陳奕穎,林宏昌

廣東省揭陽市人民醫(yī)院檢驗科，廣東揭陽 522000

百日咳是一種具有高度傳染性的急性呼吸道疾病，人群普遍易感，以嬰幼兒多見，可引起長達數(shù)月的咳嗽。百日咳疫苗的廣泛應用明顯降低了百日咳的發(fā)病率和病死率。近年來，兒童百日咳發(fā)病率逐年升高，嚴重威脅兒童生命健康[1-2]。由于本院尚未開展百日咳鮑特菌培養(yǎng)、百日咳聚合酶鏈反應(PCR)及血清學檢測，百日咳的確診需要其他檢驗機構的協(xié)助才能完成，這不僅延長了治療周期，也使得本院百日咳發(fā)病率被嚴重低估，因此，尋求簡便而有效的實驗室檢測方法尤為重要。本文通過對80例疑似百日咳患兒的白細胞(WBC)計數(shù)、淋巴細胞百分比(LYMPH%)、裂隙淋巴細胞的陽性率進行分析，探討外周血涂片中裂隙淋巴細胞對百日咳的診斷價值，為基層醫(yī)院快速診治百日咳提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇本院80例疑似百日咳患兒為研究對象，其中男39例，女41例；年齡0～2歲，中位年齡3個月。按照百日咳桿菌核酸檢測結果將其分為百日咳陽性組和百日咳陰性組，每組各40例。百日咳陽性組男20例，女20例；中位年齡4個月。百日咳陰性組男19例，女21例；中位年齡2個月。所有患兒均以咳嗽為主要癥狀入院，百日咳陽性組的患兒均符合百日咳臨床診斷標準[3]。所有入選患兒均排除自身免疫功能缺陷或伴有其他系統(tǒng)的嚴重疾病。

1.2儀器與試劑 XN-2000全自動血細胞分析儀及原裝進口試劑(日本希森美康公司)；光學顯微鏡(日本奧林巴斯公司)；EDTA-K2抗凝管(上海澳翔醫(yī)療科技有限公司)；瑞氏染液(珠海貝索生物技術有限公司)；百日咳桿菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)由湖南圣湘生物科技有限公司提供。

1.3方法 所有患兒的血常規(guī)采用XN-2000全自動血細胞分析儀進行檢測；由血液組專家進行外周血WBC形態(tài)學檢查，所有血涂片經瑞氏染色后，在光學顯微鏡下觀察WBC形態(tài)，并計算出裂隙淋巴細胞所占的比例；同時采集患兒的鼻咽拭子置于含采樣液的無菌管中，于4 ℃保存即日送檢。血常規(guī)檢測和外周血WBC形態(tài)學檢查均在本院完成，百日咳桿菌核酸檢測由廣州市金域醫(yī)學檢驗中心完成。所有操作均嚴格按照標準操作規(guī)程進行。

1.4觀察指標 分析兩組患兒WBC計數(shù)、LYMPH%、裂隙淋巴細胞陽性率的差異，同時比較各指標對百日咳診斷的特異度和靈敏度。陽性判定標準：WBC計數(shù)≥12×109/L， LYMPH%≥50%；外周血涂片中出現(xiàn)裂隙淋巴細胞則判定為陽性。

1.5統(tǒng)計學處理 采用SPSS22.0軟件進行數(shù)據處理和分析。計數(shù)資料以百分數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1兩組患兒WBC計數(shù)、LYMPH%、裂隙淋巴細胞陽性率的比較 百日咳陽性組WBC計數(shù)、LYMPH%、裂隙淋巴細胞陽性率明顯高于百日咳陰性組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患兒WBC計數(shù)、LYMPH%、裂隙淋巴細胞陽性率的比較[n(%)]

2.2血涂片 所有研究對象中有22例患兒的血涂片中見到數(shù)量不等(3%～20%)的裂隙淋巴細胞。細胞體積較小，細胞質較少，呈藍色或淺藍色透亮狀，細胞核染色質聚集呈深紫色，核上有明顯的裂隙，裂隙貫穿整個細胞，呈現(xiàn)雙核樣或不對稱的雙核樣。見圖1。

圖1 光學顯微鏡下的裂隙淋巴細胞

2.3不同指標對百日咳診斷的特異度和靈敏度比較 WBC計數(shù)、LYMPH%、裂隙淋巴細胞診斷百日咳的特異度分別為72.5%、32.5%、97.5%，裂隙淋巴細胞的特異度最高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；裂隙淋巴細胞診斷百日咳的靈敏度為52.5%，與WBC計數(shù)(87.5%)、LYMPH%的靈敏度(87.5%)比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；WBC計數(shù)和LYMPH%診斷百日咳的靈敏度差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3 討 論

百日咳是一種由百日咳桿菌感染引起的呼吸道傳染性疾病。近年來，百日咳發(fā)病率有升高趨勢，引起了醫(yī)學界的關注[4-5]。隨著百日咳疫苗的應用，百日咳患兒的臨床表現(xiàn)并不典型[6-7]，基層醫(yī)院病原學檢測方法尚不完善，給百日咳的早期診斷和治療帶來困難，延誤治療會造成部分患兒出現(xiàn)嚴重并發(fā)癥，給患兒家庭、經濟及生活帶來較大影響。

細菌培養(yǎng)是確診百日咳的“金標準”，其特異度高但靈敏度低，周期長，且易受抗菌藥物、免疫接種、標本采集時間等諸多因素的影響[8]。血清學檢查需要收集急性期和恢復期的雙份血清進行檢測，對于臨床表現(xiàn)不典型，疾病分期不明顯的患兒容易造成漏診。而PCR方法靈敏度和特異度較高[9]，但在基層醫(yī)院難以開展。因此，快捷、簡便的實驗室檢測方法是基層醫(yī)院實現(xiàn)早期診治百日咳的迫切需求。本研究結果顯示，百日咳陽性組患兒的WBC計數(shù)、LYMPH%陽性率較高，與既往研究基本一致[7-8,10]。這與百日咳桿菌產生的百日咳毒素(PT)相關。PT是百日咳致病的主要毒力因子，具有促進WBC及淋巴細胞增殖的生物效應[11]。且重癥百日咳患兒將出現(xiàn)嚴重的WBC增多癥和淋巴細胞增多，出現(xiàn)呼吸困難或呼吸衰竭[12]。目前淋巴細胞增多仍是臨床醫(yī)生診斷百日咳的重要依據，但特異度低。

近年來，有學者在百日咳患兒外周血中發(fā)現(xiàn)細胞質缺乏、染色質凝集、有裂隙的成熟小淋巴細胞——裂隙淋巴細胞。有研究報道，外周血涂片中找到裂隙淋巴細胞可能是簡單、快速診斷百日咳的方法[13-14]。筆者在22例患兒的血涂片中見到數(shù)量不等(3%～20%)的特殊細胞，該種細胞體積較小，細胞質較少，呈藍色或淺藍色透亮狀，細胞核染色質聚集呈深紫色，核上有明顯的裂隙，裂隙貫穿整個細胞，呈現(xiàn)雙核樣或不對稱的雙核樣，這與上述研究描述的細胞形態(tài)一致，證實該細胞為裂隙淋巴細胞。北京兒科研究所的課題提示，裂隙淋巴細胞由PT誘導產生，提示裂隙細胞可能成為百日咳特異性診斷指標，但還需進一步研究明確[15]。本研究中，裂隙淋巴細胞陽性的22例患兒中有21例確診百日咳感染，特異度為97.5%， 這再次證明裂隙淋巴細胞的出現(xiàn)與百日咳感染有關，說明外周血涂片中出現(xiàn)裂隙淋巴細胞提示百日咳感染的可能，裂隙淋巴細胞可作為診斷百日咳的特異性指標。百日咳感染和裂隙淋巴細胞的數(shù)量是否存在相關性也需進一步擴大研究。

臨床上疑似百日咳患兒，可建議進行WBC形態(tài)學檢查。血涂片中出現(xiàn)裂隙淋巴細胞提示百日咳感染，臨床醫(yī)生可通過完善百日咳的相關檢查以明確診斷，有助于縮短診療周期，節(jié)約醫(yī)療成本，為基層醫(yī)院百日咳的早期診治提供依據。