任建娟，唐牟尼，陳曉瑩，傅正闖

（1.浙江蕭山醫(yī)院 精神衛(wèi)生中心，浙江 杭州 311200；2.廣州市惠愛(ài)醫(yī)院 老年科，廣東 廣州510370；3.惠州市中心人民醫(yī)院 心理精神科，廣東 惠州 516008）

強(qiáng)迫癥（obsessive-compulsive disorder，OCD）是一類(lèi)常見(jiàn)的精神疾病，其發(fā)病機(jī)制不明，具有高致殘性。鑒于對(duì)疾病早期發(fā)現(xiàn)和有效治療的需求，病因研究越發(fā)受到重視。最新的研究表明神經(jīng)遞質(zhì)之一的谷氨酸可能參與OCD的病理生理機(jī)制改變。MRI研究提示OCD患者的皮質(zhì)-紋狀體-丘腦-皮層回路谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)異常[1]。CHAKRABARTY等[2]研究發(fā)現(xiàn)OCD患者腦脊液中谷氨酸水平較健康受試者升高，同時(shí)藥理學(xué)研究表明抗谷氨酸能劑，如利魯唑或美金剛，可能有助于減小強(qiáng)迫癥狀的嚴(yán)重程度[3-4]。基于以上研究，我們認(rèn)為與谷氨酸神經(jīng)遞質(zhì)相關(guān)的基因可能是OCD的遺傳基礎(chǔ)。

谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體（SLC1A1）基因編碼谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體EAAC-1，該轉(zhuǎn)運(yùn)體在大腦中通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞外谷氨酸水平影響谷氨酸能的神經(jīng)傳遞[5-6]。人類(lèi)全基因組掃描，也提示SLC1A1基因可能是OCD的易感基因[7]。在既往關(guān)于SLC1A1和OCD關(guān)系的研究中結(jié)論并不完全一致，有研究指出SLC1A1基因的單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）和OCD之間存在正相關(guān)[8-11]，部分研究指出致病系多個(gè)SNP位點(diǎn)組成的單倍體，而非單獨(dú)的SNP[12-13]，還有的研究認(rèn)為該基因與OCD無(wú)顯著相關(guān)[14]。本研究選擇了SLC1A1基因的3個(gè)位點(diǎn)（rs301430、rs301434、rs301979）進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè)，探討SLC1A1基因在中國(guó)漢族人群中的分布，以及與OCD發(fā)病可能相關(guān)的單倍體，以進(jìn)一步了解該疾病。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 OCD組：2010年5月至2014年12月在廣州市惠愛(ài)醫(yī)院門(mén)診及住院治療的患者。入組標(biāo)準(zhǔn)：符合美國(guó)《精神疾病診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)第4版》（DSMIV）強(qiáng)迫障礙的診斷標(biāo)準(zhǔn)；無(wú)合并其他精神疾?。粷h族；年齡、性別不限。共入組125例，其中男85例，女40例。年齡13～68（28.1±11.0）歲。對(duì)照組：系本院職工及健康體檢者，無(wú)精神疾病史，兩系三代無(wú)精神疾病家族史。入組125例，其中男88例，女37例，年齡16～60（29.9±9.0）歲。OCD組與對(duì)照組在性別和年齡上比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.169，P=0.681；t=-1.352，P=0.178）。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象（未成年人由監(jiān)護(hù)人代簽）均簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 DNA的提?。喝∈軝z者清晨空腹血5 mL，使用Wizard基因組DNA純化試劑盒提取外周血白細(xì)胞基因組DNA。

1.2.2 基因多態(tài)性檢測(cè)：采用美國(guó)Sequenom公司的MassARRAY質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)完成。實(shí)驗(yàn)步驟包括PCR擴(kuò)增、除PCR過(guò)程多余dNTP、單堿基延伸、產(chǎn)物純化、點(diǎn)樣、檢測(cè)、Typer軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果、獲得分型數(shù)據(jù)等。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 用SPSS22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料采用表示，組間的計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料比較使用t檢驗(yàn)?；蝾l率使用基因計(jì)數(shù)法，采用Hardy-Weinberg平衡定律進(jìn)行吻合度檢驗(yàn)；用logistic回歸分析基因型及等位基因和OCD患病風(fēng)險(xiǎn)。采用SHEsis軟件[15]進(jìn)行單倍體分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 OCD組和對(duì)照組H-W平衡吻合度檢驗(yàn) 本研究的3個(gè)檢測(cè)位點(diǎn)中，OCD組和對(duì)照組各有2例共4個(gè)SNP檢測(cè)失效，無(wú)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。經(jīng)檢出的位點(diǎn)進(jìn)行吻合度檢驗(yàn)，OCD組和正常組的基因型分布均符合H-W平衡定律（P＞0.05）。

2.2 OCD組和對(duì)照組SLC1A1基因SNP位點(diǎn)的比較 從表1發(fā)現(xiàn)SLC1A1基因rs301430、rs301434、rs301979位點(diǎn)的基因型頻率和等位基因頻率分布在OCD組和對(duì)照組間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。進(jìn)行性別分層分析后，女性人群中rs301979位點(diǎn)的基因型頻率和等位基因頻率分布在OCD組和對(duì)照組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.875，P=0.019；χ2=7.331，P=0.007），而男性人群中該3個(gè)位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率分布在2組中的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。Logistic回歸分析顯示，女性患者rs301979位點(diǎn)C等位基因頻率明顯低于對(duì)照組，C/G的OR（95%CI）為0.293（0.116～0.737）。表2所示為SLC1A1基因3個(gè)位點(diǎn)形成的單倍體分析，可見(jiàn)T-A-G單倍體頻率分布在OCD組和對(duì)照組間存差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.206，P=0.013），該單倍體型的個(gè)體OR（95%CI）為2.398（1.184～4.855）。

3 討論

遺傳流行病學(xué)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，OCD是一類(lèi)由遺傳及環(huán)境等生物學(xué)因素共同作用所導(dǎo)致的復(fù)雜疾病[16]。盡管目前該疾病的特定致病基因和潛在遺傳變異還沒(méi)得到最終確認(rèn)，但相關(guān)研究提示SLC1A1基因可能是OCD的潛在致病基因。

全基因組研究發(fā)現(xiàn)9p24區(qū)域存在和OCD有關(guān)的聯(lián)動(dòng)峰，而位于該區(qū)域的SLC1A1基因在2001年首次被提及作為OCD的候選基因[17]。隨后，HANNA等[18]指出SLC1A1基因可能是OCD的保護(hù)基因。ARNOLD等[8]發(fā)現(xiàn)在SLC1A1基因的rs301434、rs301435、rs3087879位點(diǎn)的變異與OCD相關(guān)，且其組成的單體模塊標(biāo)記只在男性先證者的家庭中存在過(guò)度傳遞現(xiàn)象。但是并非所有的研究都有陽(yáng)性發(fā)現(xiàn)。SAMUELS等[11]對(duì)SLC1A1基因及其附近的111個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行家系研究，發(fā)現(xiàn)雖有部分位點(diǎn)或單倍體顯示與OCD存在相關(guān)，但通過(guò)多重驗(yàn)證比較后發(fā)現(xiàn)這些關(guān)聯(lián)并不突出。在一項(xiàng)有306例OCD患者和634例正常對(duì)照組的薈萃分析報(bào)告SLC1A1基因的9個(gè)位點(diǎn)和OCD并無(wú)顯著相關(guān)[14]。KIM等[19]針對(duì)韓國(guó)人群進(jìn)行的研究也未發(fā)現(xiàn)SLC1A1基因與OCD發(fā)病相關(guān)的遺傳變異。國(guó)內(nèi)兩項(xiàng)研究分別對(duì)rs301430、rs3780412和rs3087879進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)該3個(gè)位點(diǎn)與中國(guó)漢族人群OCD的發(fā)生無(wú)顯著相關(guān)[20-21]。本研究中我們發(fā)現(xiàn)rs301430、rs301434位點(diǎn)的基因多態(tài)性與OCD無(wú)關(guān)，僅有rs301979位點(diǎn)在女性O(shè)CD患者和對(duì)照組中的基因型、等位基因頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并提示C等位基因可能是女性患病的保護(hù)因素。我們的研究部分重復(fù)以往的研究結(jié)論，造成這種結(jié)果差異的原因考慮有以下幾方面：首先是種族差異導(dǎo)致等位基因頻率差異明顯；其次采用的研究方法不一致，國(guó)外研究多采用家系研究，而本研究系病例對(duì)照研究；再者，OCD潛在的遺傳異質(zhì)性亦可能引起研究結(jié)果的不一致。

表1 OCD組和對(duì)照組SLC1A1基因各SNP位點(diǎn)的基因型和等位基因的比較

表2 OCD組和對(duì)照組的rs301430、rs301434、rs301979單倍體型分析比較

OCD發(fā)病因素中單倍體型可能有著重要影響。既往研究中DICKEL等[9]發(fā)現(xiàn)rs301430、rs301979的T-C型與OCD發(fā)病相關(guān)，尤其在男性患者中。STEWART等[12]的研究顯示rs12682807、rs20722657、rs301430的A-T-T單倍體與OCD存在顯著相關(guān)。WU等[13]在對(duì)中國(guó)漢族人群的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)rs10491734、rs2228622、rs301430、rs301443的A-A-C-C與A-GC-C引起早發(fā)性O(shè)CD的發(fā)生。本研究中我們發(fā)現(xiàn)rs301430、rs301434、rs301979的T-A-G單倍體在OCD患者和對(duì)照組間的差異有顯著性，提示擁有該單倍體的個(gè)體罹患OCD的風(fēng)險(xiǎn)增加1～4倍。

OCD是一類(lèi)復(fù)雜的多基因相互作用的精神疾病，不同亞型可能存在不同的致病基因型。本研究發(fā)現(xiàn)了與女性O(shè)CD發(fā)病相關(guān)的基因位點(diǎn)，這在以往的研究中并未見(jiàn)被提及；但由于本研究中女性患者的樣本量相對(duì)較小，該結(jié)論仍有待擴(kuò)大樣本量后作進(jìn)一步驗(yàn)證。無(wú)論如何，本研究證實(shí)了SLC1A1基因包含了OCD的致病易感基因，未來(lái)希望能通過(guò)技術(shù)的進(jìn)步，研究方法的改善，以及多中心大樣本的調(diào)查去明確OCD的發(fā)病原因和機(jī)制。