童蘭艷，代政華，肖昭競，張麗妮，鄒 孝，余文琴

(重慶市計量質量檢測研究院重慶市食品安全工程技術研究中心/國家農副加工及調味品質量監(jiān)督檢驗中心， 重慶 401123)

高甜味、低熱量的甜味劑被廣泛應用于食品中，且大部分甜味劑主要通過人工合成獲取，如阿斯巴甜、三氯蔗糖、糖精鈉、甜蜜素、安賽蜜、阿力甜、紐甜等[1]。近年來研究發(fā)現人造甜味劑的長期大量攝入可能會導致高血糖、葡萄糖耐受不良、肥胖等代謝系統(tǒng)性疾病，易怒、抑郁、記憶衰退、阿爾茲海默癥等神經系統(tǒng)異常[2-4]，甚至具有遺傳毒性和致癌性[5-7]。

世界各國對甜味劑的使用情況規(guī)定不同，如甜蜜素在美國屬于禁用食品添加劑，但歐盟和中國允許使用。愛德萬甜為新型甜味劑，2017年10月20日, 國家衛(wèi)生計生委發(fā)布第8號公告《關于愛德萬甜等6種食品添加劑新品種、食品添加劑環(huán)己基氨基磺酸鈉 (又名甜蜜素) 等6種食品添加劑擴大用量和使用范圍的公告》正式批準愛德萬甜作為食品添加劑。目前常用的食品中甜味劑的檢測方法是液相色譜法[8-9]和液相色譜串聯質譜法[10-12]。液相色譜法檢測存在靈敏度、分別率不夠高、多種甜味劑同時檢測分離效果不夠好等問題，液相色譜串聯質譜法是同時測定多種甜味劑的較佳選擇[13]。安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖、阿力甜、甜菊糖苷、愛德萬甜和紐甜在食品中的使用限量見表1，這9種甜味劑在食品中被同時檢測的報道較少[14-15]。

本研究建立了采用高效液相色譜- 串聯質譜法同時測定食品中9種甜味劑(安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖、阿力甜、甜菊糖苷、愛德萬甜和紐甜)的快速測定方法，在滿足國家標準對食品中9種甜味劑檢測要求前提下，與國家標準檢測方法相比，本方法操作簡單、快速、高效，提高了樣品的檢測分析效率。另外，用本方法對5種市售食品(酒、雪糕、果凍、酸奶和糖果)中的甜味劑進行了快速檢測，發(fā)現部分市售食品存在違規(guī)添加和濫用甜味劑的現象，相關部門需要對此問題進行關注。

表1 9種甜味劑的甜度及限量[6-7]

每日允許攝入量為聯合國糧農組織/世界衛(wèi)生組織食品添加劑聯合專家委員會評估而定。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Quintix 224- 1CN型電子天平，德國Sartorius公司；安捷倫1290型液相色譜- 三重四級桿串聯質譜儀，美國AB公司；SB- 1500DT型超聲儀，中國寧波新芝生物科技股份有限公司； VORTEX3型圓周振蕩器，德國IKA公司。

乙腈，色譜純，美國Tedia公司；甲酸、乙酸銨，色譜純，中國成都市科隆化學品有限公司；安賽蜜純度≥99.5%，甜蜜素純度≥99.9%，阿斯巴甜純度≥99.2%，三氯蔗糖純度≥99.7%，愛德萬甜純度≥99.0%，紐甜純度≥99.0%，德國Dr.Ehrenstorfer公司；糖精鈉1 000 mg/L，中國計量院；阿力甜純度≥99%，甜菊糖苷純度≥99%，加拿大TRC公司。

酒、雪糕、果凍、酸奶和糖果均為市售。

1.2 標準溶液配制

1.2.1標準儲備液

分別取安賽蜜、甜蜜素、阿斯巴甜、阿力甜、三氯蔗糖標準品于容量瓶中，用超純水溶解并定容，得到密度1 000 mg/L的標準儲備液；取量甜菊糖苷標準品于容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得到密度1 000 mg/L的標準儲備液；分別稱取愛德萬甜、紐甜標準品于容量瓶中，用V(甲醇)∶V(水)=1∶1溶解并定容，得到密度1 000 mg/L的標準儲備液。

1.2.2標準工作溶液

分別移取安賽蜜、甜蜜素、阿力甜、愛德萬甜和紐甜標準儲備液0.10 mL于10 mL容量瓶，用超純水定容，制成10 mg/L混合標準溶液。分別移取糖精鈉、三氯蔗糖、阿斯巴甜和甜菊糖苷標準溶液0.2 mL于10 mL容量瓶中，用超純水定容，制成20 mg/L混合標準溶液。取適量的2種混合標準溶液配制安賽蜜、甜蜜素、阿力甜、愛德萬甜和紐甜密度為0.010、0.020、0.050、0.100、0.200、0.500、0.800、1.000 mg/L的標準工作溶液，糖精鈉、三氯蔗糖、阿斯巴甜和甜菊糖苷密度為0.020、0.040、0.100、0.200、0.400、1.000、1.600、2.000 mg/L的標準工作溶液。

1.3 樣品處理

1.3.1白酒樣品

白酒，取樣品1 g(精確至0.000 1 g)用水浴鍋加熱除盡乙醇，轉移至10 mL容量瓶中，用超純水定容至刻度，混勻，過0.22 μm濾膜后供HPLC- MS/MS分析。

1.3.2雪糕、果凍、酸奶、糖果樣品

準確稱取1 g(精確至0.000 1 g)至15 mL離心管中，加10 mLV(甲醇)∶V(水)=1∶1溶液渦旋混勻，超聲30 min后，10 000 r/min離心10 min，取上清液過0.22 μm濾膜后供HPLC- MS/MS分析。

1.4 儀器條件

1.4.1HPLC條件

色譜柱為：AQ- C18(100 mm×2.1 mm×3 μm)，柱溫為35 ℃，進樣量5 μL，流動相A為c(乙酸銨)20 mmol/L的水溶液，流動相B為φ(甲酸)0.1%的乙腈溶液，流速0.35 mL/min。洗脫梯度程序見表2。

表2 洗脫程序

1.4.2質譜條件

電噴霧離子源；離子源溫度：500 ℃；電噴霧電壓：-4 500 V；檢測模式：多反應監(jiān)測；霧化器壓力：50psi(344.74 kPa)；氣簾氣壓力：25 psi(172.37 kPa)；輔助氣壓力：50 psi(344.74 kPa)；碰撞氣：6 mL/min。9種甜味劑的質譜檢測條件見表3。

表3 9種甜味劑質譜檢測條件

2 結果與討論

2.1 分析條件優(yōu)化

在條件優(yōu)化過程中選用AQ- C18(100 mm×2.1 mm×3 μm)色譜柱對9種甜味劑進行分離?？疾炝甩?甲酸)0.1%的乙腈-c(乙酸銨)0.005 mol/L的水溶液、φ(甲酸)0.1%的乙腈-c(乙酸銨)10 mmol/L的水溶液和φ(甲酸)0.1%的乙腈-c(乙酸銨)20 mmol/L的水溶液流動相體系，發(fā)現φ(甲酸)0.1%的乙腈-c(乙酸銨)20 mmol/L的水溶液作為流動相時，9種甜味劑的峰形對稱且尖銳，且目標化合物的響應值較高，最終選用φ(甲酸)0.1%的乙腈-c(乙酸銨)0.02 mol/L的水溶液作為流動相。以適量濃度甜味劑混合標準溶液進樣，通過對離子源模式、碰撞能量等條件進行優(yōu)化，確定目標物質的離子對，結果見表3。9種標準溶液總離子流圖見圖1。

1.安賽蜜，2.糖精鈉，3.甜蜜素，4.阿斯巴甜，5.三氯蔗糖，6.阿力甜，7.甜菊糖苷，8.愛德萬甜，9.紐甜。圖1 9種甜味劑標準溶液總離子流圖Fig.1 Total ions chromatogram of 9 sweeteners

2.2 線性關系和方法檢出限

在優(yōu)化條件下測試不同濃度的9種甜味劑標準溶液，繪制標準曲線，以信噪比S/N≥3和S/N≥10計算出9種甜味劑的方法檢出限和定量限，結果見表4。由表4可知，9種甜味劑的檢出限為0.020～0.055 mg/kg，定量限為0.06～0.15 mg/kg。

2.3 食品中9種甜味劑的測定

對重慶市售的白酒、雪糕、果凍、酸奶和糖果各6個樣品進行了前處理，結果表明樣品中均未檢出愛德萬甜，說明目前愛德萬甜還未在食品中廣泛應用。但是在檢測樣品中有一個白酒樣品的甜蜜素超標，含量為0.72 mg/kg、一個白酒樣品的三氯蔗糖超標，含量為1.04 mg/kg；一個白酒樣品的安賽蜜，含量為38.2 mg/kg，在GB 2760—2014《食品安全國家標準食品添加劑使用標準》中規(guī)定蒸餾酒中不允許添加任何甜味劑；一個酸奶樣品檢出安賽蜜，含量為4.30 g/kg，超過GB 2760—2014中限量0.35 g/kg；一個果凍樣品中檢出阿力甜0.37 g/kg，超過GB 2760—2014中限量為0.1 g/kg，以上有說明食品市場存在違規(guī)添加和濫用甜味劑的現象，相關部門需要對相關現象進行關注。

表4 9種甜味劑的標準曲線及檢出限

表5 食品中9種甜味劑的回收率

n=6。

2.4 回收率和精密度測定

分別稱取白酒、雪糕、果凍、酸奶和糖果陰性樣品，每種樣品中添加低、中、高3個濃度水平的甜味劑，每個水平下進行6次平行實驗，結果見表5。結果表明，安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、紐甜、阿斯巴甜、三氯蔗糖、阿力甜、甜菊糖苷和愛德萬甜在酒、雪糕、果凍、酸奶和糖果中加標回收率為90.6%～111.5%，相對標準偏差均小于為6.0%。

3 結 論

本研究建立高效液相色譜- 串聯質譜法同時測定食品中9種甜味劑(安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜、三氯蔗糖、阿力甜、甜菊糖苷、愛德萬甜和紐甜)的快速測定方法，應用本方法對食品中9種甜味劑進行檢測，整個實驗操作簡單、快速、高效，在滿足國家標準對食品(白酒、飲料、果凍、酸奶、糖果)中9種甜味劑檢測要求前提下，與國家標準檢測方法相比，大大提高了樣品的檢測分析效率。應用本方法對5種食品中9種甜味劑進行檢測，發(fā)現食品市場存在違規(guī)添加和濫用甜味劑的現象，相關部門需要對相關現象進行關注。實驗證實建立食品中甜味劑的痕量檢測提供了可靠而準確的技術手段，對規(guī)范食品添加劑在食品中的使用行為具有重要意義，同時為食品安全監(jiān)管、高效檢測指明高效率、高通量發(fā)展方向。