萬(wàn) 麗，李 可，康 玉，陳 行

(1.江西省樂(lè)平市婦幼保健院產(chǎn)科，江西 樂(lè)平 333300；2.上海市復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院婦科，上海 200011)

子宮內(nèi)膜癌(endometrial cancer, EC)屬于婦科常見三大惡性腫瘤之一，發(fā)病率約占婦科惡性腫瘤的7%，占女性生殖道惡性腫瘤的20%～30%，同時(shí)呈現(xiàn)發(fā)病率逐年增高與發(fā)病人群年輕化的趨勢(shì)[1-3]。因該病早期一般無(wú)明顯臨床癥狀或癥狀無(wú)特異性，易被臨床醫(yī)生及患者忽視，疾病確診時(shí)多進(jìn)展到中晚期，治療難度增加，預(yù)后差。尋找一種靈敏的早期篩查與病情、預(yù)后評(píng)價(jià)方法對(duì)指導(dǎo)臨床及時(shí)合理治療、改善患者預(yù)后具有重要意義。絲裂原活化蛋白激酶4(mitogen activated protein kinase 4, MAP2K4)能編碼MAP激酶信號(hào)家族基因，在激活情況下可促使p38或c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinas, JNK)產(chǎn)生磷酸化，并通過(guò)促進(jìn)應(yīng)激活化蛋白激酶途徑激活，參與細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化、凋亡等過(guò)程[4]。小類泛素化修飾蛋白(small ubiquitination modifying proteins, SUMO)為一類結(jié)構(gòu)與生成、降解循環(huán)通路和泛素化蛋白類似，但功能不同的蛋白質(zhì)翻譯后修飾蛋白，其經(jīng)異肽鍵和靶蛋白結(jié)合后，可調(diào)控靶蛋白各種生物學(xué)功能，參與惡性腫瘤發(fā)生進(jìn)展[5]。乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1, BRCA1)結(jié)構(gòu)、功能異常與性激素有關(guān)的卵巢癌、乳腺癌發(fā)病密切相關(guān)，因?yàn)樽訉m內(nèi)膜也屬于性激素作用器官，因此BRCA1可能在EC發(fā)病中也具有一定作用[6]。本研究選取年輕EC患者、子宮內(nèi)膜非典型增生患者、子宮內(nèi)膜正?；颊吒?0例，旨在分析MAP2K4、SUMO-1、BRCA1在年輕EC患者中的表達(dá)及臨床意義，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 研究對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2005年11月至2014年3月復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院收治的80例年輕EC患者設(shè)為EC組，同期80例子宮內(nèi)膜非典型增生患者設(shè)為非典型增生組、80例行子宮脫垂手術(shù)治療的子宮內(nèi)膜正?；颊咴O(shè)為正常組。其中EC組年齡在26～45歲，平均(38.95±4.92)歲；病理類型：漿液性癌3 例，透明細(xì)胞癌6 例，鱗腺癌10 例，子宮內(nèi)膜腺癌61 例；國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(Intemational Federation of Gynecology and Obstetrics, FIGO)分期：Ⅲ～Ⅳ期19例，Ⅰ～Ⅱ期61例；組織分化程度：中低分化(G2～G3)41例，高分化(G1)39例；肌層浸潤(rùn)深度：≥1/2者46例，＜1/2者34例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有21例，無(wú)59例。非典型增生組年齡24～44歲，平均(38.16±4.05)歲。正常組年齡在24～45歲，平均(37.89±4.37)歲；子宮內(nèi)膜類型：萎縮型內(nèi)膜13例，分泌期內(nèi)膜29例，增殖期內(nèi)膜38例。3組年齡對(duì)比，無(wú)顯著差異(P＞0.05)，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)同意。

1.2 病例納入標(biāo)準(zhǔn)

EC組經(jīng)術(shù)后病理檢查證實(shí)為EC，術(shù)前未采取放化療；非典型增生組、正常組經(jīng)手術(shù)病理檢查證實(shí)為子宮內(nèi)膜非典型增生患者、子宮內(nèi)膜正?；颊?；3組臨床資料完整，年齡均≤45歲，知曉本研究方案，自愿簽訂知情同意書。

1.3 病例排除標(biāo)準(zhǔn)

合并血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病者；合并其他惡性腫瘤者；合并腎、肝、心等臟器功能嚴(yán)重障礙者；合并全身感染、腦血管疾病者。

1.4 檢測(cè)方法

①M(fèi)AP2K4、SUMO-1、BRCA1表達(dá)檢測(cè)：所有組織標(biāo)本均以甲醛(4%)固定，并制作厚4μm的石蠟切片，以免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)組織中MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達(dá)，試劑盒均購(gòu)自北京中山金橋生物有限公司，有關(guān)操作由醫(yī)院專業(yè)檢測(cè)人員嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書執(zhí)行，一抗均依據(jù)1:100比例進(jìn)行稀釋，將已知陽(yáng)性片設(shè)為陽(yáng)性對(duì)照，磷酸鹽緩沖液(PBS)替代一抗設(shè)為陰性對(duì)照。②結(jié)果判定：MAP2K4、SUMO-1蛋白主要是于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)，有時(shí)在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)，BRCA1蛋白在細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核內(nèi)均有表達(dá)，陽(yáng)性表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)與(或)細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕褐色、棕黃色或黃色顆粒，于400倍顯微鏡下對(duì)每張切片隨機(jī)選取10個(gè)高倍鏡視野，按照陽(yáng)性染色細(xì)胞占比與染色強(qiáng)度實(shí)施評(píng)分，陽(yáng)性染色細(xì)胞占比：＞50%計(jì)3分，26%～50%計(jì)2分，10%～25%計(jì)1分，＜10%計(jì)0分；染色強(qiáng)度：棕褐色計(jì)3分，棕黃色計(jì)2分，淡黃色計(jì)1分，不著色計(jì)0分，將陽(yáng)性染色細(xì)胞占比與染色強(qiáng)度兩項(xiàng)評(píng)分相加，得分為0～1分為陰性，≥2分為陽(yáng)性[7]。

1.5 觀察指標(biāo)

①對(duì)比3 組子宮內(nèi)膜組織MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達(dá)情況；②分析MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達(dá)與EC組患者臨床病理參數(shù)(病理類型、臨床分期、組織分化程度、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)的關(guān)系； ③觀察MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達(dá)與EC組患者5年生存率的關(guān)系。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所得研究數(shù)據(jù)納入SPSS 23.0軟件中處理，計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組子宮內(nèi)膜組織MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達(dá)比較

EC組子宮內(nèi)膜組織MAP2K4、BRCA1表達(dá)低于非典型增生組、正常組(MAP2K4：χ2值分別32.89、50.26；BRCA1：χ2值分別14.48、60.67，均P ＜0.05)，SUMO-1表達(dá)高于非典型增生組、正常組(χ2值分別21.19、61.20，均P＜0.05)，見表1。

2.2 MAP2K4 表達(dá)與EC 組患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

MAP2K4表達(dá)與EC組患者病理類型之間無(wú)顯著相關(guān)性(P ＞0.05)；臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織分化程度為中低分化、肌層浸潤(rùn)深度≥1/2、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移EC組的患者M(jìn)AP2K4表達(dá)均低于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織分化程度為高分化、肌層浸潤(rùn)深度＜1/2、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者(均P＜0.05)，見表2。

2.3 SUMO-1 表達(dá)與EC 組患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

SUMO-1表達(dá)與EC組患者病理類型之間無(wú)顯著相關(guān)性(P ＞0.05)；臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織分化程度為中低分化、肌層浸潤(rùn)深度≥1/2、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移EC組的患者SUMO-1表達(dá)均高于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織分化程度為高分化、肌層浸潤(rùn)深度＜1/2、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者(均P＜0.05)，見表3。

表1 3組患者子宮內(nèi)膜組織MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達(dá)比較[n(%)]Table 1 Comparison of the expression of MAP2K4, SUMO-1 and BRCA1 in endometrial tissues among the three groups[n(%)]

表2 MAP2K4表達(dá)與EC組患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系[n(%)]Table 2 The relationship between MAP2K4 expression and pathological parameters in EC group [n(%)]

表3 SUMO-1表達(dá)與EC組患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系[n(%)]Table 3 The relationship between SUMO-1 expression and pathological parameters in EC group [n(%)]

2.4 BRCA1 表達(dá)與EC 組患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

BRCA1表達(dá)與EC組患者病理類型之間無(wú)顯著相關(guān)性(P ＞0.05)；臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織分化程度為中低分化、肌層浸潤(rùn)深度≥1/2、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的EC組患者BRCA1表達(dá)均低于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織分化程度為高分化、肌層浸潤(rùn)深度＜1/2、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者(均P＜0.05)，見表4。

表4 BRCA1表達(dá)與EC組患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系[n(%)]Table 4 The relationship between BRCA1 expression and pathological parameters in EC group [n(%)]

2.5 MAP2K4、SUMO-1、BRCA1 表 達(dá) 與EC 組 患者5 年生存率的關(guān)系

MAP2K4、BRCA1在EC組織中呈陽(yáng)性表達(dá)者5年生存率高于陰性表達(dá)者，SUMO-1在EC組織中呈陽(yáng)性表達(dá)者5年生存率低于陰性表達(dá)者(均P＜0.05)，見表5。

表5 MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達(dá)與EC組患者5年生存率的關(guān)系[%(n/N)]Table 5 The relationship between MAP2K4, SUMO-1 and BRCA1 expression and 5-year survival rate in EC group[%(n/N)]

3 討論

EC 屬于婦科常見惡性腫瘤，發(fā)病率及病死率較高，實(shí)現(xiàn)疾病早期防治對(duì)改善患者預(yù)后尤為重要[8-9]。臨床研究指出，EC發(fā)病是涉及多因素的生物學(xué)過(guò)程，體內(nèi)存在多種腫瘤有關(guān)基因可參與調(diào)控，由于抑癌基因或癌基因調(diào)節(jié)細(xì)胞周期失常致使細(xì)胞出現(xiàn)癌變是EC發(fā)病重要機(jī)制[10-11]。

3.1 MAP2K4 與EC 的關(guān)系

MAP2K4為MAPK家族中一員，屬于一種抑癌基因，本研究顯示，EC 組子宮內(nèi)膜組織MAP2K4 表達(dá)低于非典型增生組、正常組，且臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織分化程度為中低分化、肌層浸潤(rùn)深度≥1/2、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的EC 患者M(jìn)AP2K4 表達(dá)低于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織分化程度為高分化、肌層浸潤(rùn) 深度＜1/2、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。表明EC患者子宮內(nèi)膜組織中MAP2K4呈低表達(dá)，且表達(dá)同患者臨床分期、組織分化程度、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理參數(shù)密切相關(guān)。MAP2K4基因位置處于第17號(hào)染色體，在MAPK的信號(hào)傳導(dǎo)途徑中起著重要作用，可激活p38 MAPK及JNK兩個(gè)下游目標(biāo)，影響細(xì)胞病變及衰亡[12]。有研究發(fā)現(xiàn)，在人上皮性腫瘤尤其是乳腺癌與卵巢癌患者體內(nèi)，MAP2K4可以7%～10%速率丟失，作為一種抑癌基因，可對(duì)乳腺癌、卵巢癌等腫瘤起到抑制作用[13]。張競(jìng)[14]研究指出，EC組織內(nèi)MAP2K4表達(dá)低于子宮內(nèi)膜增生及子宮內(nèi)膜正?；颊?，且表達(dá)與腫瘤臨床分期、分化程度等密切相關(guān)。亦提示可將MAP2K4作為EC早期篩查、惡性程度判斷的重要依據(jù)。

3.2 SUMO 與EC 的關(guān)系

SUMO分子在進(jìn)化中有高度保守性，廣泛存在于真菌、植物、動(dòng)物中，SUMO化修飾過(guò)程包括分離、連結(jié)、綴合、激活、成熟等步驟[15]。本研究結(jié)果中，EC組子宮內(nèi)膜組織SUMO-1表達(dá)高于非典型增生組、正常組，且臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織分化程度為中低分化、肌層浸潤(rùn)深度≥1/2、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的EC患者SUMO-1表達(dá)高于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織分化程度為高分化、肌層浸潤(rùn)深度＜1/2、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。表明EC患者子宮內(nèi)膜組織中SUMO呈高表達(dá)，且表達(dá)與患者臨床分期、組織分化程度、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理參數(shù)密切相關(guān)。韓志堅(jiān)等[16]研究指出，p53、鼠雙微體2(mouse bimicrosome 2, MDM2)、早幼粒細(xì)胞性白血病基因(promyelocytic leukemia gene, PML)等癌基因及抑癌基因的功能均可受到SUMO化修飾調(diào)節(jié)，SUMO化修飾在癌癥發(fā)生、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移中均扮演著重要角色。同時(shí)，相關(guān)研究報(bào)道，SUMO-1可調(diào)控雌激素受體α(estrogen receptor alpha, ERα)蛋白及其他多組蛋白質(zhì)表達(dá)及功能，以此促進(jìn)EC發(fā)生、進(jìn)展[17]。亦說(shuō)明SUMO-1在EC發(fā)生、進(jìn)展中起著重要作用。

3.3 BRCA1 與EC 的關(guān)系

BRCA1 為遺傳性卵巢癌、乳腺癌易感基因，且屬于抑癌基因之一，本研究中，EC 組子宮內(nèi)膜組織BRCA1 表達(dá)低于非典型增生組、正常組，臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、組織分化程度為中低分化、肌層浸潤(rùn) 深度≥1/2、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的EC患者BRCA1表達(dá)低于臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、組織分化程度為高分化、肌層浸潤(rùn)深度＜1/2、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。說(shuō)明EC患者子宮內(nèi)膜組織中BRCA1呈低表達(dá)，且表達(dá)與患者臨床分期、組織分化程度、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理參數(shù)具有密切關(guān)系。有研究指出，BRCA1在DNA雙鏈斷裂修復(fù)過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，可參與DNA形成與蛋白表達(dá)、保持基因組的穩(wěn)定性、細(xì)胞程序性衰亡、細(xì)胞增殖等過(guò)程[18]。若BRCA1產(chǎn)生基因突變可致使細(xì)胞基因穩(wěn)定性受到破壞，對(duì)外界環(huán)境變化的敏感性增高，且可干擾機(jī)體內(nèi)DNA損傷監(jiān)測(cè)，影響細(xì)胞中DNA損傷修復(fù)，從而造成基因表達(dá)產(chǎn)物發(fā)生改變，例如，無(wú)法產(chǎn)生蛋白產(chǎn)物或蛋白缺陷，會(huì)使抑制腫瘤作用減弱，進(jìn)而造成腫瘤發(fā)生、進(jìn)展。趙寧等[19]研究亦表明，BRCA1基因突變與其蛋白表達(dá)降低具有顯著相關(guān)性，且其蛋白表達(dá)下降與EC發(fā)生、進(jìn)展具有密切關(guān)系。

本研究還觀察了MAP2K4、SUMO-1、BRCA1與EC患者預(yù)后的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)MAP2K4、BRCA1在EC組織中呈陽(yáng)性表達(dá)者5年生存率高于陰性表達(dá)者，SUMO-1在EC組織中呈陽(yáng)性表達(dá)者5年生存率低于陰性表達(dá)者。提示三者與患者生存率也有密切關(guān)系，其具體原因仍有待將來(lái)進(jìn)一步探討。

綜上，MAP2K4、BRCA1在年輕EC患者中呈低表達(dá)，SUMO-1呈高表達(dá)，且三者表達(dá)與患者臨床分期、組織分化程度、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理參數(shù)及生存率密切相關(guān)，可將其作為疾病惡性程度、預(yù)后評(píng)定的重要依據(jù)。