王合兵，陳昌明，肖 堅(jiān)，陳文新，楊炳林

福建醫(yī)科大學(xué)附屬三明第一醫(yī)院，福建 三明 365000

乳腺癌是威脅女性健康的最重要的疾病之一，其發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)，近年來(lái)，隨著乳腺癌診療技術(shù)的不斷發(fā)展，乳腺癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移的分子層面已經(jīng)成為研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。轉(zhuǎn)移抑制因子1(metastasis suppressor 1，MTSS1)基因與尿激酶型纖溶酶原激活物(urokinase plasmino-gen activator， uPA)與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系［1］。目前關(guān)于 MTSS1在結(jié)腸癌、膀胱癌、前列腺癌及肝癌等腫瘤中的表達(dá)情況已有報(bào)道，但MTSS1在乳腺癌中的表達(dá)及意義如何，國(guó)內(nèi)外相關(guān)報(bào)道較少［2］。uPA在幾乎所有惡性腫瘤中高表達(dá)并發(fā)揮積極的腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中的重要作用［3］。本研究采用免疫組織化學(xué)法觀察MTSS1、uPA在乳腺癌組織及癌旁組織的表達(dá)水平，并檢測(cè)二者在同時(shí)期手術(shù)的通過(guò)隨訪發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移的患者其第一次術(shù)后病理蠟塊中的表達(dá)水平，并探討其與乳腺癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，為乳腺癌的臨床診療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將福建醫(yī)科大學(xué)附屬三明第一醫(yī)院乳腺科2009年8月1日- 2012年12月31日間手術(shù)切除的乳腺癌標(biāo)本80例作為研究組，選取這些患者的癌旁組織標(biāo)本80例作為對(duì)照組，選取30例復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者的第一次術(shù)后病理標(biāo)本組織作為復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組，患者全部為女性，年齡38～70歲，平均年齡（51.32±3.82）歲，其中3例淋巴轉(zhuǎn)移。患者手術(shù)前均為進(jìn)行放療、化療、免疫治療治療史。

1.2 試劑選擇及標(biāo)本處理

兔抗人MTSS1單克隆抗體、通用型生物素標(biāo)記的二抗均購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司;濃縮型DAB試劑盒、多聚賴(lài)氨酸購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。兔抗人uPA多克隆抗體購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司，抗體稀釋濃度為1∶100。免疫組化試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。乳腺癌標(biāo)本及癌旁組織經(jīng)10%福爾馬林固定、常規(guī)石蠟包理，4μm厚連續(xù)切片，供常規(guī)蘇木精-伊紅染色和免疫組化染色。采用Envision二步法，參照檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，用已知乳腺癌陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 方法

用常規(guī)蘇木精-伊紅染色和免疫組化染色，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明操作，用已知乳腺癌陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照，結(jié)果陽(yáng)性；以PBS代替一抗作陰性對(duì)照，結(jié)果陰性。

1.4 效果判定評(píng)價(jià)指標(biāo)

MTSS1以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)。每張切片在高倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，按染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分比綜合計(jì)分［4］。染色強(qiáng)度：無(wú)色計(jì)為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù):小于總數(shù)的5%時(shí)計(jì)為0分，5%～25%＜為1分，25%～50%為2分，＞50%為3分。染色強(qiáng)度得分與陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)得分相乘，0～1分為陰性，2分為陽(yáng)性(+)性。uPA蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要分布于細(xì)胞質(zhì)，以細(xì)胞漿出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)。按腫瘤細(xì)胞中陽(yáng)性比例計(jì)算百分率，陽(yáng)性細(xì)胞＜10%記為（-）；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在10%～25%記為（+）；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在25%～50%記為（++）；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞50%記為（+++）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料用例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，并行Spearman相關(guān)分析；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MTSS1在乳腺癌、癌旁組織、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)

MTSS1在乳腺癌陽(yáng)性染色多在細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，為棕黃色，而在細(xì)胞核內(nèi)無(wú)陽(yáng)性表達(dá)。

圖1 MTSS1在乳腺癌、癌旁組織、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)

MTSS1在正常組織的表達(dá)僅有少數(shù)為弱陽(yáng)性，大多數(shù)為陰性。研究組乳腺癌患者中MTSS1表達(dá)陽(yáng)性率高達(dá)86.25%（圖1-1），在對(duì)照組癌旁組織表達(dá)的陽(yáng)性率為56.25%（圖1-3），在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組表達(dá)的陽(yáng)性率為46.47%（圖1-4），乳腺癌表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組高于轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），對(duì)照組與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 MTSS1在不同乳腺組織中的表達(dá)情況

2.2 MTSS1表達(dá)與乳腺癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系比較

MTSS1在有復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中的表達(dá)水平明顯低于無(wú)轉(zhuǎn)移的原發(fā)乳腺癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=28.4091，P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表2 MTSS1表達(dá)與乳腺癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系

2.3 uPA在乳腺癌、癌旁組織、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)

uPA蛋白在不同組織中的表達(dá)具有明顯的規(guī)律性，其陽(yáng)性率表達(dá)轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)組高于乳腺癌研究組高于癌旁組織對(duì)照組，且各組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表3。

表3 uPA在乳腺癌、癌旁組織、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)

2.4 uPA表達(dá)與乳腺癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系比較

uPA在乳腺癌轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組中的陽(yáng)性率分別為93.94%和51.95%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表4 uPA表達(dá)與乳腺癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系比較

2.5 MTSS1蛋白與uPA蛋白陽(yáng)性表達(dá)之間的相關(guān)性

在121例MTSS1陽(yáng)性表達(dá)組織中只有22例uPA陽(yáng)性表達(dá)，69例MTSS1陰性表達(dá)中有46例uPA陽(yáng)性表達(dá)，進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析，R=-0.9015，P＜0.05，MTSS1蛋白與uPA蛋白在乳腺癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的過(guò)程中表達(dá)呈明顯的負(fù)相關(guān)性。見(jiàn)表5。

表5 MTSS1蛋白與uPA蛋白陽(yáng)性表達(dá)之間的相關(guān)性 例

3 討論

3.1 MTSS1蛋白表達(dá)與乳腺癌的關(guān)系

本研究發(fā)現(xiàn)，MTSS1在乳腺癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率明顯高于正常乳腺組織和癌旁組織高于復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組織，提示MTSS1可能在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，在轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織中的表達(dá)水平明顯低于局限性乳腺癌組織［5-6］，提示MTSS1與乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)，這與最初發(fā)現(xiàn)的MTSS1作為潛在的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因的功能相符，說(shuō)明在乳腺癌細(xì)胞中MTSS1充當(dāng)著控制轉(zhuǎn)移的角色，所以乳腺癌在發(fā)生發(fā)展的過(guò)程中起著重要的作用，同時(shí)對(duì)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移起到很好地抑制作用。

3.2 uPA蛋白與乳腺癌的關(guān)系

研究表明［7］，與正常組織相比uPA基因在肺癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌的組織中呈現(xiàn)較高陽(yáng)性表達(dá)，尤其是在乳腺癌的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)病灶的組織中呈現(xiàn)很好的陽(yáng)性表達(dá)。證實(shí)uPA基因在腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中扮演重要角色［8］。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)uPA蛋白在癌旁組織、乳腺癌組織和轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)組織的陽(yáng)性表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，推斷uPA參與了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，并且在乳腺癌的轉(zhuǎn)移過(guò)程中起到了重要作用，與文獻(xiàn)資料相符［9］。

3.3 MTSS1蛋白與uPA蛋白的相關(guān)性

迄今尚未發(fā)現(xiàn)文獻(xiàn)中有關(guān)MTSS1蛋白與uPA蛋白的相關(guān)性的報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)顯示，在121例MTSS1陽(yáng)性表達(dá)組織中只有22例uPA陽(yáng)性表達(dá)，69例MTSS1陰性表達(dá)中就有46例uPA陽(yáng)性表達(dá)，提示MTSS1蛋白與uPA蛋白在乳腺癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的過(guò)程中表達(dá)呈明顯的負(fù)相關(guān)性，MTSS1蛋白與uPA蛋白的共同作用還有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，乳腺癌患者中MTSS1表達(dá)陽(yáng)性率高于癌旁組織和轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)組織，在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起到了重要的作用，但是對(duì)于腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移起到了重要的抑制作用。乳腺癌患者uPA表達(dá)陽(yáng)性率高于癌旁組織，但是低于轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)組織，提示在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展以及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的過(guò)程中均起到重要的作用。通過(guò)研究，MTSS1蛋白與uPA蛋白具有明顯的負(fù)相關(guān)性。