萬 麗,李 可,康 玉,陳 行
(1.江西省樂平市婦幼保健院產(chǎn)科,江西 樂平 333300;2.上海市復旦大學附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院婦科,上海 200011)
子宮內(nèi)膜癌(endometrial cancer, EC)屬于婦科常見三大惡性腫瘤之一,發(fā)病率約占婦科惡性腫瘤的7%,占女性生殖道惡性腫瘤的20%~30%,同時呈現(xiàn)發(fā)病率逐年增高與發(fā)病人群年輕化的趨勢[1-3]。因該病早期一般無明顯臨床癥狀或癥狀無特異性,易被臨床醫(yī)生及患者忽視,疾病確診時多進展到中晚期,治療難度增加,預(yù)后差。尋找一種靈敏的早期篩查與病情、預(yù)后評價方法對指導臨床及時合理治療、改善患者預(yù)后具有重要意義。絲裂原活化蛋白激酶4(mitogen activated protein kinase 4, MAP2K4)能編碼MAP激酶信號家族基因,在激活情況下可促使p38或c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinas, JNK)產(chǎn)生磷酸化,并通過促進應(yīng)激活化蛋白激酶途徑激活,參與細胞惡性轉(zhuǎn)化、凋亡等過程[4]。小類泛素化修飾蛋白(small ubiquitination modifying proteins, SUMO)為一類結(jié)構(gòu)與生成、降解循環(huán)通路和泛素化蛋白類似,但功能不同的蛋白質(zhì)翻譯后修飾蛋白,其經(jīng)異肽鍵和靶蛋白結(jié)合后,可調(diào)控靶蛋白各種生物學功能,參與惡性腫瘤發(fā)生進展[5]。乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1, BRCA1)結(jié)構(gòu)、功能異常與性激素有關(guān)的卵巢癌、乳腺癌發(fā)病密切相關(guān),因為子宮內(nèi)膜也屬于性激素作用器官,因此BRCA1可能在EC發(fā)病中也具有一定作用[6]。本研究選取年輕EC患者、子宮內(nèi)膜非典型增生患者、子宮內(nèi)膜正?;颊吒?0例,旨在分析MAP2K4、SUMO-1、BRCA1在年輕EC患者中的表達及臨床意義,現(xiàn)報告如下。
選取2005年11月至2014年3月復旦大學附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院收治的80例年輕EC患者設(shè)為EC組,同期80例子宮內(nèi)膜非典型增生患者設(shè)為非典型增生組、80例行子宮脫垂手術(shù)治療的子宮內(nèi)膜正?;颊咴O(shè)為正常組。其中EC組年齡在26~45歲,平均(38.95±4.92)歲;病理類型:漿液性癌3 例,透明細胞癌6 例,鱗腺癌10 例,子宮內(nèi)膜腺癌61 例;國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(Intemational Federation of Gynecology and Obstetrics, FIGO)分期:Ⅲ~Ⅳ期19例,Ⅰ~Ⅱ期61例;組織分化程度:中低分化(G2~G3)41例,高分化(G1)39例;肌層浸潤深度:≥1/2者46例,<1/2者34例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移:有21例,無59例。非典型增生組年齡24~44歲,平均(38.16±4.05)歲。正常組年齡在24~45歲,平均(37.89±4.37)歲;子宮內(nèi)膜類型:萎縮型內(nèi)膜13例,分泌期內(nèi)膜29例,增殖期內(nèi)膜38例。3組年齡對比,無顯著差異(P>0.05),本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會同意。
EC組經(jīng)術(shù)后病理檢查證實為EC,術(shù)前未采取放化療;非典型增生組、正常組經(jīng)手術(shù)病理檢查證實為子宮內(nèi)膜非典型增生患者、子宮內(nèi)膜正?;颊?;3組臨床資料完整,年齡均≤45歲,知曉本研究方案,自愿簽訂知情同意書。
合并血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病者;合并其他惡性腫瘤者;合并腎、肝、心等臟器功能嚴重障礙者;合并全身感染、腦血管疾病者。
①MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達檢測:所有組織標本均以甲醛(4%)固定,并制作厚4μm的石蠟切片,以免疫組織化學SP法檢測組織中MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達,試劑盒均購自北京中山金橋生物有限公司,有關(guān)操作由醫(yī)院專業(yè)檢測人員嚴格按照試劑盒說明書執(zhí)行,一抗均依據(jù)1:100比例進行稀釋,將已知陽性片設(shè)為陽性對照,磷酸鹽緩沖液(PBS)替代一抗設(shè)為陰性對照。②結(jié)果判定:MAP2K4、SUMO-1蛋白主要是于細胞質(zhì)內(nèi)表達,有時在細胞核內(nèi)表達,BRCA1蛋白在細胞質(zhì)、細胞核內(nèi)均有表達,陽性表現(xiàn)為細胞質(zhì)與(或)細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕褐色、棕黃色或黃色顆粒,于400倍顯微鏡下對每張切片隨機選取10個高倍鏡視野,按照陽性染色細胞占比與染色強度實施評分,陽性染色細胞占比:>50%計3分,26%~50%計2分,10%~25%計1分,<10%計0分;染色強度:棕褐色計3分,棕黃色計2分,淡黃色計1分,不著色計0分,將陽性染色細胞占比與染色強度兩項評分相加,得分為0~1分為陰性,≥2分為陽性[7]。
①對比3 組子宮內(nèi)膜組織MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達情況;②分析MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達與EC組患者臨床病理參數(shù)(病理類型、臨床分期、組織分化程度、肌層浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)的關(guān)系; ③觀察MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達與EC組患者5年生存率的關(guān)系。
所得研究數(shù)據(jù)納入SPSS 23.0軟件中處理,計數(shù)資料以[n(%)]表示,采用χ2檢驗,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
EC組子宮內(nèi)膜組織MAP2K4、BRCA1表達低于非典型增生組、正常組(MAP2K4:χ2值分別32.89、50.26;BRCA1:χ2值分別14.48、60.67,均P <0.05),SUMO-1表達高于非典型增生組、正常組(χ2值分別21.19、61.20,均P<0.05),見表1。
MAP2K4表達與EC組患者病理類型之間無顯著相關(guān)性(P >0.05);臨床分期為Ⅲ~Ⅳ期、組織分化程度為中低分化、肌層浸潤深度≥1/2、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移EC組的患者MAP2K4表達均低于臨床分期為Ⅰ~Ⅱ期、組織分化程度為高分化、肌層浸潤深度<1/2、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者(均P<0.05),見表2。
SUMO-1表達與EC組患者病理類型之間無顯著相關(guān)性(P >0.05);臨床分期為Ⅲ~Ⅳ期、組織分化程度為中低分化、肌層浸潤深度≥1/2、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移EC組的患者SUMO-1表達均高于臨床分期為Ⅰ~Ⅱ期、組織分化程度為高分化、肌層浸潤深度<1/2、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者(均P<0.05),見表3。
表1 3組患者子宮內(nèi)膜組織MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達比較[n(%)]Table 1 Comparison of the expression of MAP2K4, SUMO-1 and BRCA1 in endometrial tissues among the three groups[n(%)]
表2 MAP2K4表達與EC組患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系[n(%)]Table 2 The relationship between MAP2K4 expression and pathological parameters in EC group [n(%)]
表3 SUMO-1表達與EC組患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系[n(%)]Table 3 The relationship between SUMO-1 expression and pathological parameters in EC group [n(%)]
BRCA1表達與EC組患者病理類型之間無顯著相關(guān)性(P >0.05);臨床分期為Ⅲ~Ⅳ期、組織分化程度為中低分化、肌層浸潤深度≥1/2、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的EC組患者BRCA1表達均低于臨床分期為Ⅰ~Ⅱ期、組織分化程度為高分化、肌層浸潤深度<1/2、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者(均P<0.05),見表4。
表4 BRCA1表達與EC組患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系[n(%)]Table 4 The relationship between BRCA1 expression and pathological parameters in EC group [n(%)]
MAP2K4、BRCA1在EC組織中呈陽性表達者5年生存率高于陰性表達者,SUMO-1在EC組織中呈陽性表達者5年生存率低于陰性表達者(均P<0.05),見表5。
表5 MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表達與EC組患者5年生存率的關(guān)系[%(n/N)]Table 5 The relationship between MAP2K4, SUMO-1 and BRCA1 expression and 5-year survival rate in EC group[%(n/N)]
EC 屬于婦科常見惡性腫瘤,發(fā)病率及病死率較高,實現(xiàn)疾病早期防治對改善患者預(yù)后尤為重要[8-9]。臨床研究指出,EC發(fā)病是涉及多因素的生物學過程,體內(nèi)存在多種腫瘤有關(guān)基因可參與調(diào)控,由于抑癌基因或癌基因調(diào)節(jié)細胞周期失常致使細胞出現(xiàn)癌變是EC發(fā)病重要機制[10-11]。
MAP2K4為MAPK家族中一員,屬于一種抑癌基因,本研究顯示,EC 組子宮內(nèi)膜組織MAP2K4 表達低于非典型增生組、正常組,且臨床分期為Ⅲ~Ⅳ期、組織分化程度為中低分化、肌層浸潤深度≥1/2、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的EC 患者MAP2K4 表達低于臨床分期為Ⅰ~Ⅱ期、組織分化程度為高分化、肌層浸潤 深度<1/2、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。表明EC患者子宮內(nèi)膜組織中MAP2K4呈低表達,且表達同患者臨床分期、組織分化程度、肌層浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理參數(shù)密切相關(guān)。MAP2K4基因位置處于第17號染色體,在MAPK的信號傳導途徑中起著重要作用,可激活p38 MAPK及JNK兩個下游目標,影響細胞病變及衰亡[12]。有研究發(fā)現(xiàn),在人上皮性腫瘤尤其是乳腺癌與卵巢癌患者體內(nèi),MAP2K4可以7%~10%速率丟失,作為一種抑癌基因,可對乳腺癌、卵巢癌等腫瘤起到抑制作用[13]。張競[14]研究指出,EC組織內(nèi)MAP2K4表達低于子宮內(nèi)膜增生及子宮內(nèi)膜正?;颊?,且表達與腫瘤臨床分期、分化程度等密切相關(guān)。亦提示可將MAP2K4作為EC早期篩查、惡性程度判斷的重要依據(jù)。
SUMO分子在進化中有高度保守性,廣泛存在于真菌、植物、動物中,SUMO化修飾過程包括分離、連結(jié)、綴合、激活、成熟等步驟[15]。本研究結(jié)果中,EC組子宮內(nèi)膜組織SUMO-1表達高于非典型增生組、正常組,且臨床分期為Ⅲ~Ⅳ期、組織分化程度為中低分化、肌層浸潤深度≥1/2、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的EC患者SUMO-1表達高于臨床分期為Ⅰ~Ⅱ期、組織分化程度為高分化、肌層浸潤深度<1/2、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。表明EC患者子宮內(nèi)膜組織中SUMO呈高表達,且表達與患者臨床分期、組織分化程度、肌層浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理參數(shù)密切相關(guān)。韓志堅等[16]研究指出,p53、鼠雙微體2(mouse bimicrosome 2, MDM2)、早幼粒細胞性白血病基因(promyelocytic leukemia gene, PML)等癌基因及抑癌基因的功能均可受到SUMO化修飾調(diào)節(jié),SUMO化修飾在癌癥發(fā)生、進展、轉(zhuǎn)移中均扮演著重要角色。同時,相關(guān)研究報道,SUMO-1可調(diào)控雌激素受體α(estrogen receptor alpha, ERα)蛋白及其他多組蛋白質(zhì)表達及功能,以此促進EC發(fā)生、進展[17]。亦說明SUMO-1在EC發(fā)生、進展中起著重要作用。
BRCA1 為遺傳性卵巢癌、乳腺癌易感基因,且屬于抑癌基因之一,本研究中,EC 組子宮內(nèi)膜組織BRCA1 表達低于非典型增生組、正常組,臨床分期為Ⅲ~Ⅳ期、組織分化程度為中低分化、肌層浸潤 深度≥1/2、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的EC患者BRCA1表達低于臨床分期為Ⅰ~Ⅱ期、組織分化程度為高分化、肌層浸潤深度<1/2、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。說明EC患者子宮內(nèi)膜組織中BRCA1呈低表達,且表達與患者臨床分期、組織分化程度、肌層浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理參數(shù)具有密切關(guān)系。有研究指出,BRCA1在DNA雙鏈斷裂修復過程中發(fā)揮著重要作用,可參與DNA形成與蛋白表達、保持基因組的穩(wěn)定性、細胞程序性衰亡、細胞增殖等過程[18]。若BRCA1產(chǎn)生基因突變可致使細胞基因穩(wěn)定性受到破壞,對外界環(huán)境變化的敏感性增高,且可干擾機體內(nèi)DNA損傷監(jiān)測,影響細胞中DNA損傷修復,從而造成基因表達產(chǎn)物發(fā)生改變,例如,無法產(chǎn)生蛋白產(chǎn)物或蛋白缺陷,會使抑制腫瘤作用減弱,進而造成腫瘤發(fā)生、進展。趙寧等[19]研究亦表明,BRCA1基因突變與其蛋白表達降低具有顯著相關(guān)性,且其蛋白表達下降與EC發(fā)生、進展具有密切關(guān)系。
本研究還觀察了MAP2K4、SUMO-1、BRCA1與EC患者預(yù)后的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)MAP2K4、BRCA1在EC組織中呈陽性表達者5年生存率高于陰性表達者,SUMO-1在EC組織中呈陽性表達者5年生存率低于陰性表達者。提示三者與患者生存率也有密切關(guān)系,其具體原因仍有待將來進一步探討。
綜上,MAP2K4、BRCA1在年輕EC患者中呈低表達,SUMO-1呈高表達,且三者表達與患者臨床分期、組織分化程度、肌層浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理參數(shù)及生存率密切相關(guān),可將其作為疾病惡性程度、預(yù)后評定的重要依據(jù)。