāng)歸對(duì)照藥材（批號(hào)：120927-201315）、黃柏對(duì)照藥材（批號(hào)：121510-201105）、黃連對(duì)照藥材（批號(hào)：120913-201310），均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供;去氫木香內(nèi)酯（批號(hào)：MUST-11083101），由由成都曼思特生物科技有限公司提供;乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。

1.2?實(shí)驗(yàn)儀器?LC-20A高效液相色譜儀（日本島津）;SPD-20A紫外可見(jiàn)檢測(cè)器LCsolution色譜工作站;UltimateTM?C18鍵合硅膠柱（4.6?mm×250?mm，5?μm）;JPCT0328超聲波提取器（武漢嘉鵬電子有限公司）;JA203H電子天平（常州市幸運(yùn)電子設(shè)備有限公司）;AUW120D電子天平（日本島津）GOODLOOK-LOOK型薄層色譜成像系統(tǒng)（上?？普苌萍加邢薰荆?HH數(shù)顯電熱恒溫水浴箱（江蘇金壇市金城國(guó)勝實(shí)驗(yàn)儀器廠）。

2?方法與結(jié)果

2.1?TLC鑒別

2.1.1?腸炎灌腸液中白頭翁的薄層色譜鑒別?取本品20?mL，用正丁醇振搖提取2次，每次30?mL，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状??mL使溶解，作為供試品溶液。另取白頭翁對(duì)照藥材1?g，加甲醇10?mL，超聲處理30?min，濾過(guò)，取濾液作為對(duì)照藥材溶液。除白頭翁外，其余藥材按照腸炎灌腸液制備方法，制備方式同供試品溶液，作為陰性對(duì)照。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2015版四部通則0502）試驗(yàn)，吸取供試品溶液3～4?μL，對(duì)照藥材溶液5?μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G?薄層板上，以正丁醇-醋酸-水（4：1：2）上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性樣品無(wú)干擾[5-6]，見(jiàn)圖1。

圖1?腸炎灌腸液白頭翁薄層色譜圖

1.白頭翁對(duì)照藥材;2～4.供試品;5.陰性樣品

2.1.2?腸炎灌腸液中秦皮的薄層色譜鑒別?取本品20?mL，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次20?mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状??mL使溶解，作為供試品溶液。另取秦皮對(duì)照藥材1?g，加甲醇10?mL，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至1?mL，作為對(duì)照藥材溶液。另取秦皮乙素對(duì)照品，加甲醇制成每1?mL含1?mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方（除秦皮藥材外）與制法，制成陰性對(duì)照樣品，其余處理同供試品溶液，作為陰性樣品溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2015版四部通則0502）試驗(yàn)，吸取上述溶液各10?μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5：3：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365?nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且陰性樣品無(wú)干擾[7]，見(jiàn)圖2。

圖2?腸炎灌腸液秦皮薄層色譜圖

（1.秦皮對(duì)照藥材;2.秦皮乙素;3～5.供試品;6.陰性樣品）

2.1.3?腸炎灌腸液中木香的薄層色譜鑒別?取本品50?mL，用三氯甲烷振搖提取2次，每次50?mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)蛹状??mL使溶解，作為供試品溶液。另取木香對(duì)照藥材1?g，加甲醇10?mL，超聲處理30?min，濾過(guò)，濾液濃縮至1?mL，作為對(duì)照藥材溶液。另取去氫木香內(nèi)酯，加甲醇制成每1?mL含1?mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方（除木香藥材外）與制法，制成陰性對(duì)照樣品，其余處理同供試品溶液，作為陰性樣品溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2015版四部通則0502）試驗(yàn)，吸取上述溶液各10?μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮（10：3）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在105℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性樣品無(wú)干擾[8-9]，見(jiàn)圖3。