康凱，鄢長余，于遠洋，李娜

（1大連市藥品檢驗所，遼寧 大連；2遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連）

0 引言

清喉咽合劑由玄參、連翹、黃芩、麥冬、地黃5味中藥制成，具有養(yǎng)陰清肺、利咽解毒等功效，臨床用于治療急性扁桃體炎、咽峽炎[1]。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《中國藥典》2015年版一部[2]，但沒有針對麥冬、地黃的檢測項目，為全面有效控制藥品質(zhì)量，本文對清喉咽合劑中麥冬和地黃的薄層鑒別進行探索性研究。麥冬有養(yǎng)陰生津、潤肺清心的功效，據(jù)文獻報道，麥冬皂苷D是其重要的甾體皂苷類化合物，與麥冬的藥理作用密切相關(guān)，是其重要的質(zhì)量控制指標(biāo)之一[3]。地黃具清熱涼血、養(yǎng)陰、生津之功效[4]。梓醇是地黃中含量最高的環(huán)烯醚萜單糖苷，為地黃的主要活性成分[5]；毛蕊花糖苷具有很強的抗炎、抗氧化作用，與地黃生制品的“滋陰”作用相一致[6]。本文建立了以麥冬皂苷D、麥冬對照藥材為對照的薄層鑒別方法鑒別處方中的麥冬。并對處方中的地黃進行了以梓醇、毛蕊花糖苷和地黃對照藥材為對照的薄層色譜探索性研究。

1 材料

1.1 儀器

BS42000S型電子天平（Sartorius）；雙槽薄層層析缸（20×10cm）；超聲波清洗儀（儀器型號：KH-500SP，生產(chǎn)廠家：昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；薄層色譜數(shù)碼成像系統(tǒng)（CAMAG VISUALISER）；半自動點樣儀（CAMAG LINOMAT 5）；硅膠G預(yù)制板（青島譜科分離材料有限公司，20×10cm）。

1.2 試劑試藥

麥冬（批號：121013-201310）、地黃（批號：121180-200604）、梓 醇（批 號：110808-201210）、毛 蕊 花 糖 苷（批 號：110808-201210）均購自中國食品藥品檢定研究院，麥冬皂苷D（批號：PS1500）購自天津一方科技。其他所用試劑試藥均為分析純。實驗用飲片均為廠家提供，經(jīng)檢驗均符合《中國藥典》2015年版一部各飲片項下有關(guān)規(guī)定。本實驗共收集8個廠家61批樣品，樣品來源見表1。

表1 樣品來源

2 方法與結(jié)果

2.1 麥冬的薄層鑒別

取本品10ml，加水飽和正丁醇10ml萃取，分取正丁醇層，水浴蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取麥冬對照藥材1g，加57%乙醇25ml，超聲30min，蒸干，殘渣加水10ml溶解，加水飽和正丁醇10ml萃取，分取正丁醇層，水浴蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為對照藥材溶液。再取麥冬皂苷D對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg 的溶液，作為對照品溶液。按處方中藥味比例，配制不含麥冬的陰性溶液，取此溶液10ml，水浴蒸干，加甲醇1ml，即得。照薄層色譜法（中國藥典2015年版四部通則0502）試驗，吸取上述四種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-乙酸乙酯-水（4∶1∶5）上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，在日光下檢視，供試品色譜中，在與麥冬對照藥材和麥冬皂苷D對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點。

共完成8家企業(yè)61批次樣品的麥冬薄層色譜鑒別，主斑點共計檢出5個，麥冬皂苷D對照品均有檢出，陰性溶液無干擾。詳見圖1-圖5清喉咽合劑薄層色譜示例圖。由圖可知：

（1）1號及6號廠家各個批次之間濃度最均勻，其余廠家均有1至3批次濃度偏高；

（2）2號、5號及6號廠家在Rf值約為0.1處均檢出明顯斑點，而其余廠家對應(yīng)位置處均沒有斑點；

（3）4號廠家在緊挨麥冬皂苷D下，即Rf值在0.4至0.5之間檢出一明顯斑點，其余廠家此處無對應(yīng)斑點。

圖1 清喉咽合劑麥冬薄層鑒別

圖2 清喉咽合劑麥冬薄層鑒別

1-6：供試品溶液（2號廠家）；7-13：供試品溶液（4號廠家）；s：陰性樣品溶液；s1：麥冬對照藥材溶液；s2：麥冬皂苷D對照品溶液

圖3 清喉咽合劑麥冬薄層鑒別

圖4 清喉咽合劑麥冬薄層鑒別

圖5 清喉咽合劑麥冬薄層鑒別

2.2 地黃的薄層探索性研究

2.2.1 梓醇的薄層鑒別

取本品10ml，水浴蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。取地黃對照藥材1g，加57%乙醇25ml，超聲30min，過濾，水浴蒸干，殘渣加甲醇1ml溶解，作為對照藥材溶液。取梓醇對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg 的溶液，作為對照品溶液。取地黃陰性樣品溶液2ml，水浴蒸干，加甲醇1ml，即得。

照薄層色譜法（中國藥典2015年版四部通則0502）試驗，吸取上述四種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水 （6:4:1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，在日光下檢視，供試品色譜中，在與地黃對照藥材和梓醇對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點。

共完成1家企業(yè)13批次樣品的地黃薄層色譜鑒別，主斑點共計檢出4個，梓醇均有檢出，但梓醇對應(yīng)的點陰性有干擾，詳見圖6清喉咽合劑薄層色譜示例圖。由圖可知，對照藥材在Rf0.2附近的斑點陰性無干擾，可通過薄層制備，運用液質(zhì)和核磁定性此斑點，優(yōu)化展開條件，作為清喉咽合劑中鑒別地黃的專屬性對照品。

圖6 清喉咽合劑地黃薄層鑒別

2.2.2 毛蕊花糖苷的薄層鑒別

取本品5ml，加80%甲醇25ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水5ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。取地黃對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。取毛蕊花糖苷對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg 的溶液，作為對照品溶液。取地黃陰性樣品溶液2ml，水浴蒸干，加甲醇1ml，即得。照薄層色譜法（中國藥典2015年版四部通則0502）試驗，吸取上述四種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸（16:0.5:2）為展開劑，展開，取出，晾干，用0.1%的2,2-二苯基-1-苦肼基無水乙醇溶液浸板，晾干，在日光下檢視，供試品色譜中，在與地黃對照藥材和毛蕊花糖苷對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點。

共完成1家企業(yè)1批次樣品（4號廠家）的地黃薄層色譜鑒別，主斑點共計檢出3個，檢出毛蕊花糖苷，但斑點比較模糊而且毛蕊花糖苷對應(yīng)的點陰性有干擾，詳見圖7清喉咽合劑薄層色譜示例圖。

3 討論

麥冬薄層鑒別方法效果良好，展開劑避開了麥冬藥材藥典鑒別方法的有毒溶劑甲苯，通過對61批樣品及陰性對照的檢驗，證實方法專屬性較強、操作簡單易行，易重現(xiàn)，可作為對原有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的補充完善。但由于處方中麥冬的含量最低，而且經(jīng)過工藝提取，是否存在轉(zhuǎn)化率降低造成薄層色譜檢出斑點不夠明顯，是否考慮納入標(biāo)準(zhǔn)值得進一步研究。

圖7 清喉咽合劑地黃薄層鑒別

通過對8個廠家61批樣品的麥冬薄層圖可以看出，廠家之間主斑點基本一致，但在Rf0.1和Rf0.4-0.5處，某些廠家之間有差別，可能跟藥材采收地及提取工藝不同有關(guān)，這兩處的成分如為藥效成分，此方法可以為藥材采收和優(yōu)化提取工藝提供參考。

地黃的鑒別在查閱大量文獻，做了大量工作的基礎(chǔ)上還是未能突破，雖然最后得出的薄層鑒別方法效果良好，提取方法簡單易行，但遇到的主要問題就是陰性有干擾，按照藥典地黃毛蕊花糖苷薄層方法也遇到同樣的問題，見圖7，原因為本品種玄參藥材含有梓醇[7]和毛蕊花糖苷[8]，連翹也含有毛蕊花糖苷[9]，而梓醇[10]和毛蕊花糖苷[11]均為地黃的有效成分。此品種如想增加地黃薄層鑒別建議再尋找地黃其他的更加有特征更加專屬的成分進行進一步研究，而這方面的文獻研究比較少，還需要一定時間的積累。