年 娣，李卓含，孫俊杰，時(shí) 鵬

(1.蚌埠醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)系核醫(yī)學(xué)教研室；2.蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，安徽 蚌埠 233000)

吉蘭-巴雷綜合癥(Guillain-Barré syndrome,GBS)又稱為急性炎癥性脫髓鞘型多發(fā)性神經(jīng)病，是一種以周?chē)窠?jīng)和神經(jīng)根脫髓鞘及小血管炎細(xì)胞浸潤(rùn)為特點(diǎn)的自身免疫性疾病。由于病因不明，主要采用對(duì)癥支持治療和特異性免疫治療如血漿置換、免疫球蛋白靜脈注射治療，但兩種治療手段效果均不能令人滿意，目前沒(méi)有任何措施可阻斷疾病進(jìn)展。EAN是GBS的經(jīng)典動(dòng)物模型，具有外周神經(jīng)脫髓鞘和炎細(xì)胞浸潤(rùn)的病理學(xué)改變特點(diǎn)，臨床表現(xiàn)、神經(jīng)電生理改變與人GBS非常相似，被廣泛用于GBS發(fā)病機(jī)制及治療的基礎(chǔ)研究。1.25(OH)2D3是維生素D的活性形式，與維生素D受體(Vitamin D Receptor, VDR)結(jié)合后與維甲類(lèi)X受體(retinoid X receptor, RXR)形成二聚體，并結(jié)合下游基因DNA序列上維生素D反應(yīng)元件(Vitamin D Response elements, VDRE),進(jìn)而控制下游基因轉(zhuǎn)錄,發(fā)揮功能。一直以來(lái)人們認(rèn)為維生素D主要在鈣磷代謝、骨骼新陳代謝中發(fā)揮作用。但VDR在人體幾乎所有組織類(lèi)型中均有表達(dá)，包括免疫細(xì)胞[1]。近年研究顯示，維生素D通過(guò)調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等細(xì)胞的活化進(jìn)而在固有免疫和特異性免疫中發(fā)揮作用。流行病學(xué)研究結(jié)果顯示，維生素D缺乏與多種自身免疫性疾病相關(guān)[2-5]。Spanier等[6]發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充維生素D3可降低EAE的發(fā)病率和嚴(yán)重程度。但Meehan等[7]提出1.25(OH)2D3引發(fā)的高鈣血癥可以改善實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)，而非1.25(OH)2D3本身的治療作用。但維生素D對(duì)EAN的作用目前還不清楚。因此，本研究建立EAN大鼠模型，觀察1.25(OH)2D3治療后EAN大鼠行為學(xué)表現(xiàn)、病理改變和炎癥因子的變化，綜合評(píng)估1.25(OH)2D3對(duì)EAN的影響及其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康雄性Lewis大鼠，6～8 w，體重160～180 g，購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。

1.1.2主要試劑周?chē)窠?jīng)髓鞘抗原P0180-199購(gòu)自上海吉爾生化有限公司；不完全弗氏佐劑和活性維生素D3購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；結(jié)核桿菌H37Ra購(gòu)于Difco公司；Trizol購(gòu)自Invitrogen 公司；IL-17、IL-10、TGF-β、IFN-γ ELISA試劑盒均購(gòu)自ABclonal。

1.2方法

1.2.1EAN模型建立及1.25(OH)2D3治療25只Lewis大鼠隨機(jī)分正常對(duì)照組(Control)、模型組(EAN)、低(VDl)、中(VDm)、高劑量(VDh)維生素D組，每組5只。250 μg P0180-199乳化于等量的完全弗氏佐劑(含10 mg·mL-1結(jié)核分枝桿菌H37Ra)作為致敏劑。模型組和維生素D處理組大鼠均予以后肢雙足底、多點(diǎn)注射致敏劑共100 μL/鼠。VDl、VDm、VDh組自免疫后第5天開(kāi)始給予1.25(OH)2D30.25 μg·kg-1、1 μg·kg-1、4 μg·kg-1灌胃，每天一次，連續(xù)灌胃7天。Control和EAN組每天灌胃花生油0.2 mL，連續(xù)7天。

1.2.2神經(jīng)系統(tǒng)體征臨床評(píng)分自免疫第0日起，由兩位實(shí)驗(yàn)員于每天同一時(shí)間稱重、觀察發(fā)病情況并評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下所示：0分：正常；1分：鼠尾肌張力降低,尾尖上翹；2分：尾癱，翻正反射部分缺失；3分：翻正反射缺失；4分：步態(tài)失調(diào)，姿態(tài)異常；5分：后肢輕癱；6分：后肢中度癱瘓；7分：后肢嚴(yán)重癱瘓；8分：四肢癱瘓；9分：瀕臨死亡；10分：死亡。

1.2.3坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位評(píng)價(jià)采用生物信號(hào)記錄儀對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位傳導(dǎo)速度、潛伏期進(jìn)行測(cè)定，方法如下：發(fā)病高峰期，大鼠經(jīng)10%水合氯醛麻醉狀態(tài)下俯臥于恒溫手術(shù)臺(tái)，剃凈左腿鼠毛，常規(guī)消毒后剪開(kāi)左側(cè)臀部皮膚，沿筋膜剪開(kāi)鈍性分離，游離并暴露坐骨神經(jīng),放入刺激電極、記錄電極，神經(jīng)刺激指數(shù)設(shè)置：1 Hz，5 mA，0.1 ms，誘發(fā)負(fù)荷肌肉動(dòng)作電位(compound muscle action potential, CAMP)。四通道生物信號(hào)采集器檢測(cè)并記錄CAMP波幅、潛伏期和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度(motor nerve conduction velocity, MNCV)。每只大鼠神經(jīng)傳導(dǎo)記錄3次，測(cè)量過(guò)程中用臺(tái)式液保持神經(jīng)干濕潤(rùn)。

1.2.4坐骨神經(jīng)形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)大鼠免疫后第15天10%水合氯醛麻醉狀態(tài)下，立即分離坐骨神經(jīng)，置于4%多聚甲醛固定，梯度酒精脫水，二甲苯透明后進(jìn)行石蠟包埋、切片、HE染色光鏡下觀察坐骨神經(jīng)束間、小血管周?chē)馨图?xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)情況。

1.2.5坐骨神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)觀察大鼠免疫后第15天經(jīng)10%水合氯醛麻醉，立即分離坐骨神經(jīng)投入0.2 mol·L-1戊二醛中固定。常規(guī)脫水、包埋、超薄切片、染色，透射電鏡觀察坐骨神經(jīng)軸突脫髓鞘情況。

1.2.6ELISA檢測(cè)IL-17、IL-10、TGF-β、IFN-γ水平大鼠免疫后第15天經(jīng)眼眶后靜脈叢采血，3 000 rpm·min-1離心5 min，留取上清液。按照說(shuō)明書(shū)要求在酶標(biāo)板檢測(cè)孔加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣本100 μL，37 ℃孵育2 h。洗板后每孔加抗體100 μL，37 ℃孵育1 h。洗板后分別加酶結(jié)合底物100 μL，37 ℃孵育30 min。棄去孔內(nèi)液體，洗板后加TMB 100 μL，15 min后加終止液100 μL，設(shè)波長(zhǎng)450 nm,空白孔調(diào)零，立即酶標(biāo)儀測(cè)定OD值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血清中IL-17、IL-10、TGF-β、IFN-γ的濃度。

1.2.7RT-PCR檢測(cè)IL-17、IFN-γ、RORrt、FoxP3mRNA水平大鼠免疫后第15天經(jīng)10%水合氯醛麻醉，常規(guī)消毒，無(wú)菌環(huán)境下取出脾臟。Trizol在液氮中研磨脾臟并提取總RNA，紫外分光光度計(jì)測(cè)定RNA濃度后逆轉(zhuǎn)錄成cDNA進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)IL-17、IFN-γ、RORrt、FoxP3 mRNA水平變化。引物設(shè)計(jì)如下: FoxP3 F:5' CCT ACC CAC TGC TGG CAA ACG 3'， R：5' ACT TCT CTC TGG AGG AGG CAC TG 3'；RORrt F:5' AGG TAT GAC CGA TGC TCT TA 3'，R：5' TAT TTT CGG ATA AGT CTA GG 3'；IL-17 F:5' TGG ACT CTG AGC CGC ATT GA 3'， R：5' GAC GCA TGG CGG ACA ATA GA 3'； IFN-γ F:5' AAA GAC AAC CAG GCC ATC AG 3'， R：5' CTT TTC CGC TTC CTT AGG CT 3'； GAPDH F:5' TCG TGG AGT CTA CTG GCG TCT T 3'，R：5' CAT TGC TGA CAA TCT TGA GGG AG 3。

2 結(jié) 果

2.1大鼠體重變化和臨床評(píng)分EAN組大鼠在免疫后第5天開(kāi)始出現(xiàn)癥狀，第15天達(dá)發(fā)病高峰期。發(fā)病高峰期臨床評(píng)分VDl組(6.6±0.23)、VDm(5.2±0.28)、VDh組(6.2±0.33)較EAN組(7.1±0.35)均有減低，其中VDm組效果更加明顯，但組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。EAN組大鼠自出現(xiàn)臨床癥狀開(kāi)始體重增加速度減低，在第13～15天發(fā)病高峰期體重迅速降低，而1.25(OH)2D3干預(yù)各組大鼠自出現(xiàn)臨床癥狀開(kāi)始體重增加速度減低，但無(wú)明顯體重丟失。發(fā)病高峰期VDl、VDm、VDh組體重減輕程度均低于EAN組，但與EAN組相比，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖1。

圖1 1.25(OH)2D3處理對(duì)EAN大鼠臨床評(píng)分(A)

2.2EAN大鼠神經(jīng)電生理變化EAN組坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度為(57.7±0.78) m·s-1,低于Control組 (133.3±0.28) m·s-1,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)； VDl組、VDm、VDh組坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度分別為(66.7±0.45) m·s-1、(71.8±0.56) m·s-1、(66.4±1.15) m·s-1，較EAN組均有明顯改善，其中VDm組效果最明顯 (P<0.05)。EAN組坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位振幅為(7.49±0.13) m·s-1,低于Control組 (17.8±0.44) m·s-1,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)； VDl組、VDm、VDh組坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位振幅分別為(13.3±0.36) m·s-1、(14.8±0.31) m·s-1、(13.6±0.47) m·s-1，較EAN組均有明顯升高。綜上，1.25(OH)2D3處理減輕了EAN大鼠外周神經(jīng)損傷，以VDm組效果最好。見(jiàn)圖2。

圖2 1.25(OH)2D3處理對(duì)EAN大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)

2.3EAN大鼠坐骨神經(jīng)炎細(xì)胞浸潤(rùn)和髓鞘脫失情況在發(fā)病高峰取坐骨神經(jīng)分別行HE、透射電鏡檢查。HE染色結(jié)果顯示，與Control相比，EAN組大鼠坐骨神經(jīng)小血管周?chē)罅垦仔约?xì)胞浸潤(rùn)，而VDm組血管周?chē)准?xì)胞浸潤(rùn)有明顯減輕(圖3 HE-A、B、C)。透射電鏡結(jié)果顯示Control組有髓神經(jīng)纖維軸索結(jié)構(gòu)正常，髓鞘板層層狀圍繞圓心規(guī)則排列。而EAN組可見(jiàn)髓鞘板層腫脹、蜂窩狀改變及髓鞘內(nèi)層與軸索剝離等表現(xiàn)，經(jīng)1.25(OH)2D3處理后VDm組髓鞘腫脹、空洞形成等改變均較EAN組減輕(圖3 TEM-A、B、C)。

2.4ELISA檢測(cè)大鼠血清IL-17、IL-10、TGF-β、IFN-γ水平現(xiàn)有理論認(rèn)為炎性因子是加重EAN病情的因素之一，因此我們采用ELISA方法對(duì)各組大鼠外周血IL-17、IL-10、TGF-β、IFN-γ水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，與Control組相比，EAN組大鼠血清炎性細(xì)胞因子IL-17、IFN-γ水平均明顯增加，而IL-10、TGF-β水平顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與EAN組相比，1.25(OH)2D3處理后VDl、VDm、VDh組大鼠血清IL-17、IFN-γ水平顯著降低, IL-10、TGF-β水平明顯增加(P<0.05)。 各處理組間兩兩相比VDl vs VDm,VDm vs VDh差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但VDl vs VDh組差異不明顯(P>0.05)。見(jiàn)圖4。

圖3 HE染色和透射電鏡檢測(cè)坐骨神經(jīng)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和脫髓鞘情況

圖4 外周血炎性細(xì)胞因子水平

2.5RT-PCR檢測(cè)大鼠脾臟炎性細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平發(fā)病高峰期對(duì)各組大鼠脾臟中炎性細(xì)胞因子mRNA進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)，結(jié)果顯示，與Control組相比，EAN組IL-17、IFN-γ、RORrt mRNA表達(dá)水平顯著升高, Foxp3 mRNA水平降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與EAN組相比，VDm組IL-17、IFN-γ、RORrt mRNA表達(dá)水平顯著降低,同時(shí)Foxp3 mRNA水平明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 VDh組與EAN組相比只有IFN-γ明顯降低，VDm組IL-17降低水平與VDl組相比更加明顯(P<0.05)。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，1.25(OH)2D3干預(yù)治療后，炎癥相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平降低，中等劑量的1.25(OH)2D3治療效果明顯優(yōu)于低、高劑量組。見(jiàn)圖5。

圖5 脾臟炎性細(xì)胞因子和T淋巴細(xì)胞mRNA的表達(dá)水平

3 討 論

目前認(rèn)為GBS是由T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病，臨床以肢體無(wú)力、四肢對(duì)稱性遲緩性癱瘓為主要癥狀，周?chē)窠?jīng)、神經(jīng)根脫髓鞘和小血管炎細(xì)胞浸潤(rùn)是主要病理特點(diǎn)。EAN是GBS的經(jīng)典動(dòng)物模型在病理學(xué)改變、臨床表現(xiàn)、神經(jīng)電生理改變與GBS非常相似，被廣泛用于GBS發(fā)病機(jī)制及治療的研究[8]。許多研究表明機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)的破壞是GBS的發(fā)病基礎(chǔ)，Th17、Treg細(xì)胞及其效應(yīng)因子構(gòu)成復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)參與了GBS的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸。生理穩(wěn)態(tài)情況下，Th1/Th2、Th17/Treg細(xì)胞處于動(dòng)態(tài)平衡[9-10]。Th17細(xì)胞分泌的特征性細(xì)胞因子IL-17通過(guò)誘導(dǎo)靶器官炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)參與自身免疫性疾病發(fā)生。高表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的Treg細(xì)胞通過(guò)直接接觸發(fā)揮抑制Th細(xì)胞功能、分泌抑制性炎性細(xì)胞因子抑制自身免疫應(yīng)答，維持機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)。當(dāng)機(jī)體受到病原體刺激后，Th1、Th17細(xì)胞被激活產(chǎn)生炎癥反應(yīng)對(duì)抗病原菌，若此過(guò)程調(diào)節(jié)失衡，可能導(dǎo)致自身免疫性疾病的發(fā)生。在EAN發(fā)病初期，外周血IFN-γ、IL-17水平顯著增加；疾病進(jìn)入恢復(fù)期后，IFN-γ、IL-17水平逐漸降低[11]。EAE小鼠模型淋巴細(xì)胞IL-17A含量顯著增加[12]，GBS患者外周血Th1細(xì)胞顯著升高，Treg細(xì)胞明顯降低。我們前期研究發(fā)現(xiàn)GBS患者外周血Th1/Th2、Th17/Treg表達(dá)失衡，ENA小鼠胃腸灌注嬰兒雙歧桿菌可以改善Th17/Treg失衡，改善自身免疫性炎癥反應(yīng)[13-14]。

維生素D自身無(wú)生物活性，轉(zhuǎn)化為活性形式1.25(OH)2D3并與VDR結(jié)合后發(fā)揮作用，VDR廣泛存在于在免疫細(xì)胞和中樞神經(jīng)系統(tǒng)如下丘腦、海馬、皮層神經(jīng)元。近年研究顯示，維生素D通過(guò)調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞等在固有免疫和特異性免疫中發(fā)揮作用；同時(shí)有研究表明維生素D不僅影響T細(xì)胞增殖、成熟，還可減少I(mǎi)L-17的表達(dá)，促進(jìn)Treg細(xì)胞的增殖并增強(qiáng)其免疫耐受功能[15-16]。Kevin等[17-19]檢測(cè)出VDR調(diào)控的下游基因與系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化等有關(guān)。Jeffery等[20-21]的研究顯示1.25(OH)2D3在類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病中等疾病中的治療作用與IL-17A有關(guān)。

本研究采用0.25 μg·kg-1、1 μg·kg-1、4 μg·kg-13種劑量的1.25(OH)2D3灌胃治療EAN大鼠，結(jié)果顯示，相比于P0肽誘導(dǎo)的EAN模型組，1.25(OH)2D3減輕了EAN大鼠的臨床癥狀，不同程度降低了臨床評(píng)分，減輕了體重丟失情況；顯著改善了坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度；形態(tài)學(xué)上有效減輕了坐骨神經(jīng)炎細(xì)胞浸潤(rùn)和髓鞘脫失程度，其中以1 μg·kg-1的VDm組效果最優(yōu)。Mohammadi等[22]的研究顯示維生素D減少炎細(xì)胞向中樞神經(jīng)系統(tǒng)的浸潤(rùn)和脫髓鞘，這與我們的研究結(jié)果一致。

發(fā)病高峰期對(duì)EAN大鼠外周血中的炎性因子進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，1.25(OH)2D3降低了EAN大鼠外周血促炎性細(xì)胞因子IL-17、IFN-γ的表達(dá),同時(shí)增加了抑炎性細(xì)胞因子IL-10、TGF-β的表達(dá)，中等劑量治療組(VDm)的效果較低、高濃度組更好。IFN-γ等一方面通過(guò)激活巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO、活性氧中間體介導(dǎo)髓鞘損傷，促使EAN發(fā)病，另一方面通過(guò)抑制IL-23途徑的Th17細(xì)胞擴(kuò)增而下調(diào)IL-17，在EAN中發(fā)揮雙向作用。Speck等[23]證實(shí)，高表達(dá)的TGF-β、IL-10與EAE的病情恢復(fù)緩解有關(guān)，中和或抑制TGF-β、IL-10可加劇EAE病情的嚴(yán)重程度，但Treg過(guò)繼轉(zhuǎn)移可降低TGF-β、IL-10、IL-4的水平進(jìn)而緩解EAE。本研究結(jié)果提示1.25(OH)2D3改變了EAN大鼠模型中促炎性細(xì)胞因子和抑炎性細(xì)胞因子的平衡，減輕EAN臨床癥狀，且治療效果與劑量有關(guān)。進(jìn)一步對(duì)發(fā)病高峰期EAN大鼠脾臟中Th17、Treg細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，與Control相比，EAN大鼠IL-17、IFN-γ、RORrt mRNA表達(dá)水平升高, Foxp3 mRNA水平降低。1.25(OH)2D3降低了EAN大鼠IL-17、IFN-γ、RORrt mRNA表達(dá)水平,同時(shí)上調(diào)Foxp3 mRNA水平。重組IL-17加重EAN大鼠急性期坐骨神經(jīng)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和脫髓鞘病變。體外擴(kuò)增的Treg細(xì)胞回輸治療可減輕EAN大鼠外周神經(jīng)受損后的神經(jīng)痛和周?chē)窠?jīng)炎性脫髓鞘改變[24]。本研究中1.25(OH)2D3治療后與Foxp3上調(diào)伴隨Th17等轉(zhuǎn)錄因子下調(diào)，說(shuō)明EAN大鼠體內(nèi)Th17/Treg細(xì)胞及炎性因子的分布發(fā)生了變化，Th17/Treg失衡狀態(tài)得以糾正，1.25(OH)2D3的治療作用可能與Th17/Treg再平衡有關(guān)。Ahangar-Parvin等[25-26]發(fā)現(xiàn)維生素D3可預(yù)防EAE發(fā)病，改變EAE中Th1、Th17、Th2、Treg細(xì)胞比例，與我們的研究結(jié)果一致。

VDR作為1.25(OH)2D3的核受體可通過(guò)與下游基因啟動(dòng)子區(qū)域的VDRE序列結(jié)合發(fā)揮調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)的作用。Tone等[27]在小鼠Foxp3基因高度保守的非編碼序列中發(fā)現(xiàn)VDRE序列。1.25(OH)2D3刺激人和小鼠CD4+CD25-T細(xì)胞中Foxp3的表達(dá)[26]。Foxp3具有直接抑制IL-17和IFN-γ的能力，F(xiàn)oxp3、RORrt及Runxl相互作用抑制IL-17的產(chǎn)生,VDR可以阻斷Runxl的表達(dá)而抑制RORrt轉(zhuǎn)錄活性[28-29]。這些研究表明1.25(OH)2D3可能通過(guò)直接結(jié)合Foxp3基因內(nèi)含子中VDRE序列促進(jìn)Foxp3基因啟動(dòng)子活性而刺激Foxp3的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控RORrt的表達(dá)，抑制自身免疫過(guò)程中促炎性Th17反應(yīng)而減輕EAN炎癥反應(yīng)。

綜上所述，1.25(OH)2D3可能通過(guò)影響T細(xì)胞的數(shù)量和功能，誘導(dǎo)Treg細(xì)胞的分化，減少促炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生、增加抑炎性細(xì)胞因子表達(dá)而介導(dǎo)對(duì)EAN的保護(hù)作用。因此補(bǔ)充1.25(OH)2D3有可能成為GBS治療的一種輔助治療手段，但EAN大鼠模型病情發(fā)展具有自限性，在EAN模型有限的治療期間1.25(OH)2D3的免疫調(diào)節(jié)作用能否在GBS患者身上重現(xiàn)，有待于進(jìn)一步的研究。本研究結(jié)果為1.25(OH)2D3治療EAN闡明了部分機(jī)制，為其將來(lái)用于GBS防治提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。