張海濤， 張宇新

華北理工大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河北省慢性疾病基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)重點實驗室，河北 唐山 063210

乳腺癌是一種常見的惡性腫瘤，也是全球范圍內(nèi)女性罹患最多的惡性腫瘤之一，每年全球會新增270萬患者[1]。目前，乳腺癌的臨床治療方法主要包括手術(shù)治療、化療、放射治療等[2-3]。但手術(shù)治療對于已經(jīng)發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者治療效果較差，預(yù)后不良；化療聯(lián)合放射治療主要用于中晚期或者已經(jīng)發(fā)生遠端轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者，毒副作用大，患者生存質(zhì)量差。因此，有效提高乳腺癌患者的治療效果、尋找潛在的分子靶點、提高患者的生存質(zhì)量和預(yù)后、延緩腫瘤進程、降低惡性腫瘤的死亡率顯得尤為重要。

微小RNA(microRNA，miRNA)是一類調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄和表達水平的非編碼小分子RNA，可通過靶向結(jié)合mRNA，直接降解或者抑制靶mRNA翻譯，參與細胞生長、增殖等調(diào)控過程。miRNA在不同腫瘤組織和細胞中的表達量具有顯著差異，并通過調(diào)節(jié)腫瘤細胞的增殖、侵襲等相關(guān)基因的表達，最終影響腫瘤細胞的生長、轉(zhuǎn)移和血管生成等。研究發(fā)現(xiàn)，miRNA表達譜在正常乳腺組織和乳腺癌組織中的表達量具有明顯差異，提示miRNA與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4-5]。其中，miR-148a在乳腺癌組織中的表達量較正常組織顯著降低，并對乳腺癌的惡性演進過程具有一定的抑制作用[6-7]。惡性腫瘤細胞具有高水平有氧糖酵解的代謝特點，有氧糖酵解代替正常細胞的氧化磷酸化過程成為腫瘤細胞主要的糖代謝途徑[8-9]。乳腺癌組織比正常組織生長迅速，不僅需要更多的能量，還需要生長過程所需的生物大分子，而糖酵解過程產(chǎn)生的中間產(chǎn)物可被腫瘤細胞用于合成生長過程中所需的蛋白質(zhì)、核苷酸等物質(zhì)[9]。糖酵解代謝作為乳腺癌細胞的主要代謝特征之一，其分子調(diào)控機制尚不清楚，且miR-148a對乳腺癌細胞糖代謝功能的影響也尚未見報道。

己糖激酶2(hexokinase 2，HK2)是糖酵解途徑的首要關(guān)鍵酶，直接決定進入糖酵解的葡萄糖量。研究表明，雖然HK2在正常組織中的表達量較低，但在包括乳腺癌在內(nèi)的大多數(shù)惡性腫瘤細胞中的表達量顯著增加[10-11]，且當(dāng)乳腺癌組織發(fā)生轉(zhuǎn)移時，HK2的表達量進一步升高[12]。提示HK2在乳腺癌細胞增殖、凋亡、侵襲、放化療敏感性中發(fā)揮著重要作用。

為了探討miR-148a是否通過靶向調(diào)控HK2來抑制乳腺癌細胞糖酵解代謝，本實驗擬通過檢測多種乳腺癌細胞系中miR-148a的表達量，從中篩選miR-148a表達量相對較低的乳腺癌細胞系作為研究對象。再通過觀察miR-148a表達量的變化對乳腺癌細胞葡萄糖攝取量、乳酸生成量和細胞增殖指標的影響，以探究miR-148a對乳腺癌細胞糖代謝能力的影響。隨后，通過TargetScan在線數(shù)據(jù)庫預(yù)測miR-148a和HK2基因的靶向關(guān)系，再通過雙熒光素酶報告實驗、Western免疫印跡以及基因回復(fù)實驗進行驗證，以進一步明確miR-148a和HK2在乳腺癌細胞的糖酵解代謝途徑中的作用機制，以期初步闡明miR-148a調(diào)控乳腺癌細胞糖酵解功能的分子機制。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

RPMI 1640培養(yǎng)基、胎牛血清購于美國Gibco公司；RIPA蛋白裂解液、BCA蛋白濃度檢測試劑盒、辣根過氧化物酶標記的二抗、青-鏈霉素購于上海碧云天生物公司；NC膜、ECL發(fā)光試劑盒購于美國Milipore公司；SDS、Tris-base、丙烯酰胺購于美國BioSharp公司；miR-148a mimics(miR-148a過表達載體)、anti-miR-148a(miR-148a抑制載體)、miR-negative control(陰性對照)、pcDNA-HK2(HK2基因過表達載體)、HK2-MUT和HK2-WT熒光素酶報告基因載體購于上海吉瑪生物制藥有限公司；Opti-MEM培養(yǎng)基、Lipofectamine TM2000購于美國Invitrogen公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒、實時熒光定量PCR試劑盒購于北京康為試劑有限公司；雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒購于北京威格拉斯公司；葡萄糖檢測試劑盒購于上海榮盛生物藥業(yè)有限公司；乳酸檢測試劑盒購于美國Biovision公司；兔抗HK2、兔抗GAPDH購于美國Proteintech公司。

酶標儀(美國Bio-Rad公司)；PCR儀(美國ABI公司)；WB顯影儀(美國ProteinSample公司)。

1.2 細胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染

人正常乳腺細胞Hs 578Bst和人乳腺癌細胞MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB231分別采用含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基在37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

以對數(shù)生長期的細胞為轉(zhuǎn)染對象，根據(jù)Lipofectamine TM2000轉(zhuǎn)染試劑說明書將不同基因表達載體轉(zhuǎn)染其中。6 h后，觀察細胞狀態(tài)并更換培養(yǎng)基。篩選miR-148a表達量相對較低的乳腺癌細胞實驗所用的細胞不需要進行事先轉(zhuǎn)染。

1.3 qRT-PCR檢測乳腺細胞和不同乳腺癌細胞中miR-148a mRNA的表達情況

收集人正常乳腺細胞Hs 578Bst和人乳腺癌細胞MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB231提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以GAPDH為內(nèi)參，采用qRT-PCR試劑盒通過PCR儀擴增檢測，最終數(shù)據(jù)使用2-ΔΔCt方法分析。引物序列見表1。逆轉(zhuǎn)錄和qRT-PCR相應(yīng)的反應(yīng)體系和反應(yīng)程序均按照試劑盒說明書操作。選擇miR-148a表達量相對較低的乳腺癌細胞系作為后續(xù)研究對象。

表1 qRT-PCR所用引物Table 1 Primers used for qRT-PCR

1.4 miR-148a對乳腺癌細胞糖代謝能力的影響

分別轉(zhuǎn)染miR-148a mimics、anti-miR-148a和miR-negative control至1.3篩選出的乳腺癌細胞系中，以未轉(zhuǎn)染細胞作為空白對照，并檢測相關(guān)指標(具體如下)，以探究miR-148a對乳腺癌細胞糖代謝能力的影響。

1.4.1qRT-PCR檢測miR-148a不同表達載體在乳腺癌細胞系中的表達情況 轉(zhuǎn)染48 h后，收集乳腺癌細胞提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后進行qRT-PCR，具體操作同1.3。

1.4.2測定細胞葡萄糖攝取量 將乳腺癌細胞以每孔1×105個加入6孔板中，更換為無血清培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h后，收集細胞培養(yǎng)液，室溫1 000 r·min-1， 離心5 min，去除沉淀雜質(zhì)，即為上清液。

采用葡萄糖檢測試劑盒進行測定，操作步驟如下：①工作液的配制：R1試劑∶R2試劑=1∶1，混合均勻后使用；②空白管、校準管、樣本管的配置：工作液1 000 μL，分別加蒸餾水、校準液、上清液10 μL；③加樣后用渦旋振蕩器充分混勻，置于 37 ℃ 恒溫水浴鍋中水浴反應(yīng)10 min；④使用酶標儀，波長500 nm，以空白管調(diào)零，讀取校準管和樣本管的吸光度；⑤按照試劑盒說明書計算上清液中葡萄糖水平，即為細胞的葡萄糖攝取量。

1.4.3測定細胞乳酸生成量 用乳酸鹽標準品建立標準曲線；按照1.4.2中的方法獲得上清液，吸取20 μL上清液、26 μL緩沖液、2 μL乳酸酶混合物混合均勻，室溫下靜置30 min，置于酶標儀中檢測其在570 nm波長下的吸光度，根據(jù)標準曲線計算上清液中乳酸水平，即為細胞的乳酸生成量。

1.4.4BrdU法檢測細胞增殖能力 將乳腺癌細胞接種于96孔板中，并調(diào)整細胞密度為1×104個·孔-1，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。用PBS緩沖液將1 000×BrdU稀釋為10×BrdU，再加入細胞培養(yǎng)基調(diào)整為1×BrdU，繼續(xù)培養(yǎng)6 h。棄去原培養(yǎng)基，每孔加入200 μL FixDenat液，37 ℃孵育30 min；棄去FixDenat液，每孔加入100 μL anti-BrdU-POD溶液，37 ℃孵育90 min；棄去anti-BrdU-POD溶液，用PBS緩沖液清洗2次，每孔加入100 μL終止液，置于酶標儀中檢測細胞在370 nm下的吸光值。存儲分析數(shù)據(jù)。

1.5 miR-148a和HK2對乳腺癌細胞的糖酵解功能的影響

首先，通過TargetScan在線數(shù)據(jù)庫(http://www.targetscan.org/vert_71/)預(yù)測miR-148a與HK2基因的靶向關(guān)系，再通過雙熒光素酶報告實驗、Western免疫印跡以及基因回復(fù)實驗進行驗證。

1.5.1雙熒光素酶報告實驗 將含有miR-148a結(jié)合位點的HK2的3′-UTR片段插入PGL3熒光素酶報告基因載體，構(gòu)建野生型HK2(HK2-WT)和突變型HK2(HK2-MUT)的3′-UTR熒光素酶報告載體(上海吉瑪生物制藥有限公司)，并分別共轉(zhuǎn)染miR-148a mimics和anti-miR-148a至1.3篩選出的乳腺癌細胞系中，37 ℃、5%CO2培養(yǎng)48 h，收集細胞，測定雙熒光素酶的活性，以未轉(zhuǎn)染細胞作為對照，具體按照試劑盒說明書操作。

1.5.2Western免疫印記檢測HK2蛋白的表達情況 將miR-148a mimics、anti-miR-148a和miR-negative control轉(zhuǎn)染至1.3篩選出的乳腺癌細胞系中，37 ℃、5%CO2培養(yǎng)48 h后，收集細胞，以未轉(zhuǎn)染細胞作為空白對照，提取總蛋白。使用10%的SDS-PAGE膠進行電泳分離，使用NC膜轉(zhuǎn)膜后用含5%牛血清白蛋白的TBST溶液室溫封閉2 h，在4 ℃冰箱內(nèi)搖床孵育HK2(1∶1 000稀釋)、GAPDH(1∶3 000稀釋)一抗過夜，再于室溫下?lián)u床孵育二抗(1∶5 000稀釋)2 h。使用化學(xué)發(fā)光法使條帶顯影。

1.5.3基因回復(fù)實驗 分別將pcDNA-HK2和pcDNA-HK2+miR-148a mimics轉(zhuǎn)染至1.3篩選出的乳腺癌細胞系中，以未轉(zhuǎn)染細胞作為對照，再按照1.4.2～1.4.4所述步驟，測定miR-148a和HK2表達量的變化對乳腺癌細胞葡萄糖攝取量、乳酸生成量和細胞增殖指標的影響。

1.6 數(shù)據(jù)分析

用Prism 6軟件作圖、分析，實驗均進行3次重復(fù)，兩組之間比較采用Student’st檢驗。以P<0.05認為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 miR-148a在不同乳腺癌細胞系中的表達情況

為了觀察多種不同乳腺癌細胞系中miR-148a的表達情況，通過qRT-PCR檢測MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB231 3種乳腺癌細胞系中miR-148a mRNA表達水平。與人正常乳腺細胞Hs 578Bst相比，miR-148a在乳腺癌細胞系(MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB231)中的表達量均明顯降低，分別降低了1.8、2.2、3.1倍，尤其是在乳腺癌細胞系MDA-MB231中表達量顯著降低(P<0.000 1)(圖1)。為了便于研究miR-148a的功能，選擇miR-148a表達量相對較低的乳腺癌細胞MDA-MB231作為后續(xù)研究的對象。

注：****表示miR-148a在MDA-MB231和Hs 578Bst中的相對表達量的差異在P<0.000 1水平上具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2 miR-148a對乳腺癌細胞糖代謝能力的影響

2.2.1過表達miR-148a對MDA-MB231細胞的影響 MDA-MB231細胞培養(yǎng)至匯合率大于80%，分別將miR-negative control(陰性對照)和miR-148a mimics轉(zhuǎn)染其中，以未轉(zhuǎn)染細胞作為空白對照。為了檢測miR-148a在MDA-MB231細胞中的轉(zhuǎn)染效率，48 h后通過qRT-PCR檢測miR-148a mRNA表達水平，發(fā)現(xiàn)與空白對照組相比，miR-148a在MDA-MB231中表達量上升2.3倍(P<0.001)(圖2A)。按照公式計算檢測過表達miR-148a后MDA-MB231細胞葡萄糖攝取量的變化，結(jié)果顯示，與空白對照組相比，MDA-MB231細胞葡萄糖攝取量下降了1.8倍(P<0.01)(圖2B)。通過建立乳酸標準曲線檢測過表達miR-148a后MDA-MB231細胞乳酸生成量的變化，發(fā)現(xiàn)與空白對照組相比，MDA-MB231細胞乳酸生成量下降了2.4倍(P<0.001)(圖2C)。通過BrdU法檢測過表達miR-148a后對MDA-MB231細胞增殖的變化，結(jié)果顯示，與空白對照組相比，MDA-MB231細胞增殖指標下降了2.2倍(P<0.001)(圖2D)。

注：**和***分別表示miR-148a mimics組與空白對照組在同一指標上的差異在P<0.01和P<0.001水平上具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2.2抑制miR-148a表達對MDA-MB231細胞的影響 MDA-MB231細胞培養(yǎng)至匯合率大于80%，分別轉(zhuǎn)染miR-negative control和anti-miR-148a到MDA-MB231細胞中，以未轉(zhuǎn)染細胞作為空白對照。為了檢測miR-148a在MDA-MB231中的轉(zhuǎn)染效率，48 h后通過qRT-PCR檢測miR-148a mRNA表達水平，發(fā)現(xiàn)與空白對照組細胞相比，miR-148a在MDA-MB231中表達量下降10.0倍(P<0.000 1)(圖3A)。通過公式計算抑制miR-148a表達后MDA-MB231細胞葡萄糖攝取量的變化，結(jié)果顯示，與空白對照組相比，MDA-MB231細胞葡萄糖攝取量上升了1.6倍(P<0.01)(圖3B)。通過建立乳酸標準曲線檢測抑制miR-148a表達后MDA-MB231細胞乳酸生成量的變化，發(fā)現(xiàn)與空白對照組相比，MDA-MB231細胞乳酸生成量上升了1.7倍(P<0.01)(圖3C)。通過BrdU法檢測抑制miR-148a表達后對MDA-MB231細胞增殖的變化，結(jié)果顯示，與空白對照組相比，MDA-MB231細胞增殖指標上升了1.6倍(P<0.01)(圖3D)。

2.3 miR-148a和HK2對乳腺癌細胞的糖酵解代謝功能的影響

2.3.1miR-148a與HK2靶向關(guān)系預(yù)測 為了探究HK2是否為miR-148a的直接靶分子，采用TargetScan在線數(shù)據(jù)庫(http://www.targetscan.org/vert_71/)進行預(yù)測，發(fā)現(xiàn)miR-148a與HK2基因3′-UTR區(qū)具有部分結(jié)合位點(圖4A)。

注：**和****分別表示Anti-miR-148a組和空白對照組在同一指標上的差異在P<0.01和P<0.000 1水平上具有統(tǒng)計學(xué)意義。

注：*、**和****分別表示處理組和對照組在同一指標上的差異在P<0.05、P<0.01和P<0.000 1水平上具有統(tǒng)計學(xué)意義；NS表示差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.3.2雙熒光素酶報告實驗 為了明確miR-148a與HK2的靶向關(guān)系，將miR-148a與HK2基因3′-UTR結(jié)合的區(qū)域進行突變，并分別構(gòu)建含有PGL3熒光素酶報告基因的野生型HK2(HK2-WT)和突變型HK2(HK2-MUT)3′-UTR載體。將miR-148a mimics分別與HK2-WT和HK2-MUT共轉(zhuǎn)染到MDA-MB231細胞中，48 h后，通過雙熒光素酶報告實驗觀察miR-148a與野生型(HK2-WT)和突變型(HK2-MUT)mRNA結(jié)合的程度。結(jié)果顯示，HK2-WT組雙熒光素酶的活性下降2.8倍(P<0.000 1)，而HK2-MUT組雙熒光素酶的活性無明顯改變(圖4B)。將anti-miR-148a分別與HK2-WT和HK2-MUT共轉(zhuǎn)染到MDA-MB231細胞中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HK2-WT組雙熒光素酶的活性上升2.2倍(P<0.01)，而HK2-MUT組雙熒光素酶的活性無明顯改變(圖4C)。說明，miR-148a與野生型HK23′-UTR熒光素酶報告載體結(jié)合，不與突變型HK23′-UTR結(jié)合。

2.3.3Western免疫印跡檢測 為了進一步驗證miR-148a對HK2的調(diào)控作用，通過Western免疫印跡檢測過表達和抑制miR-148a表達后MDA-MB231細胞中的HK2蛋白水平，結(jié)果顯示，與空白對照組相比，過表達miR-148a組MDA-MB231乳腺癌細胞中的HK2蛋白表達量下降2.4倍(P<0.000 1)，抑制miR-148a表達組MDA-MB231乳腺癌細胞中的HK2蛋白表達量上升1.2倍(P<0.05)(圖4D、E)。

2.3.4miR-148a可逆轉(zhuǎn)HK2過表達所致促葡萄糖攝取效應(yīng) 為了觀察HK2基因?qū)DA-MB231細胞葡萄糖攝取量的作用，把HK2基因過表達載體pcDNA-HK2轉(zhuǎn)染到MDA-MB231細胞中，48 h后，通過公式計算檢測過表達HK2基因后MDA-MB231細胞葡萄糖攝取量的變化，結(jié)果顯示，與空白對照組相比，HK2過表達可使MDA-MB231細胞葡萄糖攝取量上升1.6倍(P<0.01)(圖5A)。

為了探究miR-148a調(diào)控HK2基因的表達對MDA-MB231細胞葡萄糖攝取量的作用，將pcDNA-HK2與miR-148a mimics共轉(zhuǎn)染MDA-MB231細胞中，結(jié)果發(fā)現(xiàn) MDA-MB231細胞葡萄糖攝取量上升1.2倍，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(圖5A)。

2.3.5miR-148a可逆轉(zhuǎn)HK2過表達所致促乳酸生成效應(yīng) 為了觀察HK2基因?qū)DA-MB231細胞乳酸生成量的作用，把pcDNA-HK2轉(zhuǎn)染到MDA-MB231細胞中，48 h后，通過建立乳酸標準曲線檢測過表達HK2基因后MDA-MB231細胞乳酸生成量的變化，結(jié)果顯示，與空白對照組相比，MDA-MB231細胞乳酸的生成量上升1.5倍(P<0.01)(圖5B)。

為了探究miR-148a調(diào)控HK2基因的表達對MDA-MB231細胞乳酸生成量的作用，將pcDNA-HK2與miR-148a mimics共轉(zhuǎn)染MDA-MB231細胞，結(jié)果顯示，MDA-MB231細胞乳酸生成量沒有明顯變化(P>0.05)(圖5B)。

2.3.6miR-148a可逆轉(zhuǎn)HK2過表達所致促細胞增殖效應(yīng) 為了觀察HK2基因?qū)DA-MB231細胞增殖作用的影響，把pcDNA-HK2轉(zhuǎn)染到MDA-MB231細胞中，48 h后，通過BrdU法檢測過表達HK2基因后MDA-MB231細胞增殖的變化，結(jié)果顯示，與空白對照組相比，MDA-MB231細胞增殖指標上升1.7倍(P<0.01)(圖5C)。

為了探究miR-148a調(diào)控HK2基因的表達對MDA-MB231細胞增殖的影響，pcDNA-HK2與miR-148a mimics共轉(zhuǎn)染MDA-MB231細胞，結(jié)果顯示，MDA-MB231細胞增殖沒有出現(xiàn)明顯的變化(P>0.05)(圖5C)。

注：**表示pcDNA-HK2組與對照組在同一指標上的差異在P<0.01水平上具有統(tǒng)計學(xué)意義；NS表示差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

3 討論

幾乎所有的腫瘤中均出現(xiàn)miRNA的異常表達，并與腫瘤細胞的惡性生物學(xué)行為(如侵襲、增殖、轉(zhuǎn)移等)密切相關(guān)[13-14]。已發(fā)現(xiàn)miR-320、miR-770、miR-421、miR-1246、miR-27a等miRNA可通過抑制癌基因的表達負向調(diào)控乳腺癌細胞的增殖或遷移、侵襲[15-19]。本研究中，miR-148a在MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB231 3種乳腺癌細胞系中mRNA表達水平均明顯下降，提示miR-148a與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展存在一定關(guān)系。為了便于研究miR-148a的功能，本研究選擇miR-148a表達量相對較低的乳腺癌細胞MDA-MB231作為研究對象。

與正常組織細胞相比，糖酵解過程在惡性腫瘤組織中明顯增強，而且即使在有氧環(huán)境中，惡性腫瘤細胞仍以糖酵解為主要的葡萄糖代謝途徑，而不是產(chǎn)生更多ATP的氧化磷酸化途徑[20]。本研究結(jié)果顯示，在MDA-MB231細胞中過表達miR-148a可使細胞葡萄糖攝取量降低、乳酸生成量下降，并抑制細胞增殖；而抑制miR-148a表達，則增加葡萄糖攝取量和乳酸生成量，促進細胞增殖，提示miR-148a可抑制乳腺癌細胞的糖酵解能力和細胞增殖能力。

HK2作為糖酵解過程中重要的限速酶，通過催化葡萄糖分解為6-磷酸葡萄糖成為糖酵解發(fā)生的第一步關(guān)鍵調(diào)控酶，其在正常組織中的表達量較少但在腫瘤組織中的表達量異常[10-11]，是導(dǎo)致腫瘤細胞糖酵解過程增強的重要原因之一。研究顯示，多種miRNA可靶向調(diào)控HK2的表達進而調(diào)控腫瘤的糖酵解代謝途徑[21-22]。本研究通過TargetScan在線數(shù)據(jù)庫的預(yù)測結(jié)果，選取糖酵解限速酶HK2作為miR-148a的靶向抑制對象。雙熒光素酶報告實驗發(fā)現(xiàn)，miR-148a靶向HK2的3′-UTR，而突變位點未與miR-148a靶向結(jié)合，因此推測miR-148a可以靶向結(jié)合HK2mRNA的3′-UTR，抑制其蛋白質(zhì)翻譯過程。Western免疫印跡結(jié)果顯示，過表達或抑制miR-148a的表達可以分別抑制或促進HK2基因表達，提示miR-148a能夠靶向抑制HK2表達。為了進一步驗證miR-148a可通過靶向抑制HK2來調(diào)控乳腺癌細胞的糖酵解能力，本實驗通過轉(zhuǎn)染過表達HK2載體，發(fā)現(xiàn)HK2基因過表達，可顯著增加細胞葡萄糖攝取量、乳酸生成量，并促進細胞增殖；將過表達miR-148a載體與過表達HK2載體共轉(zhuǎn)染MDA-MB231細胞，miR-148a則可逆轉(zhuǎn)HK2所致的葡萄糖攝取量增加和乳酸生成量上升，并抑制細胞增殖，提示miR-148a可抑制乳腺癌細胞MDA-MB231的糖酵解和促細胞增殖能力。

綜上所述，過表達miR-148a可以靶向抑制HK2基因的表達，導(dǎo)致乳腺癌細胞的葡萄糖攝取量下降、乳酸生成減少、細胞增殖降低，可為乳腺癌靶向治療提供新靶點。但本研究僅進行了體外細胞實驗，還需進行體內(nèi)實驗及臨床實驗研究，以期為乳腺癌診斷及評估患者預(yù)后提供分子標志物。