盧明艷 王強(qiáng) 閆興凱 武春昊 劉明鶴 張茂君

摘 要：以秋子梨污染組培苗為材料，研究“山農(nóng)一號(hào)”殺菌劑對(duì)秋子梨污染組培苗抑菌效果和生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明：“山農(nóng)一號(hào)”Ⅰ型和Ⅲ型殺菌劑配合使用對(duì)污染組培苗有顯著的抑菌效果，能有效地挽救污染組培苗，組培苗的恢復(fù)率達(dá)70%以上;增加組培苗鮮重和株高;提高增殖倍數(shù)，增殖倍數(shù)在1～3倍。

關(guān)鍵詞：秋子梨;“山農(nóng)一號(hào)”殺菌劑;污染組培苗;抑菌;恢復(fù)率

中圖分類號(hào)：S-3

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20200415002

收稿日期：2020-03-23

基金項(xiàng)目：農(nóng)業(yè)部園藝作物種質(zhì)資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金資助課題“梨耐鹽堿砧木工廠化育苗體系建立”（項(xiàng)目編號(hào)：NYZS2018-1-1）

作者簡(jiǎn)介：盧明艷（1978-），女，碩士，副研究員。研究方向：秋子梨品種選育及栽培技術(shù);通訊作者張茂君，博士，研究員。研究方向：秋子梨品種選育及栽培技術(shù)。

組織培養(yǎng)技術(shù)由于繁殖系數(shù)高，短時(shí)間內(nèi)能夠獲得大量?jī)?yōu)質(zhì)苗木，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于植物繁育中。近年來(lái)，隨著組織培養(yǎng)技術(shù)的成熟，已逐漸形成工廠化育苗，為苗木市場(chǎng)的規(guī)范化、優(yōu)質(zhì)化提供了保障。但同時(shí)也存在著一些技術(shù)瓶頸，如玻璃化、污染等。其中污染是組織培養(yǎng)過程中最容易出現(xiàn)的問題，貫穿于各個(gè)組織培養(yǎng)環(huán)節(jié)。引起污染的原因復(fù)雜，涉及技術(shù)、人員、培養(yǎng)材料、內(nèi)外環(huán)境等諸多因素，是制約組織培養(yǎng)發(fā)展的一個(gè)難題，也是亟待解決的問題[1]。利用殺菌劑對(duì)組織培養(yǎng)過程中的各種菌類污染的防治在馬鈴薯[2-5]、黃槐[6]、鳶尾[7]等許多植物上都有研究，果樹在香蕉[8]、枸杞[9]、核桃[10]、葡萄[11]上也有報(bào)道，但在梨上還未見相關(guān)報(bào)道。

“山農(nóng)一號(hào)”是一種廣譜生物滅菌劑，能夠殺死各種細(xì)菌和真菌細(xì)胞，阻止孢子萌發(fā)，在較高濃度下，能夠消除外植體的內(nèi)生菌污染。其活性成分能夠穿透菌類細(xì)胞壁，抑制部分參與主要新陳代謝循環(huán)的酶類活性，抑制檸檬酸循環(huán)和電子傳遞等，同時(shí)也能夠阻斷一些單糖和氨基酸從培養(yǎng)基到菌類細(xì)胞的運(yùn)轉(zhuǎn)，從而達(dá)到殺菌作用。并且其耐高壓滅菌，能與抗生素類配合使用。

試驗(yàn)利用“山農(nóng)一號(hào)”生物殺菌劑對(duì)秋子梨污染組培苗進(jìn)行抑菌效果研究，旨在解決組織培養(yǎng)過程中高污染發(fā)生的問題，同時(shí)就殺菌劑對(duì)組培苗生長(zhǎng)的影響進(jìn)行調(diào)查研究，為梨組織培養(yǎng)污染的治理提供參考。

1?材料與方法

1.1?試驗(yàn)材料

供試材料為秋子梨污染組培苗。根據(jù)組培瓶?jī)?nèi)菌落情況將污染分為嚴(yán)重（菌落面積較大，見圖1A）和較輕（菌落點(diǎn)狀，零星分布，圖1B）2種。

“山農(nóng)一號(hào)”殺菌劑購(gòu)自山東智科生物科技有限公司?！吧睫r(nóng)一號(hào)”Ⅰ型殺菌劑是外植體劑型殺菌劑，殺菌能力強(qiáng)，滲透性強(qiáng)，主要用于外植體消毒?！吧睫r(nóng)一號(hào)”Ⅲ型殺菌劑是共生菌專用劑型，更偏重于抑菌效果，對(duì)內(nèi)生菌污染的防治更為有效。依據(jù)說明書，試驗(yàn)中Ⅰ型和Ⅲ型殺菌劑配合使用。

1.2?試驗(yàn)設(shè)計(jì)

先將“山農(nóng)一號(hào)”Ⅰ型殺菌劑用1/4MS無(wú)機(jī)鹽溶液配成5%溶液，裝于瓶?jī)?nèi)，保存于4℃冰箱中，用于浸泡污染的組培苗，浸泡方式為全株浸泡。

1.2.1?“山農(nóng)一號(hào)”殺菌劑對(duì)不同污染程度秋子梨組培苗的抑菌效果

將不同污染程度組培苗剪去基部后，分別浸泡于5%“山農(nóng)一號(hào)”Ⅰ型殺菌劑溶液中2h，然后接種于含0.1%“山農(nóng)一號(hào)”Ⅲ型殺菌劑的增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。以無(wú)污染為對(duì)照，對(duì)照不處理。每瓶接種3株，共接種10瓶，40d后調(diào)查各項(xiàng)指標(biāo)。

1.2.2?“山農(nóng)一號(hào)”殺菌劑不同滅菌時(shí)間對(duì)秋子梨污染組培苗抑菌效果

將污染較輕的秋子梨組培苗剪去基部后用5%“山農(nóng)一號(hào)”Ⅰ型殺菌劑分別浸泡0.5h、1.0h、1.5h、2.0h。然后接種在含0.1%“山農(nóng)一號(hào)”Ⅲ型殺菌劑的增殖培養(yǎng)基上。每瓶接種3株，共接種10瓶，40d后調(diào)查各項(xiàng)指標(biāo)。

1.2.3?不同濃度“山農(nóng)一號(hào)”殺菌劑對(duì)秋子梨污染組培苗抑菌效果

將污染嚴(yán)重的秋子梨組培苗剪去基部后用5%“山農(nóng)一號(hào)”Ⅰ型殺菌劑浸泡2h后，接種在添加不同濃度“山農(nóng)一號(hào)”Ⅲ型殺菌劑增殖培養(yǎng)基上，濃度分別為0.1%、0.15%、0.2%。每瓶接種3株，共接種10瓶，40d后調(diào)查各項(xiàng)指標(biāo)。

1.3?調(diào)查指標(biāo)

經(jīng)“山農(nóng)一號(hào)”殺菌劑浸泡滅菌后會(huì)導(dǎo)致組培苗褐化，褐化的組培苗4～6周后會(huì)發(fā)出新芽，因此試驗(yàn)用恢復(fù)率表示組培苗恢復(fù)正常生長(zhǎng)的指標(biāo)。

主要調(diào)查指標(biāo)有恢復(fù)率、增殖倍數(shù)、鮮重和株高。

恢復(fù)率（%）=恢復(fù)生長(zhǎng)株數(shù)接種株數(shù)×100

增殖倍數(shù)=增殖后株數(shù)接種株數(shù)

1.4?數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)采用EXCEL軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析。

2?結(jié)果與分析

2.1?“山農(nóng)一號(hào)”殺菌劑對(duì)不同污染程度秋子梨組培苗的抑菌效果

試驗(yàn)結(jié)果如表1所示，經(jīng)5%“山農(nóng)一號(hào)”Ⅰ型殺菌劑浸泡滅菌2h后，組培苗的增殖倍數(shù)、鮮重和株高都較對(duì)照提高，污染嚴(yán)重的分別提高28.5%、27.3%和23.1%;污染較輕的分別提高35.7%、72.7%和100.0%。污染較輕的組培苗恢復(fù)率達(dá)到100%，污染嚴(yán)重的恢復(fù)率也能達(dá)到77%。說明“山農(nóng)一號(hào)”殺菌劑對(duì)污染的秋子梨組培苗有較好的抑菌作用，尤其對(duì)污染程度較輕的組培苗有明顯的挽救效果，同時(shí)能夠提高增殖倍數(shù)，促進(jìn)組培苗的生長(zhǎng)。

2.2?“山農(nóng)一號(hào)”殺菌劑不同滅菌時(shí)間對(duì)秋子梨污染組培苗抑菌效果

同一濃度下對(duì)污染較輕的秋子梨組培苗進(jìn)行不同滅菌時(shí)間處理，結(jié)果如表2所示。各處理的組培苗恢復(fù)率都較高，達(dá)到86%以上，增殖倍數(shù)除2.0h外，都達(dá)到3.5倍以上，處理時(shí)間1.0h組培苗的鮮重最高，處理時(shí)間2.0h組培苗的株高最高。其中，經(jīng)5%“山農(nóng)一號(hào)”Ⅰ型殺菌劑浸泡1.0h，再接種在含0.1%“山農(nóng)一號(hào)”Ⅲ型殺菌劑的增殖培養(yǎng)基上，對(duì)污染較輕的秋子梨組培苗有顯著的抑菌和挽救作用，并能夠促進(jìn)組培苗生長(zhǎng)。

2.3?不同濃度“山農(nóng)一號(hào)”殺菌劑對(duì)秋子梨污染組培苗抑菌效果

將經(jīng)5%“山農(nóng)一號(hào)”Ⅰ型殺菌劑浸泡2h的秋子梨組培苗接種在添加不同濃度的“山農(nóng)一號(hào)”Ⅲ型殺菌劑培養(yǎng)基上，結(jié)果見表3。從表中可以看出，隨著處理濃度增加，增殖倍數(shù)和鮮重呈下降趨勢(shì)。處理濃度為0.15%時(shí)，恢復(fù)率最高，為88.6%;處理濃度為0.1%時(shí)，鮮重和株高最高，分別為1.4g和1.6cm。綜合考慮，經(jīng)5%“山農(nóng)一號(hào)”Ⅰ型殺菌劑浸泡2h后，接種在含0.1%“山農(nóng)一號(hào)”Ⅲ型殺菌劑增殖培養(yǎng)基上，對(duì)污染組培苗達(dá)到較好的抑菌效果和促進(jìn)生長(zhǎng)的作用。

3?結(jié)論與討論

常采用的組培污染防治方法是在培養(yǎng)基中添加各種殺菌劑。殺菌劑的類型主要有抗生素類，如制霉菌素、灰黃霉素、青霉素、慶大霉素等;防腐劑類，如苯甲酸鈉、山梨酸鉀、丙酸鉀等;農(nóng)用殺菌劑類，如多菌靈、代森錳鋅等;提取物類，如大蒜素、苦參提取物、熏衣草提取物等。盡管都有很好的抑菌效果，但都存在缺點(diǎn)，如不能高壓滅菌，或者只對(duì)單一的細(xì)菌或真菌起到滅菌的作用等。試驗(yàn)所用的“山農(nóng)一號(hào)”殺菌劑是一種廣譜生物殺菌劑，不僅可以高壓滅菌，而且對(duì)細(xì)菌、真菌和混合菌引起的組培污染都能起到抑制作用。試驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)5%“山農(nóng)一號(hào)”Ⅰ型殺菌劑浸泡后，再接種于含“山農(nóng)一號(hào)”Ⅲ型殺菌劑增殖培養(yǎng)基上，對(duì)秋子梨污染組培苗有顯著的抑菌作用，能有效地挽救秋子梨污染組培苗，同時(shí)增加組培苗鮮重和株高，對(duì)促進(jìn)組培苗的生長(zhǎng)起到很好的作用。這與徐程[12]等研究一致。

對(duì)污染較輕的秋子梨組培苗經(jīng)5%“山農(nóng)一號(hào)”Ⅰ型殺菌劑浸泡1.0h，可以獲得較好的恢復(fù)率，且組培苗生長(zhǎng)健壯，分化的芽多。污染較重的秋子梨組培苗先經(jīng)5%“山農(nóng)一號(hào)”Ⅰ型殺菌劑浸泡2.0h后，再接種在含0.1%“山農(nóng)一號(hào)”Ⅲ型殺菌劑增殖培養(yǎng)基上，也能顯著促進(jìn)組培苗生長(zhǎng)，提高增殖倍數(shù)。

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（責(zé)任編輯?常陽(yáng)陽(yáng)）