0.999。結(jié)論:用該法分析血液中的乙醇含量準(zhǔn)確度和精密度均能滿足要求,內(nèi)標(biāo)物的適用性更廣泛。關(guān)鍵詞:乙醇;血液;異戊醇;氣相色譜;內(nèi)標(biāo)-標(biāo)準(zhǔn)曲線中圖分類(lèi)號(hào):O6"/>

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        血液中乙醇含量測(cè)定-異戊醇內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法

        2020-04-20 11:09:57趙曉華
        中國(guó)科技縱橫 2020年1期
        關(guān)鍵詞:氣相色譜內(nèi)標(biāo)乙醇

        趙曉華

        摘 要:目的:建立用異戊醇作為內(nèi)標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線定量法來(lái)測(cè)定血液中的乙醇含量,并與方法GA/T 1073-2013進(jìn)行比較。方法:用頂空進(jìn)樣器-氣相色譜聯(lián)用儀,采用內(nèi)標(biāo)工作曲線法的定量方式分析血液中乙醇含量[1-2]。結(jié)果:用本方法測(cè)得的乙醇加標(biāo)回收率為99.4~101.9%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1%以內(nèi),一元性回歸方程式的相關(guān)系數(shù)r>0.999。結(jié)論:用該法分析血液中的乙醇含量準(zhǔn)確度和精密度均能滿足要求,內(nèi)標(biāo)物的適用性更廣泛。

        關(guān)鍵詞:乙醇;血液;異戊醇;氣相色譜;內(nèi)標(biāo)-標(biāo)準(zhǔn)曲線

        中圖分類(lèi)號(hào):O657 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1671-2064(2020)01-0210-02

        血液中的乙醇含量測(cè)定目前現(xiàn)有的方法是GA/T 1073- 2013,采用的內(nèi)標(biāo)物為叔丁醇,但是筆者在實(shí)際運(yùn)用中發(fā)現(xiàn):叔丁醇的熔點(diǎn)為25.7℃,冬天的時(shí)候,叔丁醇是固體狀態(tài),配制內(nèi)標(biāo)液的時(shí)候需要加熱等候很長(zhǎng)時(shí)間,給稱(chēng)量或移取帶來(lái)不便。因此筆者想要尋找熔點(diǎn)較低的化合物來(lái)作為內(nèi)標(biāo),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)GA/T 1073-2013,其不但可以測(cè)試乙醇含量,還用于測(cè)試甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、異丙醇和正丁醇,因此內(nèi)標(biāo)物的選擇需要避開(kāi)以上化合物,經(jīng)過(guò)尋找,筆者找到了異戊醇,其熔點(diǎn)為-117℃,溶解性:微溶于水,與乙醇混溶,因此筆者認(rèn)為異戊醇比較適合作為內(nèi)標(biāo)物。

        1 材料與方法

        1.1 儀器

        Aglient氣相色譜7890B、Aglient頂空進(jìn)樣器7697A、Eppendorf移液器(20-200μL和100-1000μL)、頂空進(jìn)樣瓶(10mL,配有鋁帽及密封墊)。

        1.2 試劑

        乙醇系列標(biāo)準(zhǔn)品(Cerilliant進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品)、異戊醇(國(guó)藥試劑>98.5%)、蒸餾水(屈臣氏)、血液樣品。

        1.3 試劑配制

        1.3.1 內(nèi)標(biāo)物溶液

        用移液器移取25.1μL的異戊醇(密度0.81g/mL,純度98.5%)于一預(yù)先裝有適量蒸餾水的500mL容量瓶中,再用蒸餾水定容至刻度,搖勻,得濃度為4mg/100mL的異戊醇內(nèi)標(biāo)工作液。

        1.3.2 乙醇標(biāo)準(zhǔn)品

        市售,濃度為10mg/100mL、20mg/100mL、50mg/100mL、80mg/100mL、100mg/100mL、200mg/100mL、300mg/100mL。

        1.4 實(shí)驗(yàn)條件

        1.4.1 頂空進(jìn)樣器條件(如表1)

        1.4.2 氣相色譜條件(如表2)

        1.5 實(shí)驗(yàn)方法

        1.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

        用移液器分別移取500μL的異戊醇內(nèi)標(biāo)工作液于7個(gè)10mL頂空瓶中,再向這7個(gè)頂空瓶中分別移取100μL的10mg/100mL、20mg/100mL、50mg/100mL、80mg/100mL、100mg/100mL、200mg/100mL、300mg/100mL乙醇標(biāo)準(zhǔn)品,用硅膠墊和鋁帽密封,混勻。置于頂空進(jìn)樣器中,按1.4實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)樣分析。以待測(cè)組分(乙醇)和內(nèi)標(biāo)物(異戊醇)的峰面積之比作為縱坐標(biāo),以待測(cè)組分(乙醇)和內(nèi)標(biāo)物(異戊醇)的含量之比作為橫坐標(biāo),制作內(nèi)標(biāo)工作曲線。

        1.5.2 樣品測(cè)定

        用移液器分別移取100μL的全血樣品和500μL的異戊醇內(nèi)標(biāo)工作液于一個(gè)10mL頂空瓶中,用硅膠墊和鋁帽密封,混勻,置于頂空進(jìn)樣器中,按1.4實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)樣分析。跟據(jù)待測(cè)樣品中乙醇和異戊醇的峰面積之比,即可在工作曲線上查出待測(cè)樣品中乙醇的濃度,進(jìn)而得出待測(cè)樣品中乙醇的含量。

        2 結(jié)果與討論

        2.1 方法的可行性

        從圖1可知,乙醇的出峰時(shí)間為1.394min,異戊醇的出峰時(shí)間為5.112min,實(shí)驗(yàn)條件能達(dá)到分離效果,實(shí)驗(yàn)方法可行。

        2.2 內(nèi)標(biāo)工作曲線的建立

        乙醇/異戊醇峰面積之比-乙醇/異戊醇含量之比對(duì)照表見(jiàn)表3;內(nèi)標(biāo)工作曲線見(jiàn)圖2。

        2.3 加標(biāo)回收

        向空白血液中加入適量乙醇,分別制得乙醇含量為50mg/100mL和80mg/100mL的血液樣品,用此方法測(cè)其乙醇含量,結(jié)果如表4。

        2.4 精密度

        隨機(jī)抽取一血液樣品,按此方法重復(fù)分析6次,得出6個(gè)乙醇含量結(jié)果,計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差如表5。

        3 結(jié)語(yǔ)

        應(yīng)用異戊醇作為內(nèi)標(biāo)測(cè)定血液中乙醇含量,加標(biāo)回收率為99.4~101.9%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.78%,滿足測(cè)試要求,異戊醇代替叔丁醇作為內(nèi)標(biāo)的可操作性更強(qiáng),特別是當(dāng)室溫比較低時(shí),異戊醇保持液體狀態(tài),方便了檢測(cè)人員的操作。

        參考文獻(xiàn)

        [1] 陳君,彭峰.氣相色譜法直接測(cè)定血液中乙醇的含量[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2010,7(5):418-419.

        [2] 代娟,陳曼,賴(lài)翼,等.直接進(jìn)樣毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定血液中乙醇含量的研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2010,20(2):283-284.

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