沈瑋蕓 霍麗霞 章喜林 朱麗 葉洪舟 朱焰 王翔

呼吸道感染是臨床上嬰幼兒較為常見的疾病，具有發(fā)病快、感染性強、易引起地區(qū)流行等特點[1]。根據(jù)發(fā)病位置可分為上呼吸道感染（包括鼻腔與咽喉部間的炎癥）和下呼吸道感染（主要包括支氣管及肺部炎癥）[2]。小兒呼吸道感染可由多種病原體引起[3]，不同病原體感染可誘導(dǎo)機體向不同的免疫方向發(fā)展[4]，因此需要不同的治療方法。此外，不同病原體呼吸道感染的早期臨床表現(xiàn)多樣，且無特異性，在一定程度上會影響臨床對癥治療，降低治療效果。因此，及早明確呼吸道感染的病原體類型及機體免疫狀況并予對癥治療，是提高臨床療效、改善預(yù)后的關(guān)鍵[5]。本研究對不同病原體呼吸道感染患兒外周血淋巴細(xì)胞亞群差異作一分析，進而探討淋巴細(xì)胞亞群檢測在呼吸道感染患兒中的臨床意義，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選取本院2016年10月至2018年10月收治的94例呼吸道感染患兒和同期性別、年齡相匹配的40例健康體檢兒童（對照組）為研究對象?；純杭{入標(biāo)準(zhǔn)：（1）具有典型呼吸道感染的臨床特征，符合《諸福棠實用兒科學(xué)》中呼吸道感染相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；（2）排除其他器官、系統(tǒng)感染；（3）病原體聯(lián)合檢測顯示為單一已知病原體感染；（4）入組前3個月未接受過抗感染治療；（5）臨床資料完整；（6）能配合檢查。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審查通過，所有兒童監(jiān)護人知情同意。根據(jù)病原體聯(lián)合檢測結(jié)果，細(xì)菌感染47例，病毒感染47例。細(xì)菌感染組、病毒感染組、對照組性別、年齡、感染部位比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），見表1。

表1 3組對象一般資料比較

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌檢測 采集患兒入院當(dāng)日或次日咽拭子、痰液或氣管灌注液標(biāo)本，接種于血平板和嗜血桿菌選擇性培養(yǎng)基，標(biāo)本的分離培養(yǎng)與鑒定嚴(yán)格按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》進行[7]。

1.2.2 呼吸道7項病原體核酸檢測 采集患兒入院當(dāng)日或次日的咽拭子，使用聚合酶鏈反應(yīng)試劑盒（24人份/盒，中國中幟生物公司）一次檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒、腺病毒、肺炎支原體、肺炎衣原體等7種呼吸道病原體[8]。

1.2.3 外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測 使用抗凝真空采血管采集外周靜脈血2ml，檢測嚴(yán)格按照國家衛(wèi)生部發(fā)布的《WS/T 360-2011流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血淋巴細(xì)胞亞群指南》進行[9]。使用二激光六色免疫熒光多參數(shù)流式細(xì)胞分析儀（CANTOⅡ，美國BD公司）及淋巴細(xì)胞亞群試劑盒（美國BD公司）檢測外周血T淋巴細(xì)胞免疫表型（CD45+、CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD4+）和 B 淋巴細(xì)胞（CD3-CD19+）、自然殺傷細(xì)胞（CD3-CD56/16+）在總淋巴細(xì)胞中所占百分比，計算CD4+細(xì)胞與CD8+細(xì)胞的比值；同時收集血常規(guī)數(shù)據(jù)，通過比例計算淋巴細(xì)胞的絕對計數(shù)（某種表型淋巴細(xì)胞計數(shù)=血常規(guī)獲得的總淋巴細(xì)胞計數(shù)×流式檢測所得某表型所占百分比）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件。計量資料符合正態(tài)分布用表示，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗；非正態(tài)分布資料用 M（P25，P75）表示，多組間比較采用 Kruskal-Wallis檢驗，兩組比較采用Mann-Whitney U檢驗。計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組對象外周血淋巴細(xì)胞亞群絕對計數(shù)比較 3組對象外周血CD3+CD8+絕對計數(shù)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其中病毒感染組明顯低于對照組（P＜0.05）；3組對象外周血其余淋巴細(xì)胞亞群絕對計數(shù)比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

2.2 3組對象外周血淋巴細(xì)胞亞群比例比較 除外周血CD3-CD19+比例外，3組對象其余淋巴細(xì)胞亞群比例比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）；進一步作兩兩比較，結(jié)果顯示病毒感染組和細(xì)菌感染組CD3+、CD3+CD8+比例均低于對照組（均 P＜0.05），CD4+/CD8+明顯高于對照組（均P＜0.05），細(xì)菌感染組CD3-CD56/16+高于對照組（P＜0.05），見表 3。

表2 3組對象外周血淋巴細(xì)胞亞群絕對計數(shù)比較

2.3 不同種類細(xì)菌感染組與對照組外周血淋巴細(xì)胞亞群比例比較 47例細(xì)菌感染患兒中，金黃色葡萄球菌13例，鏈球菌16例，嗜血流感桿菌18例。不同種類細(xì)菌感染組與對照組外周血CD3+CD8+、CD3+CD4-CD8-比例及CD3-CD56/16+、CD4+/CD8+比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），其中金黃色葡萄球菌組CD3+CD8+、CD3+CD4-CD8-比例均低于對照組（均 P＜0.05），CD3-CD56/16+、CD4+/CD8+均高于對照組（均 P＜0.05）；嗜血流感桿菌組CD3+CD4-CD8-比例低于對照組（P＜0.05）；鏈球菌組CD3+CD4-CD8-比例明顯高于金黃色葡萄球菌組、嗜血流感桿菌組（均P＜0.05），見表4。

2.4 不同種類病毒感染組與對照組外周血淋巴細(xì)胞亞群比例比較 47例病毒感染患兒中，呼吸道合胞病毒15例，腺病毒13例，人副流感病毒19例。不同種類病毒感染組與對照組外周血CD3+CD8+、CD3+CD4+、CD3+CD4-CD8-比例及CD4+/CD8+比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），其中呼吸道合胞病毒組、腺病毒組CD3+CD8+比例均低于對照組（均 P＜0.05），CD4+/CD8+明顯高于對照組（均P＜0.05），呼吸道合胞病毒組CD3+CD4-CD8-比例低于對照組（P＜0.05），見表 5。

3 討論

由于嬰幼兒呼吸系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)發(fā)育不健全，極易受到多種病原體的侵襲。有研究發(fā)現(xiàn)小兒呼吸道感染病原體以病毒占比最大，其次為細(xì)菌，而支原體、衣原體相對較少[10-11]。機體免疫系統(tǒng)是一個監(jiān)視、防護和穩(wěn)定體系，可通過各種免疫應(yīng)答反應(yīng)來有效防御病原體的侵襲：體液免疫通過產(chǎn)生血清抗體和分泌抗體來保護機體，而細(xì)胞免疫對清除病原具有重要意義。不同的免疫應(yīng)答途徑會使淋巴細(xì)胞亞群水平出現(xiàn)不同變化[12]。相較于成人，兒童對感染的免疫反應(yīng)通常更為活躍。

當(dāng)外源病原體入侵機體時，抗原提呈細(xì)胞將外源性抗原肽呈遞給T淋巴細(xì)胞并激活T淋巴細(xì)胞，其中CD4+T細(xì)胞能促進T細(xì)胞轉(zhuǎn)為效應(yīng)細(xì)胞，同時釋放活性物質(zhì)活化B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞[13]，分泌多種細(xì)胞因子，從而引起免疫損傷[14]?；罨腃D8+T細(xì)胞具有細(xì)胞毒性，通過脫顆粒作用釋放穿孔素及顆粒酶B，從而殺傷靶細(xì)胞，同時對B淋巴細(xì)胞抗體的產(chǎn)生和T細(xì)胞的活化具有抑制作用[15]。在本研究中，無論細(xì)菌感染還是病毒感染患兒，均表現(xiàn)出外周血CD3+、CD8+T細(xì)胞減少而CD4+/CD8+升高的現(xiàn)象。以上結(jié)果提示呼吸道感染患兒出現(xiàn)免疫功能失調(diào)現(xiàn)象，機體對抗原的殺傷力明顯降低，體液免疫水平也下降，無法很好地清除細(xì)菌、病毒[16]。進一步分析顯示，不同種類細(xì)菌感染患兒外周血淋巴細(xì)胞亞群比例各有差異。金黃色葡萄球菌感染會引起CD8+T細(xì)胞明顯減少，導(dǎo)致CD4+/CD8+明顯升高；在鏈球菌、嗜血流感桿菌感染的患兒中，這種變化并不明顯。目前研究證實雙陰T細(xì)胞（CD3+CD4-CD8-）能抑制具有相同T細(xì)胞受體的CD8+、CD4+T細(xì)胞的功能[17]，但并未被廣泛重視。本研究結(jié)果顯示，不同種類細(xì)菌感染患兒外周血CD3+CD4-CD8-比例差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其中鏈球菌組明顯高于金黃色葡萄球菌組、嗜血流感桿菌組。這可能與鏈球菌自身細(xì)胞壁的夾膜多糖結(jié)構(gòu)可引起特殊免疫途徑有關(guān)，同時也提示雙陰性T細(xì)胞水平可作為感染患兒免疫功能狀態(tài)及病情監(jiān)測的一個新指標(biāo)。同時本研究發(fā)現(xiàn)不同種類病毒感染患兒外周血淋巴細(xì)胞亞群比例也有差異，呼吸道合胞病毒、腺病毒感染患兒CD8+T細(xì)胞減少，導(dǎo)致CD4+/CD8+升高；而人副流感病毒感染患兒中，這種變化不明顯。自然殺傷細(xì)胞是固有免疫的重要組成部分。本研究結(jié)果顯示，金黃色葡萄球菌感染患兒自然殺傷細(xì)胞（CD3-CD56/16+）比例明顯高于對照組，提示金黃色葡萄球菌感染患兒初期固有免疫反應(yīng)活躍。但這與既往研究結(jié)果并不一致[18]，可能與病程、年齡、個體差異等有關(guān)。

表3 3組對象外周血淋巴細(xì)胞亞群比例比較（%）

表4 不同種類細(xì)菌感染組與對照組外周血淋巴細(xì)胞亞群比例比較（%）

表5 不同種類病毒感染組與對照組外周血淋巴細(xì)胞亞群比例比較（%）

綜上所述，不同病原體呼吸道感染患兒外周血淋巴細(xì)胞亞群存在差異；外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果能反映患兒機體免疫狀態(tài)，對于指導(dǎo)小兒呼吸道感染的診治具有臨床意義。