周峰，何華

榆林市第一醫(yī)院神經(jīng)外科1、眼科2，陜西 榆林 718000

垂體腺瘤作為一種較為常見的神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤，絕大部分表現(xiàn)為良性腫瘤特征，但仍有部分呈侵襲性生長，常表現(xiàn)為海綿竇、鞍底骨質(zhì)等周圍結(jié)構(gòu)破壞[1]。通常具有侵襲性的垂體腺瘤難以通過手術(shù)進(jìn)行全切，而且術(shù)后易復(fù)發(fā)，還會伴隨分泌功能紊亂等，在臨床診斷和治療方面有著極大的困難。近來研究發(fā)現(xiàn)，垂體腺瘤的發(fā)生、發(fā)展與癌基因的激活、抑癌基因的失活有關(guān)[2]。Zeste 基因增加子同源物2 (EZH2) 可以沉默數(shù)百種細(xì)胞，能夠通過影響腫瘤分化、增殖相關(guān)基因的表達(dá)情況來參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程[3]。肌動蛋白結(jié)合蛋白 (Fascin) 在細(xì)胞遷移、黏膜黏附及信息傳遞等過程中發(fā)揮著重要作用，與腫瘤細(xì)胞的侵潤密切相關(guān)[4]。本研究通過檢測侵襲性垂體腺瘤患者中的EZH2 和Fascin蛋白的表達(dá)水平，分析其與侵襲性垂體腺瘤預(yù)后關(guān)系，以期對侵襲性垂體腺瘤在臨床醫(yī)學(xué)的診斷及治療提供更多幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性收集2013 年5 月至2016年5月榆林市第一醫(yī)院收治的102例垂體腺瘤患者的臨床資料，將其分為侵襲組50例和非侵襲組52例，兩組患者的性別、年齡、激素類型比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義 (P＞0.05) ，具有可比性，見表1。

表1 兩組患者一般資料比較

1.2 病例選擇 (1) 侵襲性垂體腺瘤患者納入標(biāo)準(zhǔn)：①Hardy-Wilson 分級≥Ⅲ級和C-E 期/Knosp≥Ⅲ級；②術(shù)中發(fā)現(xiàn)海綿竇內(nèi)側(cè)壁有瘤組織侵犯，或鞍底破壞，瘤組織突入蝶竇。 (2) 垂體腺瘤患者納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)術(shù)后病理學(xué)證實為垂體腺瘤者；②病歷和影像學(xué)資料完整者；③均為首診首治患者。 (3) 排除標(biāo)準(zhǔn)：①圍術(shù)期有嚴(yán)重并發(fā)癥者；②伴有家族惡性腫瘤遺傳病史。

1.3 方法

1.3.1 免疫組化 所有患者均行免疫組織化學(xué)Envision 法檢測：取手術(shù)中切除的垂體腺瘤組織標(biāo)本常規(guī)固定，切片脫蠟至水化，蛋白酶消化或經(jīng)微波處理，加入過氧化酶阻斷劑后，繼續(xù)微波輻射2 min，磷酸鹽緩沖液 (PBS) 清洗后，加入EZH2、Fascin 一抗 (購自于福州邁新公司) ，微波爐孵育3 min，加二抗EnvisionTM4000，微波3 min，PBS 洗后加入酶底物顯色，清水沖洗，復(fù)染后封片，顯微鏡下觀察。

1.3.2 結(jié)果判定 所有標(biāo)本經(jīng)免疫組化處理后，由病理科醫(yī)師采用雙盲法評測。EZH2、Fascin均主要表達(dá)在細(xì)胞核，結(jié)果參照Shimizu半定量積分法，隨機選取至少5個清晰高倍視野進(jìn)行觀察，以陽性細(xì)胞比例及反應(yīng)強度進(jìn)行評分。染色強度評分標(biāo)準(zhǔn)：0分 (陰性) 、1分 (淡黃色) 、2分 (黃色或深黃) 和3分 (褐色或深褐色) 。陽性細(xì)胞所占比例：未見陽性細(xì)胞為0分、陽性細(xì)胞率≤25%為1分、25%～50%為2分、＞50%為3分。對以上2項計分相乘進(jìn)行綜合評分：0分為-，1～2分為+、3～4分為++、5～9分為+++，其中≥3分為染色陽性。

1.4 隨訪 患者自病理確診之日起開始門診復(fù)查或電話隨訪，治療后1年內(nèi)每3個月門診復(fù)查1次，2年內(nèi)半年復(fù)查1次，以后至少每年復(fù)查一次，所有患者均完成3 年隨訪。隨訪記錄生存時間及隨訪時狀態(tài) (存活、死亡或其他) 等。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0 軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t 檢驗；計數(shù)資料以構(gòu)成比 (%) 表示，采用χ2檢驗；相關(guān)性分析采用Pearson 相關(guān)系數(shù)分析，利用Logistic 回歸模型分析影響侵襲性垂體腺瘤患者預(yù)后的危險因素；Kaplan-Meier 法分析生存率，采用Log-rank 法檢驗。均以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者的EZH2及Fascin水平比較 EZH2在侵襲組和非侵襲組中的陽性表達(dá)率分別為74.00%、51.92%，F(xiàn)ascin 在侵襲和非侵襲組中的陽性表達(dá)率分別為66.00%、30.77%。兩組結(jié)果比較，侵襲組患者的EZH2、Fascin 陽性率明顯高于非侵襲組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05) ，見表2。

表2 兩組患者的EZH2及Fascin水平比較 (例)

2.2 侵襲性垂體腺瘤患者EZH2及Fascin水平的相關(guān)性 Pearson 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，EZH2 與Fascin陽性表達(dá)水平呈正相關(guān) (r=0.672，P＜0.01) 。

2.3 影響侵襲性垂體腺瘤患者預(yù)后的單因素和多因素分析 單因素分析顯示，腫瘤大小、EZH2、Fascin水平與侵襲性垂體腺瘤有關(guān) (P＜0.05) ；將上述有統(tǒng)計學(xué)意義的危險因素作為自變量，以是否確診侵襲性垂體腺瘤為應(yīng)變量進(jìn)行賦值 (腫瘤大?。骸? cm=1、＜3 cm=0；EZH2：陽性=1、陰性=0；Fascin：陽性=1、陰性=0) ，多因素分析顯示，腫瘤≥3 cm、EZH2 陽性及Fascin 陽性水平是影響垂體腺瘤發(fā)展的危險因素 (P＜0.05) ，見表3。

表3 影響垂體腺瘤患者預(yù)后的單因素和多因素分析

2.4 EZH2、Fascin水平與侵襲性垂體腺瘤患者總生存率的關(guān)系 由生存曲線可知，侵襲性垂體腺瘤患者中EZH2、Fascin 陰性表達(dá)者的生存率分別為92.31%、88.24%，明顯高于EZH2、Fascin 陽性表達(dá)者的54.05%、51.52%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 (χ2=3.910，P=0.048；χ2=3.982，P=0.046) ，見圖1。

圖1 EZH2（A）和Fascin（B）的Kaplan-Meier生存曲線

3 討論

EZH2作為一種組蛋白，具有甲基轉(zhuǎn)移酶活性，能夠通過抑制其下游靶基因轉(zhuǎn)錄來調(diào)節(jié)干細(xì)胞自我更新[5]。Fascin 蛋白是一類結(jié)構(gòu)獨特且進(jìn)化保守的細(xì)胞骨架蛋白，能夠參與細(xì)胞膜突起及包胞漿微絲束的形成進(jìn)而增加細(xì)胞運動性[6]。近年來研究表明，EZH2、Fascin 蛋白在許多惡性腫瘤中均呈陽性，正常組織中為陰性表達(dá)，可能與腫瘤的侵襲性和預(yù)后相關(guān)，如食管鱗狀細(xì)胞癌[7]、胃癌[8]、結(jié)腸癌[9]等。KIM等[10]通過回顧EZH2在多種腫瘤中的發(fā)生機制，發(fā)現(xiàn)EZH2基因可明顯抑制腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移殖。TSAI 等[11]觀察50 例壺腹部胰腺癌中Fascin 蛋白表達(dá)水平，結(jié)果表明Fascin 免疫染色的強度與患者的腫瘤惡性程度呈正相關(guān)，與患者的生存率呈負(fù)相關(guān)。

本研究中，侵襲性垂體腺瘤組患者EZH2、Fascin陽性率明顯高于對照組?？赡苁羌?xì)胞中EZH2、Fascin蛋白參與的一系列活動導(dǎo)致細(xì)胞膜突起、細(xì)胞間連接喪失，促使瘤組織侵襲能力和遷移能力增強。

多因素分析得出，腫瘤大小、EZH2、Fascin蛋白水平是影響侵襲性垂體腺瘤患者預(yù)后的獨立因素，與既往研究一致[12]。SASAKI 等[13]用免疫組織化方法證實膽管癌患者中EZH2 水平過度表達(dá)。ZHIYUAN 等[14]研究表明Fascin水平的增加與垂體腺瘤的侵襲性密切相關(guān)，可用于垂體腺瘤的診斷和預(yù)測。除此之外，還有研究發(fā)現(xiàn)EZH2、Fascin蛋白陽性表達(dá)是侵襲性垂體腺瘤發(fā)展的獨立危險因素[15]，可能是因為侵襲性垂體腺瘤細(xì)胞中，EZH2 蛋白的陽性表達(dá)導(dǎo)致正常細(xì)胞生長失控，垂體腺瘤細(xì)胞增殖[16]，而Fascin蛋白的陽性表達(dá)則使NF-κB活性上調(diào)，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)的降解和基底膜的破壞，增強腫瘤細(xì)胞的侵襲性[17]。本研究結(jié)果顯示，EZH2、Fascin蛋白陰性表達(dá)患者的3年生存率顯著高于EZH2、Fascin 蛋白陽性表達(dá)，進(jìn)一步說明高EZH2、Fascin蛋白表達(dá)水平預(yù)示患者預(yù)后不良。

綜上所述，EZH2、Fascin 蛋白陽性表達(dá)變化可作為判斷侵襲性垂體腺瘤發(fā)生、發(fā)展的重要指標(biāo)，不僅能夠影響患者的短期生存率，而且對侵襲性垂體腺瘤患者具有較好的預(yù)后預(yù)測價值，可作為侵襲性垂體腺瘤患者預(yù)后不良的分子標(biāo)志物。