王 輝，王秀云，焦緒娜，尹延敏，逄賓賓

（濰坊華英生物科技有限公司，濰坊 261108）

小鵝瘟是由我國(guó)學(xué)者方定一[1]于1956年首先發(fā)現(xiàn)的，經(jīng)過(guò)國(guó)內(nèi)學(xué)者多年的研究，成功研制出小鵝瘟種鵝弱毒疫苗、雛鵝弱毒疫苗及高免血清，使該病已經(jīng)得到良好的控制。但自2015年以來(lái)，在我國(guó)肉鴨群中不斷出現(xiàn)鴨短喙、舌外伸、生長(zhǎng)發(fā)育受阻為特征性的疾病，該病自發(fā)生以來(lái)給我國(guó)養(yǎng)鴨業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。后經(jīng)病原體的分離鑒定知，引起該病的主要病原體為新型鵝細(xì)小病毒（Novel goose parvovirus）[2-9]。本文將從“鴨短喙侏儒綜合癥”的流行病學(xué)、臨床癥狀及剖檢病理變化、部分生物學(xué)特性、檢測(cè)方法四個(gè)方面與小鵝瘟進(jìn)行對(duì)比綜合闡述。

1 流行病學(xué)

小鵝瘟自然感染僅引起雛鵝和雛番鴨發(fā)病，鵝的易感性隨著年齡的增長(zhǎng)而減弱。主要侵害4～20日齡雛鵝，1周齡以?xún)?nèi)的雛鵝死亡率可達(dá)100%，10日齡以上死亡率一般不超過(guò)60%。小鵝瘟病毒可通過(guò)直接或間接接觸傳播和垂直傳播。相比較于經(jīng)典小鵝瘟病毒，新型鵝細(xì)小病毒同樣能接觸傳播和垂直傳播，Chen等[10]從鴨胚和剛出殼雛鴨中檢測(cè)到該病毒，并且分離到2株病毒。新型鵝細(xì)小病毒具有更廣泛的宿主，能引起櫻桃谷鴨、北京鴨、半番鴨、臺(tái)灣白鴨等商品肉鴨發(fā)病[2-7,11-12]，發(fā)病日齡為6～40日齡，發(fā)病率為5%～20%，病死率低，發(fā)病鴨絕大多數(shù)成為僵鴨。

2015年陳浩等[2]從山東、江蘇等地發(fā)病的櫻桃谷肉鴨群首次分離到病毒并報(bào)道到該病的發(fā)生，同年李傳峰等[3]從安徽某發(fā)病鴨群中對(duì)該病毒進(jìn)行了分離并鑒定。至此，安徽、山東、江蘇、甘肅、四川等地陸續(xù)出現(xiàn)該病的報(bào)道，逐漸成流行趨勢(shì)并且發(fā)病率越來(lái)越高[2-13]。

2 臨床癥狀及病理變化

小鵝瘟臨床表現(xiàn)為精神委頓、食欲減少、打盹，排灰白色或淡黃綠色稀糞，并混有氣泡；剖檢發(fā)現(xiàn)，出現(xiàn)空腸和回腸的急性卡他性-纖維素性壞死性腸炎，以及脫落腸粘膜與纖維素性滲出物形成栓子堵塞腸腔。新型鵝細(xì)小病毒主要感染商品肉鴨，患病鴨臨床癥狀表現(xiàn)為短喙、舌外伸、脛骨短粗、跛行、發(fā)育遲緩，也有報(bào)道患病鴨出現(xiàn)癱瘓、拉稀及翅腿易折斷的臨床癥狀；剖檢胰腺針尖樣出血點(diǎn)，肺臟充血、出血，胸腺輕微出血，脾臟少萎縮。陳浩等[2]人工感染雛鴨，出現(xiàn)短喙、舌腫大，舌尖彎曲、變形癥狀（圖1），剖檢胸腺腫大、出血。李琦等[5-6]使用鴨胚傳代尿囊液接種雛鴨同樣復(fù)制出鴨短喙大舌的臨床癥狀。劉榮昌等[7]對(duì)患病半番鴨與同場(chǎng)正常鴨測(cè)量對(duì)比顯示，發(fā)病鴨比正常鴨體重減輕49%，鴨喙縮短22%?；疾▲喕蛘卟∷励喤R床剖解表現(xiàn)為胸腺腫大出血、肝臟腫大、腎臟腫大、胰腺肺臟等組織出血。但是Li等[8]從短喙侏儒綜合征鴨病料中檢測(cè)到新型鵝細(xì)小病毒和鴨圓環(huán)病毒共感染的現(xiàn)象，并且這種現(xiàn)象在我國(guó)東部省份普遍存在，懷疑鴨短喙癥狀是由這倆種病毒共同作用的結(jié)果。

圖1 短喙、大舌臨床癥狀Fig.1 Clinical symptoms of short beak and big tongue

3 生物學(xué)特性

3.1 培養(yǎng)特性 小鵝瘟病毒在感染細(xì)胞的核內(nèi)復(fù)制，初次分離可用鵝胚或番鴨胚，也可用其原代細(xì)胞培養(yǎng)。新型鵝細(xì)小病毒僅可用鴨胚或其原代細(xì)胞分離，未見(jiàn)有使用鵝胚或雞胚分離病毒的報(bào)道。但初期對(duì)鴨胚不具有致死特性，需要盲傳幾代后，鴨胚才呈現(xiàn)規(guī)律性死亡。李琦等[5]將新型鴨細(xì)小病毒DS15株接種SPF鴨胚，盲傳3代鴨胚才出現(xiàn)規(guī)律性死亡，病毒滴度（egg infectious dose，ELD50）達(dá)到10-4.2/0.2 mL。宮曉華等[6]在鴨胚中對(duì)新型鴨細(xì)小病毒進(jìn)行增殖發(fā)現(xiàn)，接種鴨胚后96～120 h出現(xiàn)死亡，胚體全身出血，病毒滴度可到達(dá)（ELD50）10-5.5/0.2 mL。

3.2 病毒基因組特性 小鵝瘟病毒基因組為單鏈線(xiàn)性DNA，全長(zhǎng)5106 bp。鄭肖強(qiáng)[11]分離的新型鵝細(xì)小病毒（SDLC01株）基因組全長(zhǎng)5006 bp，與經(jīng)典GPV核苷酸同源性為92.3%～97.2%。Ge等[12-13]分離的新型鵝細(xì)小病毒（NGPVSC16）基因組全長(zhǎng)5109 bp，該分離株與鄭肖強(qiáng)[11]分離株病毒核苷酸同源性達(dá)到99.6%，但SDCL01分離毒株出現(xiàn)明顯的核苷酸缺失。Li等[14]對(duì)7株新型鵝細(xì)小病毒進(jìn)行了全基因組測(cè)序，并與經(jīng)典的鵝細(xì)小病毒進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn)新型鵝細(xì)小病毒與經(jīng)典鵝細(xì)小病毒核苷酸同源性為92.2%～97.1%。7株新型鵝細(xì)小病毒存在5處共同的核苷酸突變，其中有6株在反向末端重復(fù)序列存在2處14個(gè)堿基對(duì)的缺失。由基因進(jìn)化樹(shù)可以看出新型鵝細(xì)小病毒與經(jīng)典鵝細(xì)小病毒在不同分支上，但同屬于鵝細(xì)小病毒（圖2）。與張經(jīng)偉等[15]對(duì)新型鴨細(xì)小病毒NS1基因序列分析結(jié)果相符合。

圖2 新型鵝細(xì)小病毒基因進(jìn)化樹(shù)Fig.2 Phylogenetic tree of novel goose parvovirus

4 檢測(cè)方法

經(jīng)典鵝細(xì)小病毒常用的檢測(cè)方法包括PCR方法、病毒中和試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、免疫熒光試驗(yàn)（IFA）、膠體金免疫層析技術(shù)、核酸探針技術(shù)、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)等。隨著近年來(lái)新型鵝細(xì)小病毒的出現(xiàn)，檢測(cè)該病毒的方法也不斷建立。高莎莎等[16-17]根據(jù)鴨細(xì)小病毒保守序列設(shè)計(jì)引物分別建立了半套式PCR、套式PCR和熒光定量PCR檢測(cè)方法[16-18]，Yang等[19]建立了快速檢測(cè)新型鵝細(xì)小病毒的實(shí)時(shí)等溫環(huán)介導(dǎo)擴(kuò)增方法，上述方法都具有較高的靈敏度，最低檢出量為100 copies，是普通PCR靈敏度的100倍。鄭肖強(qiáng)等[20]制備鴨細(xì)小病毒的地高辛標(biāo)記探針，該探針與其他鴨病毒雜交反應(yīng)均為陰性，最低檢出量為25 pg，并使用該探針進(jìn)行臨床樣本檢測(cè)，結(jié)果與病毒的分離符合率到達(dá)98%。程龍飛等[21]制備的檢測(cè)水禽源細(xì)小病毒的膠體金試紙條，可以檢測(cè)到鵝細(xì)小病毒、番鴨細(xì)小病毒和新型番鴨細(xì)小病毒，該方法最低檢出量為10-4.7～-5.7ELD50/mL。上述方法具有簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高、特異性好的優(yōu)點(diǎn)，適用于快速臨床診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

Li等[22]建立的鑒別檢測(cè)經(jīng)典鵝細(xì)小病毒和新型鵝細(xì)小病毒的雙重半巢式PCR檢測(cè)方法。通過(guò)對(duì)臨床樣本檢測(cè)得知，所有鴨短喙的病料中新型鵝細(xì)小病毒均為陽(yáng)性，而其余鴨病料中并未檢測(cè)到經(jīng)典鵝細(xì)小病毒，這與鵝細(xì)小病毒只感染鵝和番鴨相符合。由此可以看出，近年來(lái)在我國(guó)肉鴨中引起短喙侏儒綜合征的病毒是新型鵝細(xì)小病毒，而不是其他病原體。

5 小結(jié)

鴨短喙侏儒綜合征是由新型鵝細(xì)小病毒引起的鴨傳染病，臨床癥狀表現(xiàn)為鴨生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、鴨喙變短、舌外伸、腿翅骨骼易折、跛行癱瘓。新型鵝細(xì)小病毒具有更廣泛的宿主，感染宿主包括番鴨、半番鴨、北京鴨、櫻桃谷鴨、臺(tái)灣白鴨等[23-24]，發(fā)病致死率低但多數(shù)成為僵鴨，導(dǎo)致出欄合格率明顯下降，一周齡以后的肉鴨均可能發(fā)病。該病毒可以通過(guò)鴨胚及其原代細(xì)胞進(jìn)行分離培養(yǎng)，盲傳幾代后可在96～120 h致死鴨胚。基因進(jìn)化樹(shù)分析表明新型鵝細(xì)小病毒來(lái)源于經(jīng)典鵝細(xì)小病毒，但病毒基因組相較于經(jīng)典鵝細(xì)小病毒發(fā)生明顯的突變和缺失，可能與病毒基因調(diào)控、免疫應(yīng)答和宿主改變有關(guān)[25]。PCR方法、地高辛探針?lè)ā⒛z體金試紙條等方法都可用于該病的流行病學(xué)調(diào)查和病原檢測(cè)。病原的不斷變異與進(jìn)化對(duì)疫病的防控提出更高的挑戰(zhàn)，本文總結(jié)了關(guān)于新型鵝細(xì)小病毒的流行病學(xué)、生物學(xué)特性、檢測(cè)方法等最新的研究，以期為該病的流行病學(xué)調(diào)查、疾病診斷、病原檢測(cè)提供依據(jù)。